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CENTRO UNIVERSITÁRIO DO ESTADO DO PARÁ ÁREA DAS CIÊNCIAS BIOLÓGICAS E DA SAÚDE CURSO DE BACHARELADO EM FARMÁCIA MEIOS DE CULTURA ALUNOS SUB/B: Laise Rodrigues Leiliane Costa Luan Lucilene Gomes Suellen Costa Thays Lira Professora: Graça Carvalho Datas das aulas: 13/08/2018 E 20/08/2018 Data de entrega: 27/08/2018 BELÉM-PA 2018 INTRODUÇÃO Os meios de culturas são definidos como uma mistura de nutrientes, incluindo fontes de carbono, nitrogênio, sais minerais e água, que propiciam o crescimento in vitro de bactérias, esses meios podem ser sólidos, líquidos ou semissólidos. Os meios líquidos são os caldos, desprovidos de ágar, já os semissólidos são aqueles que apresentam em sua composição até 1% de ágar e o meios sólidos são aqueles que apresentam em sua composição 1,5 a 2,5% de ágar. Toda a manipulação de culturas bacterianas, meios e instrumental necessário deve ser feita seguindo procedimentos básicos de assepsia e antissepsia, visando evitar qualquer tipo de contaminação. Além dos nutrientes e condições ambientais favoráveis para esse cultivo, outros critérios devem ser considerados. Diferentes microrganismos possuem diferentes necessidades, por isso o meio de cultura é adaptado para satisfazer essas necessidades, utilizando nutrientes específicos dependendo do microrganismo de interesse. Além desses fatores, deve ser levado em conta o pH e a quantidade de oxigênio ou mesmo a sua ausência. O Caldo Brain Heart Infusion (BHI), de pH 7,4 é um meio derivado de nutrientes, adequado para a cultura de microorganismos, incluindo bactérias, leveduras e fungos filamentosos, também é usado na preparação do inóculo para teste de susceptibilidade aos antimicrobianos, para teste de crescimento bacteriano a 42°C e 44°C e para a realização de teste de coagulase em tubo. O BHI deriva os seus nutrientes dos componentes da infusão de cérebro-coração, da peptona e da dextrose. As peptonas e as infusões são fontes de nitrogênio orgânico, carbono, enxofre e vitaminas. A glicose é a fonte de hidratos de carbono que os microorganismos utilizam por ação fermentadora. O meio é tamponado através da utilização do fosfato dissódico. A dextrose é um carboidrato que os microrganismos utilizam para fermentação, o cloreto de sódio - aumenta a pressão osmótica e mantém a isotonia do meio,ou seja, mantém o equilíbrio osmótico. A cor original do meio é amarelo claro, límpido e se houver turvação é porque há crescimento bacteriano, logo é positivo, e na ausência de turvação o resultado é negativo. OBJETIVO: Conhecer os principais meios de cultura empregados em laboratórios de Microbiologia. MATERIAIS Reagentes: Caldo Brain Heart Infusion Broth (BHI), água destilada q.s.p. Vidraria e Acessórios: Erlenmeyer, Tubos de ensaio, autoclave, proveta, pipeta, Becker, isqueiro, balança analítica, bico de bussen, capela, placa de petri. PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL 1º Parte: Determinou-se o volume do BHI, após os cálculos pesou-se 1,17g de BHI, que foi hidratado com 30mL de água destilada e distribuídos em 10 tubos de ensaio contendo 3mL cada, tampando-os em seguida. Após isso, os tubos de ensaios foram levados para a autoclave durante 15 minutos a 1 atm, que corresponde 121°C, para serem esterilizados. 2º Parte: Na capela, foi adicionado de 5mL a 10mL de sangue desfibrinado no Erlenmeyer contendo o meio Ágar, sendo eles o Ágar sangue que foi aquecido a 45°C e o Ágar chocolate que foi aquecido a 85° o que faz com que as hemácias lisem, liberando hemina e hematina, compostos fundamentais para o crescimento dos microrganismos exigentes, e o meio apresentou uma cor castanho escuro (chocolate), em seguida foi aceso o bico de Bunsen para flambar o Erlenmeyer antes e depois da distribuição do meio na placa de Petri. Após a distribuição deixou-se as placas na capela com a luz ultra violeta ligada durante 5 minutos para a verificação de esterilidade. Figura 1: Preparação dos meios de cultura. Fonte: Própria. Figura 2: Meio de Cultura Ágar Chocolate. Fonte: Própria. RESULTADOS Calculamos a massa do BHI para a pesagem, obtendo-se o respectivo resultado: - 37g ---------------- 1000ml X--------------------- 30ml X = 1,11g --- Peso do pó a ser pesado. OBS: Na balança pesamos 1,17g. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS http://www.splabor.com.br/arquivos/Ebook%20%20Meios%20de%20Cultura.pdf http://www3.uma.pt/gcosta/docs/microbiology/prat2.pdf
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