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XII JORNADA DE ENSINO, PESQUISA E EXTENSÃO – JEPEX 2012 – UFRPE: Recife, 26 a 30 de novembro. SOLUBILIZAÇÃO DE FOSTATO INORGÂNICO IN VITRO POR BACTERIAS ASSOCIADAS À CANA-DE-AÇÚCAR NA PRESENÇA DO PESTICIDA FIPRONIL Adijailton José de Souza 1 , Bruno Augusto Prohmann Tschoeke 2 , GilkaTalita Silva 3 , Danubia Ramos Moreira de Lima 4 , Maria Camila de Barros Silva Leite 5 , Fernando José Freire 6 , Júlia Kuklinsky-Sobral 7 1Discente de Graduação em Agronomia, Laboratório de Genética e Biotecnologia Microbiana (LGBM), Unidade Acadêmica de Garanhuns (UAG), Universidade Federal Rural de Pernambuco (UFRPE), Av. Bom Pastor, s/n, Boa Vista, Garanhuns, PE, CEP 55296-901. E-mail: adjailtonjose@hotmail.com; 2Discente de Graduação em Agronomia - Bolsista PET-Biotecnologia, LGBM/UAG/UFRPE; 3Discente de graduação em Zootecnia - Bolsista PET-Biotecnologia, LGBM/UAG/UFRPE; 4Doutorando do programa de Pós-Graduação em Ciência do Solo, UFRPE, LGBM; 5Mestranda do programa de Pós-Graduação em Produção Agrícola, LGBM/UAG/UFRPE; 6Professor Adjunto, Departamento de Agronomia, UFRPE, Rua Dom Manoel de Medeiros, Dois Irmãos, Recife, PE, 52171-900; 7Professora Adjunta, Tutora Bolsista do Grupo PET Biotecnologia, LGBM/UAG/UFRPE Apoio financeiro: FACEPE e CNPq. Introdução A atividade canavieira tem enorme representatividade no cenário econômico nacional, destaque para a produção de açúcar e de álcool, tanto para abastecimento interno como para exportação, fazendo dessa uma atividade bastante rentável para o país. A cana-de-açúcar requer boas condições para seu desenvolvimento e rendimento produtivo, sendo de suma importância neste aspecto a suplementação de fósforo, que é um macronutriente essencial, logo após o nitrogênio, podendo vir a ser um fator limitante ao crescimento da planta (Inui, 2009). Além das exigências nutricionais, a cultura da cana, também necessita de um bom manejo de pragas, sendo o mais empregado controle químico das pragas que acometem essa cultura. O fipronil é um inseticida de amplo espectro, é largamente utilizado durante pré-plantio da cana, na Zona da Mata Pernambucana, visando o controle dos cupins, pois atacam os toletes impedindo a brotação, causado falhas no estande. Almeida et al. (1989) verificaram que os cupins dos gêneros Cornitermes, Procornitermes, Syntermes e Heterotermes são os que ocorrem com mais frequência nos canaviais, porém os mais maléficos são Procornitermes e Heterotermes. As alterações na microbiologia do solo ocasionadas pelo uso indiscriminado de inseticidas e outros agroquímicos requerem modificações nas populações de outros organismos, que ao longo da cadeia trófica interfere em processos vitais do solo como a decomposição de matéria orgânica e a ciclagem de nutrientes, além de criar resistência por parte da praga ao princípio ativo do agrotóxico, o que acarreta enormes impactos, levando o sistema agrícola à maior dependência por fertilizantes e agrotóxicos (Souza et al., 2011). De acordo com Silva et al. (2011), os micro-organismos do solo são responsáveis direta ou indiretamente, por diversos processos biológicos de importância para o funcionamento e capacidade produtiva dos ecossistemas terrestres, e ainda que atividade positiva desses micro-organismos na rizosfera geralmente traz vantagens tanto para planta como para a atividade do microbiana. Estudos da interação bactéria-solo-planta são necessários, pois possibilitam fornecer subsídios para o uso na produção agrícola e para o surgimento de técnicas alternativas que venham ater viabilidade financeira e sustentabilidade ambiental (Lima, 2012). Neste sentido, o trabalho teve por objetivo avaliar o potencial de bactérias associadas à Saccharum ssp. quanto ao potencial solubilização de fosfato inorgânico in vitro sob diferentes concentrações de fipronil. Material e métodos O experimento foi realizado nas dependências do Laboratório de Genética e Biotecnologia Microbiana – LBGM, na Unidade Acadêmica de Garanhuns, Universidade Federal Rural de Pernambuco – UAG-UFRPE, para tanto foram utilizados seis isolados bacterianos associadas à Saccharum ssp. pertencentes a coleção do LGBM. As linhagens bacterianas foram identificadas, segundo (Lima, 2012), como pertencentes aos gêneros Burkholderia (UAGC 857, UAGC 885), Pantoea (UAGC 858), Erwinia (UAGC 865), Stenotrophomonas (UAGC 869) e Enterobacter (UAGC 903). As bactérias foram inoculadas em meio de cultura sólido, rico em fosfato de cálcio (10g/L glicose; 5 g/L de NH4Cl; 1 g/L de MgSO4.7H2O; 4 g/L de CaHPO4; 15 g/L de Ágar; pH 7,2) e acrescido de diferentes concentrações do pesticida fipronil: 0, 100, 200 e 400 g.ha -1 , incubadas a 28°C por cinco dias. A formação de área clara, halo, ao redor das colônias indicou a solubilização do fosfato. Todo o experimento foi realizado em