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MÉTODOS DE MELHORAMENTO DE FRUTÍFERAS Enologia – Dom Pedrito Introdução Início rudimentar: 12.000 anos, seleção de plantas mais adequadas às necessidades do homem. Melhoramento de Plantas: “ciência e arte de manipulação gênica de plantas, de maneira a torná-las mais úteis ao homem”. Ciência: depende dos conhecimentos práticos e teóricos nos campos da Genética, Estatística, Agronomia, Fitopatologia, Entomologia, etc. Arte: depende da intuição e experiência do melhorista. Modo de reprodução Reprodução Sexuada: Autógamas: reproduzem-se predominantemente por autofecundação. A conseqüência genética deste tipo de reprodução, após várias gerações, é a homozigose. Quando esta é alcançada, os descendentes de uma planta não diferem entre si. Alógamas: reproduzem-se predominantemente por fecundação cruzada. Os descendentes geralmente são distintos entre si e diferem dos pais que os originaram, em conseqüência da segregação genética. Variabilidade Genética É fundamental para que ocorra a evolução das espécies. É nas populações com variabilidade genética que se procede à seleção de plantas com características de interesse agronômico, como frutos maiores e mais saborosos, resistência a doenças e pragas. Propagação Vegetativa A maioria das frutíferas são propagadas vegetativamente, por meio de enxertia, estaquia ou outros métodos. As plantas enxertadas são compostas de pelo menos dois genótipos: Variedade copa Porta-enxerto Características Copa: Deverá apresentar características adequadas para a produção, comercialização, processamento e consumo final. Porta-enxerto: Deverá apresentar adaptações às condições de solo e dar sustentação à parte aérea, à qual deverá proporcionar porte adequado, alta produção e qualidade de frutos. Características Filtro (interenxerto): Reduzir o vigor da copa, facilitando o manejo Contornar possíveis problemas de incompatibilidade entre o porta-enxerto e a copa Acelerar o início da frutificação Aumentar a produtividade Melhorar a qualidade dos frutos Enxertia Possibilita a reunião de genótipos distintos numa mesma planta, proporcionando redução de porte das plantas e maior precocidade de produção, sem que haja recombinação genética. Porta-enxertos propagados assexuadamente (vegetativamente): estaquia, micropropagação Micropropagação: comercial, agregada aos viveiros, material de propagação livre de doenças ou acelerar métodos convencionais de propagação vegetativa. Interesse O melhoramento pode ser direcionado à planta, apenas à parte aérea, no caso de plantas propagadas por enxertia, ou ao porta-enxerto. Muitas vezes a produção é baseada em poucos cultivares amplamente conhecidos e o mercado resiste a mudanças no padrão conhecido da fruta (uva vinífera). Nesses casos, a obtenção de variedades que tenham frutos semelhantes aos das variedades consideradas padrão facilita sua aceitação. Objetivos do melhoramento Os objetivos de um programa de melhoramento são definidos em função das necessidades que têm os diversos agentes que compõem a cadeia produtiva, além do meio ambiente. Do ponto de vista dos produtores, é importante desenvolver plantas com boa adaptação a condições de clima e solo, com alta produção, resistentes a pragas e doenças e que se adaptem bem ao cultivo, permitindo razoável nível de mecanização. Objetivos do melhoramento Do ponto de vista dos comerciantes é importante que as frutas sejam de alta qualidade, atrativas, resistentes ao transporte e que possam ser armazenadas, ou que ao menos tenham boa conservação, durante o período de comercialização. Para as indústrias de processamento, as quais têm necessidades específicas para cada produto, as características físicas e químicas da fruta são de grande importância. Objetivos do melhoramento Aos consumidores interessa poder adquirir frutas atrativas, saborosas, nutritivas e saudáveis, durante a maior parte do ano. Variedades cujo processo produtivo tenha o mínimo impacto ambiental negativo, decorrente da utilização de insumos químicos, são cada vez mais importantes para a humanidade. Objetivos do melhoramento Para que o melhoramento possa ter sucesso, é necessário que haja variabilidade genética relativa ao caráter que se busca melhorar. O melhorista precisa ter à sua disposição germoplasma adequado para que possa obter as combinações gênicas adequadas nas novas variedades. Definidos os objetivos e de acordo com as características da espécie e do germoplasma disponível, serão escolhidos os métodos de melhoramento a serem empregados. Métodos de melhoramento Introdução de Plantas Seleção Seleção massal Seleção massal estratificada Seleção com testes de progênies Seleção recorrente Métodos de melhoramento Introdução de Plantas