bioquimica

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ELETROFORESE
ALUNOS: Ana Cláudia Lima, Kássia Cibelle, Wellensson Bruno, Tereza Praciano, Manuella Torres.
PROF: Wanderlan Pontes
 
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HISTÓRICO
Essa técnica foi empregada pela primeira vez em 1937 pelo bioquímico Arne Tisélius e permite realizar a separação de macromoléculas como DNA, RNA, proteínas e enzimas com tamanhos e cargas diferentes.
Deriva do grego elektronphorese (conduzida pela eletricidade), refere-se ao deslocamento de biomoléculas numa matriz sólida ( agarose ou poliacrilamida) pela ação de um campo elétrico.
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INTRODUÇÃO
A eletroforese é uma técnica baseada na separação de partículas, que ocorre quando as mesmas são dissolvidas ou suspensas em um eletrólito, através do qual uma corrente elétrica é aplicada. 
A eletroforese é muito utilizada e tem papel importante na análise laboratorial e também em pesquisas científicas.
 	
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O fluxo migratório é determinado pelo peso molecular, na qual moléculas de menor peso migram mais rápido que as de maior peso, formando as bandas características que serão visualizadas posteriormente.
Migração dos fragmentos conforme peso molecular e formação das bandas
INTRODUÇÃO
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Visualização das bandas
INTRODUÇÃO
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TIPOS DE ELETROFORESE
1. Eletroforese em Gel:
1.1 Em Gel de Agarose;
1.2 Em gel de poliacrilamida.
2. Eletroforese Capilar:
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Eletroforese em Gel
Eletroforese em gel é eficiente em promover a separação de partículas de acordo com o seu tamanho.
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Eletroforese em Gel
Em Gel de Agarose: Usado para separação de partículas relativamente pequenas ou grandes.
A agarose é um polissacarídeo composto por agar e pectina. Para preparar este gel, simplesmente faz-se a mistura entre o pó de agarose e solução tampão.
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Eletroforese em Gel
Em Gel de poliacrilamida é usado para separação de partículas muito pequenas.
A poliacrilamida é uma mistura de dois polímeros, acrilamida e bisacrilamida. Para preparar este gel, basta adicionar os dois polímeros nas concentrações desejadas em um suporte de vidro e na presença de um catalisador.
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Eletroforese Capilar
A eletroforese capilar é definida como o transporte, em solução eletrolítica, de compostos carregados eletricamente sob a influência de um campo elétrico, no qual a separação entre dois solutos ocorre de acordo com diferenças entre suas mobilidades eletroforéticas.
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Eletroforese capilar
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Eletroforese Capilar x Gel
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VANTAGENS/DESVANTAGENS
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· Agarose
· Cuba e fonte de eletroforese
· Tampão de eletroforese
· Marcador de peso molecular
· Corante fluorescente – corante safer ou brometo de etídio
· Transiluminador UV ou LED
EQUIPAMENTOS E REAGENTES USADOS 
NA ELETROFORESE
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TAMPÕES
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ETAPAS
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A eletroforese é utilizada em inúmeros processos de biologia molecular, entre eles:
Ciência forense
Genética
Microbiologia
Bioquímica
APLICAÇÕES DA ELETROFORESE
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INTERFERENTES
Presença de Corantes: a presença de corantes nos ácidos nucléicos, como o brometo de etídio, reduz em cerca de 15% a sua Mobilidade eletroforética.
Peso Molecular: moléculas com baixo peso molecular migram mais rapidamente que as moléculas mais pesadas.
Conformação do Ácido Nucléico: moléculas lineares migram mais lentamente que as moléculas circulares.
Composição do Ácido Nucléico: moléculas do mesmo tamanho compostas por diferentes bases apresentam conformações (dobramentos) diferentes.
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INTERFERENTES
Voltagem: a voltagem ideal a ser aplicada é de 5 V/cm, medido de eletrodo ao outro.
Composições dos Tampões de Corrida: forças iônicas elevadas aumentam a temperatura do sistema devido a uma maior condutância elétrica.
Temperatura: em função da voltagem aplicada, a temperatura pode elevar-se, de modo a interferir na velocidade de migração das moléculas.
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TIPOS DE EXAMES
Eletroforese das proteínas;
Eletroforese das hemoglobinas
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TIPOS DE EXAMES
Eletroforese das proteínas:
Diagnóstico diferencial de patologias;
 Avaliação de alterações hematológicas no diagnóstico de processos inflamatórios; 
Investigação de anormalidades proteicas presentes no sangue;
 Taxas elevadas de proteínas plasmáticas é devido a hemoconcentração ou do aumento da produção de globulinas.
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TIPOS DE EXAMES
ALBUMINA
responsável por cerca de 80% de sua pressão oncótica;
transporte de substâncias: bilirrubina, o cálcio, os hormônios, os fármacos etc;
 albumina ocorre por falha na síntese no fígado, por perda renal, intestinal ou cutânea;
 albumina ocorre na desitratação ou por estase venosa excessiva.
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TIPOS DE EXAMES
 ALFA-1-GLOBULIINA:
Atua na inibição de enzimas proteolíticas.
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TIPOS DE EXAMES
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TIPOS DE EXAMES
gamaglobulina é a fração eletroforética de maior interesse clínico. 
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TIPOS DE EXAMES
Eletroforese da hemoglobina é usado para medir e identificar os diferentes tipos de hemoglobina no sangue circulante;
Auxiliar no diagnóstico de talassemia ou de anemia falciforme;
Bastante utilizado em pré-natal;
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FIM
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