triplicata e para os isolados que apresentaram halo visível, foi estimado o índice de solubilização (IS), que expressa à relação do diâmetro médio do halo de solubilização e o diâmetro médio do halo da colônia. E ainda com essa relação pode-se classificar o IS como baixo (IS<2), médio (2≤IS<4) e Alto (IS>4). XII JORNADA DE ENSINO, PESQUISA E EXTENSÃO – JEPEX 2012 – UFRPE: Recife, 26 a 30 de novembro. Resultados e Discussão Foi observado que todas as linhagens bacterianas testadas quanto ao potencial de solubilização de fosfato inorgânico sob diferentes concentrações do pesticida fipronil se mostraram positivas ao teste (figura 1). Os índices de solubilização se mostraram em sua maioria, dentro dos tratamentos, como a classificação de médio (2 >IS<4), apenas uma das linhagens possuiu um índice de solubilização considerado alto, a UAGC 895 (Burkholderia), na concentração de campo 200 g.ha -1 de fipronil. Para o índice de solubilização considerado baixo (IS<2), a frequência de linhagens com esse índice, ficou distribuída entre os tratamentos de 100 g.ha -1 , linhagens UAGC 867, UAGC 869, UAGC 895 e UAGC 903, enquanto nas concentrações de 200 g.ha -1 e 400 g.ha -1 do inseticida fipronil, os índices baixos de solubilização se distribuíram respectivamente UAGC 867 e UAGC 858 e UAGC 867 (figura 2). Em trabalho semelhante, Lima (2012), verificou que o isolado UAGC 903, se mostrou totalmente inibido quanto à capacidade de fixação biológica de nitrogênio (FBN), nas concentrações de 100, 200 e 400 g.ha -1 do inseticida fipronil, indicando que esse pesticida exerceu efeito negativo sob a FBN. Já quanto à capacidade de solubilização de fosfato inorgânico in vitro não se observou efeito, esses mesmos efeitos inibitórios não foram observados por essas linhagens, mas o tratamento que influenciou mais na solubilização de fosfato foi o de concentração 100 g.ha -1 e o tratamento que apresentou o um maior destaque quanto aos índices médios e altos foi a concentrações de campo. Resultados semelhantes foram encontrados por Souza et al. (2012), trabalhando com isolados bacterianos associados ao solo cultivado com cana-de-açúcar e tratado com pesticida fipronil. Para tanto, esses resultados permitem inferir que o pesticida fipronil, não exerceu efeitos negativos nos isolados testados, porém isso a curto prazo, tem em vista que ainda serem mais estudos, que avalie os efeitos nocivos a comunidade bacteriana do solo capaz de disponibilizar o fosfato insolúvel para as plantas, promovendo o crescimento vegetal. Agradecimentos Agradecemos ao CNPq e a FACEPE pelo apoio financeiro. Referências ALMEIDA, L.C.; PETRI , J.L.; IGLESSIAS, A.C. Flutuação populacional e avaliação de danos por cupins em parcelas tratadas com diferentes inseticida. Bol. Téc. Copersucar, v.46, p.37-43, 1989. INUI,R. N. Isolamento e identificação de bactérias solubilizadoras de fósforo e produtoras de auxinas em solo com cana-de-açúcar. Jaboticabal, Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias do Câmpus de Jaboticabal – UNESP, 2009. 78p. (Dissertação de Mestrado). LIMA, D. R. M. Bactérias fixadoras de nitrogênio associadas a plantas de cana-de-açúcar cultivadas em Pernambuco. Recife: Universidade Federal Rural de Pernambuco, 2012. 110p. Dissertação de mestrado. SOUZA, A.J. TSCHOEKE, B.A.P., RAMOS, A.P.S., FREIRE, F.J., SOBRAL, J.K. Influência do inseticida fipronil sobre a comunidade bacteriana do solo cultivado com cana-de-açucar em Pernambuco. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE CIÊNCIA DO SOLO, 33., Uberlândia, 2011. Anais... Uberlândia, Sociedade Brasileira de Ciencias do Solo. SOUZA, A. J.; TSCHOEKE, B. A. P.; SILVA, M. C.B.; LIMA, D. R. M.; SILVA, J. A. T.; SANTOS, C. G.G.; FREIRE, J. F.; KUKLINKSY-SOBRAL, J. Solubilização de Fosfato Inorgânico na Presença do Pesticida Fipronil por Bactérias Isoladas de Solo Cultivado com Cana-de-açúcar. In: fertbio 2012, Maceió. Alogoas. SILVA, A. C. S.; CHAGAS JUNIOR, A. F.; OLIVEIRA, L. A.; CHAGAS, L.F. B. Ocorrência de bactérias solubilizadoras de fosfato nas raízes de plantas de importância econômica em Manaus e Rio Preto da Eva, Amazonas. Journal of Biotechnology and Biodiversity. Vol. 2, N. 1: p37-42, 2011. XII JORNADA DE ENSINO, PESQUISA E EXTENSÃO – JEPEX 2012 – UFRPE: Recife, 26 a 30 de novembro. Figura 1 – Visualização de linhagens positivas em meio rico com fosfato de cálcio inorgânico, indicação a positividade pela formação de halo translucido envolta da colônia. Figura 2. Índice de Solubilização (IS) das bactérias UAGC 858, UAGC 867, UAGC 869, UAGC 890, UAGC 895 e UAGC 903 em meio de cultura rico em fosfato de cálcio e acrescentado com diferentes concentrações do pesticida fipronil: 0, 100, 200 e 400 g.ha-1. As barras indicam o desvio padrão da média de três repetições.
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