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COCOS GRAM POSITIVOS CATALASE NEGATIVOS Estreptococos e Enterococos Streptococcus spp. • Cocos Gram positivos; • Catalase NEGATIVOS; • Anaeróbios facultativos – alguns isolados: crescem melhor em condições anaeróbias; • Crescimento estimulado em ambiente com atmosfera de 5% de CO2 • Bactérias fastidiosas - Adição de sangue ou soro ao meio de cultura. H2O2 H2O + O2 x Cadeias longas Cadeias curtas Aos pares ARRANJO Streptococcus spp. • Algumas espécies colonizam as mucosas e a pele (S. oralis, S. mutans); • Espécies altamente virulentas e patogênicas também podem ser encontradas como parte da microbiota normal (S. pneumoniae); - 30-70% em crianças e 5% em adultos Predisposição os desenvolvimento de infecção Streptococcus spp. • Diferenciação clássica entre as espécies baseia-se: 1. Nas reações hemolíticas em ágar sangue: - Estreptococos hemolíticos – α, β - Estreptococos não-hemolíticos - γ 2. Grupo sorológico de Lancefield: - Carboidrato presente na parede celular - Identificados por técnicas imunológicas (sorologia) TIPOS DE HEMÓLISE α β γ - Hemólise parcial - Hemólise TOTAL - Anemolítico TIPOS DE HEMÓLISE Streptococcus spp. • Diferenciação clássica entre as espécies baseia-se: 1. Nas reações hemolíticas em ágar sangue: - Estreptococos hemolíticos – α, β - Estreptococos não-hemolíticos - γ 2. Grupo sorológico de Lancefield: - Carboidrato presente na parede celular - Identificados por técnicas imunológicas (sorologia) GRUPO SOROLÓGICOS DE LANCEFIELD GRUPO A GRUPO B GRUPO D - Enterococos GRUPOS C, E, F e G Menos importantes Carboidrato específico Streptococcus spp. • Espécies de maior importância clínica: S. pyogenes – Grupo A S. agalactiae – Grupo B S. pneumoniae – sem classificação de Lancefield S. pyogenes • Estreptococo β-hemolítico - Grupo A de Lancefield; • Coloniza a orofaringe (TRS) e a pele foco primário para o desenvolvimento de infecções e reservatórios de transmissão; • Principal agente das faringites bacterianas em crianças (faringite estreptocócica); • Patógeno importante do TRS!!! • Outras doenças incluem: Impetigo, infecções de pele e tecidos moles, erisipela, celulite, bacteremia e sepse Erisipela (linfangite estreptocócica) Impetigo Faringite S. pyogenes • Produtor das estreptolisinas O e S (fatores de virulência); • Estreptolisina O: inativada na presença de O2 – antigênica - Indivíduos com infecção por S. pyogenes produzem anticorpos contra a estreptolisina O – útil no diagnóstico das doenças auto- imunes causadas por essa bactéria • Estreptolisina S: estável na presença de O2; S. pyogenes • Doenças não-supurativas (auto-imunes): - Glomerulonefrite: sequela renal tardia da infecção estreptocócica induzida por auto-anticorpos (Ac) - Ac atacam os glomérulos reação inflamatória fendas glomerulares hemácias “escapam” pela parede do glomérulo até a bexiga Hematúria (principal achado clínico) - Febre reumática:doença inflamatória de origem auto-imune Geralmente 2-3 semanas após faringite estreptocócica (3% das crianças infectadas – baixa incidência) - Envolve lesões cardíacas, articulares e de tecido subcutâneo - Principal causa de cardiopatia adquirida na infância S. agalactiae • Estreptococo β-hemolítico - Grupo B de Lancefield; • Coloniza o trato genito-urinário feminino; • Principalmente associado a infecções graves em neonatos pelo contato no parto - sepse e meningite; • Gestantes: culturas de vigilância (35-37 semanas) para detectar possível colonização requer tratamento • ITU em mulheres - relevante se infecção sintomática (contagem significativa) S. pneumoniae • Estreptococo α-hemolítico - não classificado conforme Lancefield; • Habita microbiota da oro e nasofaringe; • Contém cápsula polissacarídica (fator de virulência) – resistência à fagocitose; • Principal patógeno associado à pneumonia comunitária; • Pode causar otite, sinusite, endocardite e meningite; • Característica peculiares no Gram. Diplococos lanceolados Zona clara ao redor - CÁPSULA Importância clínica de outros estreptococos • Habitantes normais da cavidade oral, TGI, trato genito-urinário; • Patógenos oportunistas!! • Frequentemente isolados em endocardites; • Compreendem várias espécies; • Denominados Streptococcus spp. ou S. viridans; • Normalmente anemolíticos. Diagnóstico laboratorial o Gram o Cultura MORFOLOGIA COLONIAL E HEMÓLISE o Sorologia GRUPOS DE LANCEFIELD o TESTES FENOTÍPICOS (bioquímicos/sensibilidade) Diagnóstico laboratorial • Gram: Diagnóstico presuntivo Diplococos gram +/ Cocos gram + aos pares Diagnóstico laboratorial • Cultura e Hemólise: Stab (estreptolisina O); 5% CO2; Diagnóstico laboratorial • α hemólise: Colônia viridescente: “bala soft” Viridecente - Pneumococo Testes fenotípicos: sensibilidade à bacitracina 0,004 UI Diagnóstico laboratorial • Teste da optoquina: sensibilidade à bacitracina caracteriza S. pneumoniae • Meio de cultura: 14 mm Halo ≥ 14 mm S. pneumoniae Diagnóstico laboratorial • β hemólise: • Sorologia para os grupos de Lancefield; • Sensibilidade à bacitracina; • Teste PYR; • CAMP test. Diagnóstico laboratorial • Sorologia para os grupos de Lancefield: • Grupo A: S. pyogenes • Grupo B: S. agalactiae Diagnóstico laboratorial • Testes fenotípicos: • Teste PYR e sensibilidade à bacitracina – S. pyogenes • CAMP test – S. agalactiae PYR β-naftilamida livre Diagnóstico laboratorial • Teste PYR (pyrrolidonil-aminopeptidase): detecção de atividade enzimática de S. pyogenes e Enterococcus L-piroglutamil-aminopeptidase S. pyogenes Diagnóstico laboratorial • Teste da bacitracina: sensibilidade à bacitracina caracteriza S. pyogenes. • Meio de cultura: ***Qualquer zona de inibição ao redor do halo é considerada positiva Diagnóstico laboratorial • β hemólise: Sensível à bacitracina Sorologia para os grupos de Lancefield Grupo A OU Teste PYR + OU S. pyogenes Diagnóstico laboratorial • Teste da CAMP: para detecção do fator CAMP em S. agalactiae A presença do fator CAMP intensifica a hemólise por Staphylococcus aureus produtores de β-lisina. A cultura é semeada perpendicularmente a uma estria de S. aureus. Hemólise em ponta de flecha = S. agalactiae S. aureus produtor de β-lisina ATCC 25923 Christie Atkins Munch- Petersen Diagnóstico laboratorial • β hemólise: Resistente à bacitracina Sorologia para os grupos de Lancefield Grupo B OU Teste PYR - + S. agalactiae + CAMP + + - RESUMINDO... Enterococcus spp. • Cocos Gram positivos; • Catalase NEGATIVOS; • Arranjo: isolados ou em cadeias curtas (semelhante aos estreptococos); • Nutricionalmente menos exigentes. H2O2 H2O+ O2 x Enterococcus spp. • Geralmente α-hemolíticos ou anemolíticos (γ); • Grupo D de Lancefield; • Suportam crescimento em condições extremas Útil no diagnóstico laboratorial Crescimento em NaCl 6,5% Crescimento a 45ºC Hidrólise da esculina Importância clínica dos Enterococcus • Principais espécies: E. faecalis e E. faecium • Amplamente distribuídos na natureza; • Microbiota humana trato gastrintestinal e trato genito-urinário; • Patógenos oportunistas; • ITU, bacteremias e endocardites; • Patógenos hospitalares e comunitários; • Resistentes aos antibióticos. Diagnóstico laboratorial o Gram o Cultura MORFOLOGIA COLONIAL E (HEMÓLISE) o Sorologia GRUPOS DE LANCEFIELD o TESTES FENOTÍPICOS (bioquímicos) Diagnóstico laboratorial • Gram: Isolados, aos pares ou em cadeias curtas Diagnóstico laboratorial • Cultura: • Sorologia para os grupos de Lancefield: Diagnóstico laboratorial • Testes fenotípicos confirmatórios: • Teste PYR • Crescimento em NaCl 6,5% • Prova da bile-esculina • Teste PYR: detecção de atividade enzimática de Enterococcus spp. • Lembrar que o teste também é positivo para S. pyogenes PYR β-naftilamida livre Diagnóstico laboratorial L-piroglutamil-aminopeptidase Enterococcus spp. Diagnóstico laboratorial • Crescimento em NaCl 6,5%: turvação no meio • Apenas os Enterococcus spp. crescem nessa [NaCl]!! Ausência de crescimento (límpido) Crescimento (turvação) Diagnóstico laboratorial • Prova da bile-esculina: a prova é baseada na capacidade de algumas bactérias hidrolisarem a esculina em presença de sais biliares; • A hidrólise da esculina no meio resulta na formação de glicose e esculetina. A esculetina reage com íons férricos, formando um complexo negro; • Útil na diferenciação dos gêneros Streptococcus e Enterococcus. + - Resumindo.... • α hemólise: sensível à optoquina: S. pneumoniae resistente à optoquina: S. viridans • β hemólise: sensível à bacitracina: S. pyogenes CAMP +: S. agalactiae NaCl +: Enterococcus spp. Provas negativas: Streptococcus β-hemolítico (não grupo A ou B) • γ hemólise: NaCl +: Enterococcus spp. NaCl -: Streptococcus spp. ou anemolítico SOROLOGIA HEMÓLISE PROVAS BIOQUÍMICAS GRAM Diagnóstico laboratorial Streptococcus X Enterococcus