Extração de ácidos nucleicos

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Extração de ácidos nucleicos
O DNA/RNA pode ser utilizado tanto para pesquisa quanto para diagnostico, mas para isso é preciso que eles estejam limpos.
Extração de DNA: possui três etapas.
Primeira etapa: Lise das células.
Nessa etapa a célula é banhada em uma solução de pH levemente alcalina contendo EDTA e um detergente. 
O EDTA é um agente quelante, e age quelando o magnésio e o cálcio. Ao quelar o magnésio o EDTA faz com que ele deixe de ser um co-fator e que pare a ação da DNase, e ao quelar o cálcio facilita a ação do detergente na quebra da membrana. 
Após a quebra, o extrato celular é levado para uma centrifuga. Essa centrifugação faz com que o resto de membrana fique sedimentado e que na solução tenha apenas DNA, RNA e proteínas, e necessário também que ocorra em um centrifuga refrigerada para que o calor liberado entre o choque de moléculas seja amenizado.
Segunda etapa: Desproteinização.
O solvente utilizado para separação das moléculas (proteína, lipídeo, etc) precisa ser uma mistura de fenol com clorofórmio, pois ela preserva o DNA. Pode também adicionar ao solvente enzimas como protease, para facilitar na quebra, e RNases caso queira extrair apenas o DNA.
Novamente se faz uma centrifugação refrigerada e pode-se repetir até três vezes caso queira DNA bastante limpos. Após essa centrifugação o tubo fica separado em duas camadas: uma orgânica onde se encontra as moléculas e uma aquosa onde se encontra o apenas DNA ou o DNA mais RNA.
Terceira etapa: concentração de DNA.
Adiciona álcool, o mais puro possível, no tubo e faz novamente uma centrifugação. Após essa centrifugação uma precipitação branca aparecerá o tubo e lá estarão os fragmentos de DNA.
Sempre há perda e quebra de DNA no processo de extração. 
Solubilização do DNA: faz com que o DNA se solte da parede do tubo. Caso queira uma extração mais imediata adiciona ao tubo 8mM de NaOH e caso não queria uma extração imediata pode adicionar água e deixar na geladeira de um dia para o outro a quatro graus Celsius.
Estocagem do DNA: em água a quatro graus celsius pode durar até uma semana e a álcool em -70C até um ano.
Quantificação do DNA:
 
DNA integro é aquele mais próximo do DNA encontrado no interior da célula e não necessariamente o DNA mais limpo
Existem dois outros tipos de extração de DNA que se pode utilizar:
A extração com CTAB é utilizada quando há uma grande quantidade de células. Nela o CTAB se liga ao DNA/RNA e eles são precipitados, já os separando das moléculas.
Outro método é o com tiocianato de guanidina. Nesse método as partículas de DNA se ligam a moléculas de sílica e passam por uma purificação por cromatografia. 
Extração do RNA:
A extração do RNA ocorre com as mesmas etapas da extração do DNA, o que difere uma da outra é que o equipamento precisa esta totalmente isenta de RNase. E a solução inicial precisa ser levemente ácida. O β-mercaptoetanol é usado como inibidor de RNase.
Solubilização do RNA: coloca em água a 4C de um dia para o outro
Estocagem do RNA: em etanol a -20C por um mes ou em etanol a -70C por alguns anos