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1 Francisca Hevelyn Costa Biologia Molecular e Celular Nº 2013414 Esfregaço sanguíneo e observação das células sanguíneas Resumo O sangue é constituído por glóbulos brancos, vermelhos, plaquetas e plasma. Entre os glóbulos brancos temos os leucócitos e pelos glóbulos vermelhos temos os eritrócitos. O volume total de sangue em uma pessoa normal chega a 7% do seu peso corporal. Para analisarmos essas células, temos um procedimento chamado esfregaço sanguíneo, em que consiste numa gota de sangue em uma lâmina com um corante específico e após visualização no microscópio ótico observa-se essas células. Durante a aula foi feito um esfregaço do sangue para observação das células sanguíneas, no qual foi encontrado linfócitos, monócitos, eosinófilos, neutrófilos, eritrócitos e plaquetas. Introdução O sangue é o líquido contido num compartimento fechado, o aparelho circulatório, que o mantém em movimento regular e unidirecional, devido essencialmente às contrações rítmicas do coração. O volume total de sangue numa pessoa normal é de aproximadamente 7% do peso corporal. (Carneiro, 2004) O sangue é formado pelos glóbulos sanguíneos e pelo plasma, parte líquida na qual estão suspensos os glóbulos sanguíneos. Os glóbulos sanguíneos são os eritrócitos, plaquetas e diversos tipos de leucócitos e glóbulos brancos. As células do sangue são geralmente estudadas em esfregaços preparados pelo espalhamento de uma gota do sangue sobre uma lâmina, onde as células ficam estiradas e separadas, o que facilita a observação pelo microscópio ótico. (Autor desconhecido, sem ano) Esses esfregaços são corados com misturas especiais que contêm eosina (corante ácido), azul- de-metileno (corante básico) e azures (corantes básicos de cor púrpura). São utilizadas as misturas de Leishman, Wright-Giemsa, que foram designadas com os nomes dos pesquisadores que as descobriram. Com essas misturas de corantes, as estruturas acidófilas ficam na cor rosa, as basófilas e azul e as que fixam com azures, ficam na cor púrpura. (Carneiro, 2004) Os eritrócitos são anucleados, têm a forma de disco bicôncavo e contêm grande quantidade de hemoglobina, uma proteína transportadora de oxigênio. Devido a sua forma, proporciona grande superfície em relação ao volume, o que facilita as trocas de gases. São flexíveis e passam facilmente pelas bifurcações dos capilares, onde sofrem deformações temporárias, mas não se rompem. Por serem ricas em hemoglobinas, os eritrócitos são acidófilos e se coram pela eosina. Os leucócitos são incolores, de forma esférica quando em suspensão no sangue, e participam das defesas celulares e imunocelulares do organismo. São classificados como granulócitos e agranulócitos. Os granulócitos têm núcleo de forma irregular e mostram no citosol grânulos específicos que, ao microscópio eletrônico, aparecem envoltos por membrana. De acordo com a afinidade tintorial dos grânulos específicos, distinguem-se três tipos de granulócitos: neutrófilos, eosinófilos e basófilos. Os agranulócitos possuem núcleo de forma irregular e o citosol não possui granulações específicas, podendo apresentar grânulos azurófilos e inespecíficos. Dentre eles estão os linfócitos e monócitos. 2 Os neutrófilos têm núcleo formado por dois a cinco lóbulos ligados entre si por finas pontes de cromatina. O citoplasma do neutrófilo apresenta principalmente dois tipos de granulações: grânulos específicos e azurófilos. Os eosinófilos são muito menos numerosos que os neutrófilos. Têm aproximadamente o mesmo tamanho que os neutrófilos. A sua principal característica de identificação é a presença de granulações ovóides que se coram pela eosina e o seu núcleo bilobulado. Os basófilos têm núcleo volumoso, com forma retorcida e irregular, geralmente com aspecto da letra S. O citosol é carregado de grânulos maiores do que os dos outros granulócitos, os quais muitas vezes escurem o núcleo. Os basófilos constituem menos de 1% dos leucócitos do sangue, por isso, são difíceis de encontrar nos esfregaços. Os linfócitos têm o núcleo esféricos, sua