Introdução de germoplasma promissor proveniente de outros locais pode atingir os mesmos resultados de um programa de melhoramento na obtenção de genótipos superiores. Os genótipos introduzidos podem ser imediatamente cultivados, avaliados e selecionados ou servirem de germoplasma para melhoramento. A introdução deve ser seguida da sua caracterização nas condições locais, com estudos de interação genótipo x ambiente e seleção dos melhores materiais para uso imediato como novas variedades ou como fontes de variabilidade genética. Métodos de melhoramento Seleção Mais antigo método de melhoramento, ao coletar material para o cultivo o homem, inconscientemente, começou a praticar seleção. Pode ser um processo subjetivo, depende da experiência e do conhecimento do melhorista, dos genes disponíveis no germoplasma e dos objetivos da seleção. A rigidez no processo de seleção é dependente do estágio em que se encontra o programa de melhoramento, sendo menos rigoroso no início dos programas. Métodos de melhoramento Seleção Para que possa haver ganho com a seleção, é necessário existir variação genética em relação a cada caráter a ser melhorado. Se a variação genética não for conhecida, o germoplasma disponível necessita ser previamente avaliado. Para cada caráter a ser selecionado, é necessário estabelecer um valor mínimo desejável e a metodologia de avaliação passível de ser utilizada. Métodos de melhoramento Seleção A seleção é um processo contínuo de aumento da freqüência dos alelos que possuem efeitos favoráveis sobre as características de importância agronômica em determinada população. Esse sucessivo melhoramento decorre da recombinação e seleção, em cada geração, daqueles indivíduos que se demonstraram promissores na produção de progênies superiores. Métodos de melhoramento Seleção Massal A seleção massal consiste na seleção de indivíduos fenotipicamente superiores, que são escolhidos e intercruzados ao acaso, servindo de genitores da geração seguinte. Pode ser considerado um dos métodos mais simples utilizados no melhoramento de plantas. Possui custo relativamente menor em relação aos métodos mais sofisticados, que empregam a seleção baseada em testes de progênies. Métodos de melhoramento Seleção Massal Explora a variabilidade existente na população, visando aumentar a freqüência de alelos favoráveis. Mais eficiente na seleçãode caracteres de fácil mensuração e alta herdabilidade. Segundo Borém (2001), a seleção massal só é eficiente se utilizada em populações heterogêneas, constituída por misturas de linhas puras, no caso das espécies autógamas e por indivíduos heterozigóticos em espécies alógamas. Alelos recessivos são selecionados mais facilmente do que os dominantes. Métodos de melhoramento Seleção Massal Sucessos em: Acerola Guaraná Maracujá Recomendada para plantas de ciclo curto. Métodos de melhoramento Seleção Massal Positiva: selecionam-se os indivíduos superiores, visando o melhoramento genético. Negativa: eliminam-se os indivíduos indesejáveis, com o objetivo de preservar as características dos cultivares selecionados. Métodos de melhoramento Seleção Massal Estratificada Um dos problemas da seleção massal é a falta de controle ambiental. Para amenizar o efeito ambiental, foi proposta a seleção massal estratificada. Neste processo o campo é dividido em pequenas áreas (estratos) e a seleção realizada em cada uma delas. Ex.: 3 plantas mais produtivas por estrato (vigor, número de frutos, teor de sólidos solúveis...) Métodos de melhoramento Seleção com testes de progênies O teste de progênie pode ser entendido como o teste do valor de um genótipo com base no comportamento de sua descendência. Esse método de seleção é baseado na capacidade da planta de gerar descendentes superiores. Falconer (1989) “o teste de progênie torna a seleção mais eficiente quando comparada com os métodos baseados somente na avaliação do desempenho do próprio indivíduo, uma vez que a avaliação é realizada em dois indivíduos: o genitor e suas progênies”. Métodos de melhoramento Seleção com testes de progênies A precisão do teste de progênies é maior quando se utilizam ensaios com repetição. Três etapas: Primeira: seleção de plantas quanto a caracteres de alta herdabilidade e que sejam de fácil avaliação e de baixo custo. Segunda: avaliações mais detalhadas, em número menor de genótipos. Terceira: realizam-se ensaios com repetição, comparando-se os melhores genótipos com cultivares de referência, em diversos locais. Métodos de melhoramento Seleção recorrente É um método de melhoramento genético delineado para concentrar a freqüência de alelos desejáveis, mediante a seleção, em cada geração, entre os descendentes produzidos por recombinação de indivíduos selecionados na