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Tayse Dias
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UNIVERSIDADE FEDERAL DE GOIÁS ESCOLA DE VETERINÁRIA E ZOOTECNIA PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM CIÊNCIA ANIMAL Disciplina: SEMINÁRIOS APLICADOS APLICAÇÕES DAS TÉCNICAS DE CROMATOGRAFIA NO DIAGNÓSTICO TOXICOLÓGICO Daniel Silva Goulart Orientador: Maria Clorinda Soares Fioravanti GOIÂNIA 2012 ii DANIEL SILVA GOULART APLICAÇÕES DAS TÉCNICAS DE CROMATOGRAFIA NO DIAGNÓSTICO TOXICOLÓGICO Seminário apresentado junto à Disciplina Seminários Aplicados do Programa de Pós- Graduação em Ciência Animal da Escola de Veterinária e Zootecnia da Universidade Federal de Goiás. Nível: Doutorado Área de concentração: Patologia Clínica e Cirurgia Animal Linha de Pesquisa: Alterações clínicas, metabólicas e toxêmicas dos animais e meios auxiliares de diagnóstico Orientador: Prof. Dr. Maria Clorinda Soares Fioravanti - UFG Comitê de Orientação: Prof. Dr. Emmanuel Arnhold - UFG Prof. Dr. Franklin Riet-Correa Amaral - UFCG GOIÂNIA 2012 iii LISTA DE ABREVIATURAS CCD cromatografia em camada delgada CG cromatografia gasosa CG-MS cromatografia gasosa acoplada a espectrofotometria de massa HPLC cromatografia líquida de alta eficiência HPLC-FI cromatografia líquida de alta eficiência com detecção de fluorescência HPLC-IR cromatografia liquida de alta eficiência acoplada a espectrofotometria de infravermelho HPLC-MS cromatografia liquida de alta eficiência acoplada a espectrofotometria de massa LC-MS cromatografia liquida acoplada a espectrofotometria de massa LC-MS/MS cromatografia liquida acoplada a espectrofotometria de massa acoplada a espectrofotometria de massa MF monofluoroacetato de sódio U-HPLC cromatografia líquida de ultra eficiência U-HPLC-MS/MS cromatografia liquida de alta eficiência acoplada a espectrofotometria de massa acoplada a espectrofotometria de massa UV ultravioleta WADA Word Anti-Doping Agency iv SUMÁRIO 1 INTRODUÇÃO .................................................................................................... 1 2 REVISÃO DE LITERATURA ............................................................................... 3 2.1 Breve histórico .................................................................................................. 3 2.2 Principais tipos de cromatografia ..................................................................... 4 2.2.1 Cromatografia em papel ................................................................................ 4 2.2.2 Cromatografia em camada delgada .............................................................. 5 2.2.3 Cromatografia gasosa ................................................................................... 5 2.2.4 Cromatografia líquida de alta eficiência......................................................... 6 2.2.5 Cromatografia multidimensional .................................................................... 7 2.3 Principais usos da cromatografia ..................................................................... 8 2.4 Uso da cromatografia na toxicologia ................................................................ 9 2.4.1 A cromatografia na toxicologia forense ......................................................... 9 2.4.2 A cromatografia na toxicologia veterinária ................................................... 13 2.4.3 A cromatografia para identificação de substâncias nocivas em alimentos .. 19 3 CONSIDERAÇÕES FINAIS .............................................................................. 23 REFERÊNCIAS .................................................................................................... 24 1 INTRODUÇÃO A cromatografia é uma técnica relatada cientificamente há pouco mais de cem anos e baseia-se na migração de componentes de uma mistura entre duas fases: a fase estacionária que retém elementos e a fase móvel que conduz a mistura por meio de um soluto através da fase estacionária. É uma técnica que pode ser utilizada para purificação de substâncias, na detecção de substâncias ou auxiliar a separação de substâncias indesejáveis. As técnicas cromatográficas podem ser divididas principalmente em cromatografia em papel, cromatografia em camada delgada (CCD), cromatografia gasosa (CG), cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC), e mais atualmente a cromatografia líquida de ultra-eficiência (U-HPLC). Os métodos cromatográficos podem ser utilizados separadamente ou em conjunto dependendo dos componentes a serem separados ou identificados. A cromatografia tem sido desenvolvida e utilizada em diversos meios da ciência. A química é a área mais atuante no desenvolvimento de métodos cromatográficos, mas outras áreas da ciência também utilizam dessas técnicas, sendo elas muito difundidas na área farmacêutica e médica. Devido à alta precisão e confiabilidade dessas técnicas, elas são muito utilizadas na detecção ou separação de substâncias que estão em pequenas quantidades em uma mistura. Assim, na área médica a cromatografia tem grande utilização na toxicologia, seja para monitorar o uso de medicamento ou para o seu uso na ciência forense, dosando drogas de abuso e auxiliando a elucidar crimes. Da mesma forma que ocorre na medicina, na medicina veterinária as técnicas cromatográficas podem ser empregadas no diagnóstico de doenças e em estudos de farmacocinética, mas é na toxicologia que a técnica ganha maior destaque. O estudo toxicológico envolve a identificação de substâncias, seja após a intoxicação ou em estudos experimentais quando essa identificação pode ser realizada previamente, certificando que a quantidade de princípio ativo a ser utilizada esteja correta. Outro grande interesse para o uso das técnicas cromatográficas na medicina veterinária é na identificação de resíduos de drogas em produtos de origem animal. Sabe-se que esses resíduos podem prejudicar o consumidor final, 2 e causar descrédito à cadeia produtiva, assim o monitoramento destes produtos torna-se de fundamental importância. Diante da versatilidade do uso da cromatografia e do potencial de sua utilização na toxicologia, essa revisão teve o intuito de relatar as diferentes aplicações de métodos cromatográficos no diagnóstico toxicológico, bem como esclarecer seus usos na toxicologia veterinária. 3 2 REVISÃO DE LITERATURA 2.1 Breve histórico A cromatografia foi relatada pela primeira vez há pouco mais de 100 anos por Mikhail Semenovich Tswett (1872-1919). No período de 1899 à 1901 Tswett trabalhou em sua primeira pesquisa com a estrutura físico-química da clorofila das plantas, sendo que no ano de 1903 relatou uma nova categoria de análise adsortiva (ETTRE, 2000). O trabalho de Tswett foi apresentado em forma de tratado para a Sociedade de Ciências de Varsóvia, no qual descreveu os resultados preliminares de suas pesquisas com extrato de folhas, utilizando uma coluna de vidro recheada com carbonato de cálcio, separando os constituintes do extrato pela passagem de éter dietílico (COLLINS, 2006). No entanto, as denominações de cromatografia e cromatograma somente surgiram no segundo trabalho de Tswett, publicado em 1906. A palavra cromatografia designava o processo de separação, tendo sua origem do grego chroma, com o significado de ―cor‖, e também do grego graphe, significando ―escrever‖. Já a palavra cromatograma refere-se às bandas separadas na coluna (COLLINS, 2006; NOGUEIRA, 2006).