cromatina se dispõe em grumos grosseiros, de modo que o núcleo aparece escuro nos preparados usuais, permitindo a sua fácil identificação. Seu citoplasma é escasso, aparecendo nos esfregaços como um anel fino em volta do núcleo. Apresenta basofilia discreta, corando-se em azul-claro. Os monócitos têm o núcleo ovoide, em forma de rim ou de ferradura, geralmente excêntrico. A cromatina aparece em arranjo mais frouxo e delicado do que nos linfócitos, sendo esta uma das características mais constantes do monócito. O núcleo do monócito contêm dois ou três nucléolos, que algumas vezes podem ser vistos nos esfregaços. As plaquetas são corpúsculos anucleados, com forma de disco, derivados de células gigantes e poliploides da medula óssea, os megalocariócitos. As plaquetas promovem a coagulação do sangue e auxiliam a reparação da parede dos vasos sanguíneos. Materiais e Métodos Pegou-se uma lâmina e colocou-se um pouco de etanol para esterelizá-la. Em seguida, lancetou-se o dedo anular para a recolha de uma gota do sangue. Colocou-se a gota de sangue na borda da lâmina com uma outra lâmina espalhou-se a gota em um ângulo de 45º para o meio da lâmina e esperou-se secar. Em seguida, colocou-se 3 gotas do corante Wright-Giemsa, e esperou-se 3 minutos. A seguir colocou-se umas gotas de água destilada, homogeneizou-se e aguardou-se mais 3 minutos. Em seguida, deixou-se escorrer o excesso de água e esperou secar. Prosseguiu-se à observação no microscópio ótico, começando pela objetiva de 5x, depois a de 10x, em seguida a de 40x e finalmente, com o auxílio do óleo de imersão, observou- se com a objetiva de 100x. Resultados Os resultados do experimento foram satisfatórios, mesmo não conseguindo a visualização dos basófilos, pois possuem pequena percentagem no sangue, conseguiu-se a identificação de eosinófilos, monócitos, linfócitos, neutrófilos, eritrócitos e plaquetas. Nos neutrófilos é possível a observação do núcleo segmentado e de seu citoplasma bem definido. Os eosinófilos visualiza-se os grânulos alaranjados e o seu núcleo bilobulado. Os monócitos apresenta um núcleo bem próximo de uma das extremidades da célula em forma de rim e uma grande parte de citoplasma. Os linfócitos possuem um núcleo que ocupa quase todo citoplasma celular e são fáceis de identificar. Os eritrócitos aparecem em grande quantidade, tem a forma arredondada e não possuem núcleo. As plaquetas aparecem como fragmentos e são as menores partículas encontradas. 3 Figura 1: Visualização de Neutrófilo, Linfócito e Eosinófilo. Objetiva de 100, ampliação 1000x Figura 2: Visualização de Eosinófilo e Linfócito. Objetiva de 100, ampliação 1000x Figura 3: Visualização de 3 linfócitos e 1 neutrófilo. Objetiva de 100, ampliação 1000x Figura 4: Visualização de 1 Monócito e 1 Neutrófilo. Objetiva de 100, ampliação 1000x Figura 5: Visualização de 2 Neutrófilos. 1 Linfócito e 1 Eosinófilo. Objetiva de 100, ampliação 1000x 4 Figura 6: Visualização de 3 Neutrófilos e 1 Monócito. Objetiva de 100, ampliação 1000x Figura 7: Visualização de 1 Neutrófilo e 2 Eosinófilos. Objetiva de 100, ampliação 1000x Figura 8: Visualização de um Eosinófilo. Objetiva de 100, ampliação 1000x Figura 9: Visualização de um Monócito. Objetiva de 100, ampliação 1000x 5 Discussão A partir do trabalho realizado, foi possível perceber que é preciso de técnica e prática para que o esfregaço sanguíneo seja satisfatório, e que os corantes são de fundamental importância para a visualização dos leucócitos. Visualizando várias lâminas foi observado quea quantidade de linfócitos e neutrófilos presentes no sangue é bem maior que a de monócitos e eosinófilos, e que os basófilos são os mais difíceis de ser encontrados devido à sua pequena percentagem e sua ligação com os processos alérgicos. Bibliografia Artigo: Autor desconhecido, sem ano. Confecção de um esfregaço sanguíneo ideal. Disponível em: http://goo.gl/kSUI2z, acessado em 21/03/2015, às 17:16 Livro: Autores: Carneiro, José e Junqueiro, Luiz. C., 2004. Histologia Básica. Editora: Guanabara Koogan. (p 223-238)
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