geração anterior. A seleção recorrente envolve a obtenção das progênies, sua avaliação e o intercruzamento das melhores. As progênies podem ser obtidas por polinizações livres, cruzamentos controlados ou autofecundações. Métodos de melhoramento Seleção recorrente Em geral, mais apropriada para objetivos de longo prazo e para caracteres quantitativos. Em videira, a seleção recorrente pode ser aplicada na seleção de características de alta herdabilidade, como sabor das bagas, teor de sólidos solúveis e resistência a doenças (POMMER, 2002). Critérios utilizados na avaliação para seleção Nem sempre objetivos. Caracteres subjetivos podem ser compostos de um conjunto de outros mais objetivos. Exemplo: Qualidade de frutos pode ser bastante subjetivo e que varia com a espécie e o destino da fruta. Compõem a qualidade: o tamanho, a aparência, o sabor, a resistência ao manuseio e ao transporte, a durabilidade e a composição química, entre outros atributos. Critérios utilizados na avaliação para seleção Tamanho do fruto é um caráter objetivo e pode ser aferido com facilidade. Já a aparência e o sabor são subjetivos e podem necessitar de avaliações mais complexas. A aparência é composta por formato do fruto, coloração, presença de manchas, rugosidade da casca e defeitos. O sabor é conjunto de textura, suculência, firmeza, presença de grânulos, balanço de açúcares e acidez, conteúdo de aroma, etc. Critérios utilizados na avaliação para seleção O melhorista tem que decidir se um caráter deve ser subdividido em outros e como os caracteres serão medidos. Criar um índice de seleção envolvendo os subcaracteres e nesse caso deve ser atribuída uma importância relativa a cada subcarater, ou seja, um peso. A avaliação sensorial pode ser útil na seleção de frutos de qualidade. Hampson (2000), verificou que a doçura e a acidez percebidos pelo paladar são melhores para predizer a aceitação da fruta do que as medidas analíticas de sólidos solúveis e acidez titulável. Critérios utilizados na avaliação para seleção Para aferir a qualidade dos frutos, normalmente se determina a firmeza da polpa, o teor de sólidos solúveis, a acidez e o pH do suco, podendo também ser avaliado o teor de vitamina C. A coloração da polpa e da epiderme pode ser determinada com o auxílio de colorímetro, carta de cores ou visualmente, segundo escala de notas. Aspecto importante: estádio da maturação. Critérios utilizados na avaliação para seleção A resistência ao frio, importante em clima temperado, envolve vários mecanismos, como: Dormência precoce no outono Resistência a temperaturas extremamente baixas no meio do inverno Requerimento de altas temperaturas para brotar, após a saída da dormência Florescimento tardio. Seleção Clonal Clone pode ser entendido como um conjunto de indivíduos geneticamente idênticos, originários de um indivíduo por propagação vegetativa. Videira: seleção de cultivares estabelecidas, cultivadas vegetativamente por longo tempo. Identificar mutações interessantes e indesejáveis Seleção de material sadio, isento de viroses Hibridação Emprega-se na obtenção de progênies e populações segregantes, na transferência de alelos para cultivares e na produção de híbridos, variedades sintéticas e compostos. Nas fruteiras propagadas vegetativamente, a principal finalidade da hibridação é a obtenção de populações segregantes, a partir das quais indivíduos superiores podem ser selecionados. Hibridação Procedimentos As flores podem ser protegidas antes e após os cruzamentos, para evitar contaminação. A contaminação por insetos pode ser reduzida com emasculação acompanhada da retirada da corola, tornando-as menos atrativas. Proteção das flores, inflorescências, ramos ou mesmo plantas inteiras com sacos de papel, telas ou panos. Emasculação antes da polinização (autoférteis). Hibridação Procedimentos Na propagação vegetativa caracterizam-se por possuírem alta heterozigose. Os genitores utilizados nas hibridações, por serem altamente heterozigóticos, produzem descendência com grande segregação. Para que haja maior probabilidade de encontrar combinações genéticas favoráveis, é necessário que se trabalhe com progênie numerosa. Para que os genótipos superiores possam ser identificados é importante que o potencial dos indivíduos possa ser avaliado com relativa facilidade e baixo custo. Hibridação Procedimentos O sucesso está diretamente relacionado com a escolha dos genitores, os quais devem ser complementares nas características de interesse e divergentes para possibilitar a manifestação da heterose. Os melhores resultados são obtidos quando se cruzam pais com boas características agronômicas e que representam combinações contrastantes (SCAPIM et al., 1999). Hibridação Procedimentos Escolhidosos