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UNIPAC Universidade Presidente Antônio Carlos ANO: 2017 CLASSIFICAÇÃO SANGUÍNEA 1. PRINCÍPIO Para identificação de antígenos eritrocitários, o sangue deve ser coletado com anticoagulante EDTA ou citrato. Para técnicas de detecção de antígenos em tubo é adequada uma solução de 3 a 5%. Recomendada lavagem prévia de hemácias para eliminação de proteínas plasmáticas. Tipagem em microplaca (bancos de sangue) otimiza o tempo pela possibilidade de numerosos indivíduos ao mesmo tempo. Há o sistema de cartões de colunas em gel neutro ou acrescido de soro (anti A, anti B, anti D). Sua vantagem é a maior sensibilidade, padronização na intensidade de aglutinação no momento da leitura. O sistema ABO foi descoberto por Landsteiner. O grupo AB foi descoberto por seus colaboradores Decastello e Sturli em 1902. O sistema ABO apresenta antígenos expressos na membrana das hemácias e anticorpos naturais contra antígenos ausentes. Os antígenos podem ser observados após 5 a 6 semanas de gestação, embora expressem sua totalidade entre 2 a 4 anos de vida. A tipagem direta do grupo ABO é realizada com hemácias suspensas em solução fisiológica contra soros comercias anti A, anti B e anti AB. Já a tipagem reversa utiliza soro ou plasma do paciente contra hemácias fenotipadas A e B (comerciais). Os subgrupos de A ou de B são identificados pelas discrepâncias encontradas entre provas direta e reversa do grupo ABO. Os subtipos são diferenciados pela quantidade de antígenos expressos na superfície das hemácias (A1 em torno de 1 milhão de antígenos; A2 em torno de 300 mil antígenos). A ( 80% A1, 19% A2, 1% (Ax, A3, Am, Aint). B ( B, B3, Bm, Bx. Maioria dos serviços de saúde utiliza soro anti A1 comercial de lecitinas de soja extraídos de sementes de Dolichos biflorus. Para subgrupos de A, B e de AB é utilizado soro anti H (específico para lecitinas da semente da leguminosa Ullex europeus). Tipo sanguíneo Tipagem direta (Ag) Tipagem reversa (Ac) A B O AB A B H A e B Anti – B Anti – A Anti – B e Anti – A //////////// O grupo sanguíneo Rh foi descoberto por Landsteiner e Wiener em experimentos com hemácias de macacos Rhesus inoculadas em coelhos. Os pesquisadores observaram que o anticorpo produzido pelo coelho era capaz de aglutinar as hemácias de macacos, mas também hemácias humanas em 85% da raça branca. O soro anti – D utilizado atualmente nos laboratórios não é de macacos Rhesus e sim produzidos a partir de clones celulares específicos para essa finalidade. O sistema é polimórfico e apresenta 49 antígenos descritos, com 5 mais importantes (D, C, E, c, e). O antígeno d não existe. Antígeno D fraco (antiga variando Du): Menor quantidade de antígenos expressos nas hemácias (aglutinação apenas após incubação a 37C ou após soro de Coombs). É antígeno completo. Antígeno D parcial: Alterações qualitativas (antígeno incompleto). Dificuldade de sua identificação depende da variante genética. Como alguns epítopos estão ausentes, sua detecção depende do tipo de soro que está sendo utilizado (policlonal ou monoclonal). Antígeno D parcial fraco: Alterações qualitativas e quantitativas de antígenos D. Tipado como Rh negativo. Nesse caso, se for doador e o receptor for Rh negativo, o mesmo pode desenvolver anti – D. Deve ser considerado Rh positivo quando doador e Rh negativo quando receptor. 2. TÉCNICA a) preparar uma suspensão salina (5%) das hemácias a serem testadas; b) colocar 2 gotas desta suspensão em 1 tubo de 12 x 75 mm, adicionar 2 gotas de anti – A, anti B, anti AB, anti H (Bombay). c) colocar 3 gotas desta suspensão em 1 tubo de 12 x 75 mm, adicionar 3 gotas de anti – D. d) centrifugar à baixa rotação (1.000 r.p.m) por 1 minuto; g) leitura: agitar levemente o tubo e observar se há aglutinação dos eritrócitos. 3. REFERÊNCIAS ABBAS, A.K.; LICHMAN, A.H.; POBER, J.S. Imunologia celular e molecular. Livraria e Editora Revinter Ltda, Rio de Janeiro, 2005. VAZ, A.J.; TAKEI, K.; BUENO, E.C. Imunoensaios: Fundamentos e aplicações. Guanabara Koogan, Rio de Janeiro, 2007. �PAGE � �PAGE �2�
