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Tipo: Exercício de Fixação 
Teste de endotoxinas bacterianas 
 
Disciplina: Controle de Qualidade 
Nome: ____________________________________________ Turma: ___________ 
Profª. Aline Teixeira 
 
1) Um laboratório recebeu um novo lote de reagente LAL, e após submetê-lo a um ensaio 
prévio, os seguintes resultados foram obtidos: 
 
Réplicas 
Concentração de endotoxina (UE/mL) 
C- PF Log PF 
0,32 0,16 0,08 0,04 
1 + + - - - 
2 + + + - - 
3 + + + - - 
4 + + - - - 
 
a. Qual a função deste ensaio prévio? 
b. Sabendo que a sensibilidade rotulada () do reagente testado é de 0,16 UE/mL, calcule a 
sensibilidade estimada e conclua sobre a utilização deste lote na rotina de laboratório. 
 
2) Durante o desenvolvimento de uma formulação de fosfato dissódico de dexametasona 
solução injetável, determinou-se a utilização do teste de endotoxinas bacterianas para verificar 
a ausência de endotoxinas na amostra. Após a realização de testes preliminares, obtiveram-se 
os seguintes resultados para um lote piloto do produto, sabidamente apirogênico. 
 
Tabela 1. Resultados do teste prévio (tubos contendo amostra + endotoxina + LAL) 
 
Réplicas 
Concentração de endotoxina (UE/mL) 
1,500 0,750 0,375 0,1875 
1 + + + + 
2 + + + + 
3 + + + + 
4 + + + + 
 
 
 
Tabela 2. Resultados de diluições do produto (tubos contendo amostra + LAL). 
 
Réplicas 
Fator de diluições do produto (sem endotoxina) 
50 100 150 200 
1 + + - - 
2 + + - - 
 
a. Qual a função deste ensaio preliminar? 
b. Sabendo que o reagente LAL utilizado possui sensibilidade rotulada de 0,750 UE/mL, 
conclua sobre o efeito inibitório/indutor deste produto sobre o reagente LAL a partir 
dos resultados descritos na Tabela 1. 
c. O que os resultados da Tabela 2 permitem concluir sobre o ensaio deste produto pelo 
método LAL? 
 
2.1) Dando prosseguimento ao desenvolvimento do método de gelificação para o produto 
fosfato dissódico de dexametasona injetável, faça os cálculos para a máxima diluição válida 
(MDV) sabendo que: 
- produto: fosfato dissódico de dexametasona 4mg/mL (frasco com 2,5 mL) 
- via de administração: endovenosa 
- Limite de endotoxina: 19,23 UE/mg 
- Sensibilidade rotulada do reagente LAL: 0,750 UE/mL 
 
MDV = Limite de endotoxina x Potência do produto 
 Sensibilidade rotulada do lisado 
 
A partir do valor encontrado, reavalie suas conclusões da questão 2 (letra c). Qual seria uma 
alternativa possível para determinar endotoxinas neste produto pelo método do LAL? 
 
2.2) Após o lançamento do produto no mercado, foi realizado o teste de endotoxinas 
bacterianas em um lote, encontrando-se os resultados descritos nas tabelas a seguir. Utilizou-se 
reagente LAL com sensibilidade rotulada equivalente a 0,125 UE/mL e a amostra foi diluída 150 
vezes. 
 
Tabela 1. Resultados dos controles negativo e positivo da amostra 
 
Réplicas C+ amostra C- 
1 + - 
2 + - 
 
 
 
Tabela 2. Resultados do controle positivo. 
 
Réplicas 
Concentração de endotoxina (UE/mL) 
PF Log PF 
0,250 0,125 0,0625 0,03125 
1 + + + - 
2 + + - - 
 
 
Tabela 3. Resultados da amostra. 
 
Réplicas 
Fator de diluição da amostra 
PF PF x rot Log (PF x rot) 
1 2 4 8 
1 + + + - 
2 + + - - 
 
a. Qual a função de cada um dos controles realizados? Faca os cálculos necessários e 
conclua se o teste é valido. 
b. Calcule a quantidade de endotoxina na amostra. Considerando que o limite de 
endotoxinas na amostra é de 19,2 UE/mg, o lote cumpre o teste para endotoxinas 
bacterianas?