genitores, a hibridação consiste: da coleta e manipulação do pólen, polinização, coleta de frutos e extração da semente. A conservação do pólen é de grande utilidade, pois permite o cruzamento entre plantas localizadas em locais distintos ou florescendo em diferentes épocas. Hibridação Conservação do pólen: Baixa umidade (0 a 30%) Baixa temperatura Refrigeração (0°C a 5°C) Congelamento (-5°C a -20°C) Criopreservação em nitrogênio líquido (-196°C), Permitem a manutenção da viabilidade do pólen por vários anos, dependente da espécie em questão. Polinização: transferência do pólen da antera para o estigma receptor (flores, pincel, cotonete, dedo, bastão de vidro). Hibridação O sucesso da hibridação pode variar em decorrência de: fatores climáticos (temperatura, radiação solar, umidade relativa, chuva, vento) edáficos (exigências da espécie) e bióticos (agentes polinizadores, pragas e doenças), que interferem no processo. Hibridação Uma vez realizada a hibridação artificial, a próxima etapa é a obtenção dos frutos e posterior extração das sementes, que germinarão e constituirão as plantas que serão avaliadas e selecionadas. Os frutos devem ser colhidos maduros, evitando-se que sejam atacados por fungos, comuns em frutos excessivamente maduros. Hibridação Procedimentos que acelerem a germinação e o desenvolvimento inicial das plantas são interessantes para proporcionar rápido crescimento, antecipando as avaliações futuras. A semeadura é feita em recipientes específicos (sacos, tubetes, caixas), canteiros (sementeiras) ou viveiros de campo. A semeadura em recipientes com substrato adequado e em casa de vegetação normalmente promove germinação e desenvolvimento inicial rápidos. Variedades sintéticas e compostos A heterose também é convenientemente explorada em variedades sintéticas e compostos. Variedades sintéticas são produzidas a partir de cruzamentos, em todas as combinações, entre várias linhas endogâmicas, todas com boa capacidade de combinação. Quando as linhas são variedades ou populações de polinização livre, as populações resultantes são denominadas de compostos (HALLAUER; MIRANDA FILHO, 1988). Método do Retrocruzamento Quando um cultivar é considerado satisfatório, de modo geral, mas necessita de um ou poucos alelos referentes a alguma característica em que seja deficiente podem ser realizados retrocruzamentos. O termo retrocruzamento refere-se aos repetidos cruzamentos da planta ou progênie híbrida com um dos genitores. A cada retrocruzamento é feita seleção para o alelo que está sendo transferido. Hibridação Hibridação interespecífica: Busca de genes em outras fontes, introduzir genes ausentes na espécie de interesse ou de agrupar genótipos de espécies diferentes, visando a criação de novos tipos. Hibridação somática: Consiste em reunir genomas de células, geralmente de espécies distintas, sem passar pelo processo sexual (fusão de protoplastos). Transformação genética Muitas vezes os genes responsáveis por características de interesse não são encontrados na espécie com a qual se está trabalhando, por isso é necessário buscá-las em outras. A transformação de plantas surge como uma técnica capaz de introduzir genes ausentes na espécie diretamente no genoma, por via não- sexual, eliminando a necessidade de retrocruzamentos. Transformação genética A transformação é a inserção de genes estranhos à espécie em uma célula de uma cultivar. Esses genes podem ser oriundos de outros organismos, em níveis intraespecífico, interespecífico, intergenérico e até entre outros reinos. Vírus, bactérias, fungos, animais ou outras espécies de plantas são alguns exemplos de doadores de genes. Transformação genética A transformação apresenta grande interesse em espécies que têm cultivares bem difundidos e de grande aceitação, porque permite que genes sejam adicionados sem que o genoma do cultivar seja substancialmente alterado. Pode ser usada na modificação das características relacionadas a processos de maturação dos frutos, resistência a doenças e pragas, arquitetura da planta, adaptação, etc. Transformação genética A técnica de transferência de genes pode ser realizada direta ou indiretamente. Direta: Métodos físicos ou químicos Eletroporação, Aceleração de Partículas (biobalística), Lipossomas e transferência com polietilenoglico (PEG). Indiretamente: Mediada por vetores: Agrobacterium tumefasciens Agrobacterium rhizogenes Mutações São alterações na sequência e no arranjo do DNA celular. Essas são responsáveis pelo surgimento de variabilidade, matéria-prima da evolução e do melhoramento genético. Mutações Gênicas: decorrem da perda, adição ou substituição de nucleotídeos no DNA. Mutações Cromossômicas: derivam de alterações estruturais ou numéricas dos cromossomos.