Microscopia de luz

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PRÁTICA 1: MICROSCOPIA DE LUZ 
 
INTRODUÇÃO: 
 O microscópio de luz é um aparelho que destina-se a observação de objetos muito 
pequenos, difíceis de serem examinados em detalhes a olho nu. O tipo de microscópio 
mais utilizado nos estudos citológicos é o composto, que é constituído basicamente por 
duas lentes convergentes. Neste microscópio a luz atravessa o objeto e o conjunto de 
lentes antes de atingir o olho, formando uma imagem bidimensional. 
 
DESCRIÇÃO DO MICROSCÓPIO 
 
I. PARTE MECÂNICA 
 Essencialmente, o microscópio compõe-se de um sistema óptico, as lentes, e um 
sistema mecânico para sustentação das mesmas. 
1. Pé ou Base: é o suporte de sustentação do microscópio, peça que sustenta todas 
as outras. 
2. Corpo, Braço ou Estativa: é a peça que liga o pé à parte superior do microscópio. 
3. Platina ou Mesa: dispositivo e forma retangular ou arredondado, disposto 
paralelamente a direção da base e que se destina à recepção de uma lâmina 
contendo o material para estudo. No centro da platina existe uma abertura à 
passagem de luz. 
Fixada à platina, normalmente, encontra-se uma peça denominada “charriot”, cuja 
função é movimentar a lâmina no plano horizontal, sobre a mesma. Dois parafusos, 
dispostos lateralmente à platina, um sobre o outro, promovem a movimentação do 
“charriot”. O parafuso mais externo (de menor diâmetro) permite o deslizamento da 
lâmina da esquerda para direita e vice-versa. O parafuso de diâmetro maior é 
responsável pelo movimento da presilha que permite o encaixe e fixação da 
lâmina.lâmina para frente e para trás. Acoplado “charriot”, há uma p 
4. Fonte de luz: apoiada sobre o pé, existe uma fonte própria de luz. Alguns 
microscópios possuem apenas um espelho para refletir a luz de uma fonte externa. 
5. Filtro: é uma peça de vidro colorida (azul, verde, etc...) fixada a um receptáculo, 
que torna a luz mais apropriada à observação do material. O filtro azul é usado em 
microscopia de rotina para transforma a luz amarela da lâmpada em luz branca tipo 
luz solar. 
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6. Diafragma ou íris: dispositivo colocado superiormente ao filtro regulável mediante 
uma alavanca, que controla a intensidade do feixe luminoso que atinge o orifício da 
platina. A regulagem deste diafragma oferece uma imagem com melhor contraste. 
7. Revólver ou Tambor: localizado abaixo do canhão encontra-se o revólver que é 
uma peça na qual se inserem várias lentes objetivas. O revólver possui ranhuras 
para que o observador possa gira-lo, para as mudanças da objetiva. 
8. Canhão: é a parte superior do microscópio, dotada de movimento de rotação, 
constituída por uma peça semi-esférica, ligada a um tubo. Na extremidade do tubo 
encontra-se a lente ocular. 
9. Parafuso Macrométrico: na parte lateral do braço existem dois parafusos, 
geralmente encaixadas um sobre o outro. O de maior diâmetro é o parafuso 
macrométrico, que permite grandes avanços ou recuos da platina em relação a 
objetiva. 
10. Parafuso Micrométrico: esse parafuso permite pequenos avanços ou recuos do 
parafuso da platina. Apresenta um menor diâmetro, podendo estar próximo ou 
associado ao microscópio. 
11. Trava: junto ao braço pode existir uma alavanca que trava o movimento do 
parafuso macrométrico em uma determinada posição, impedindo a movimentação 
da platina e protegendo as objetivas contra possíveis choques. 
 
II. PARTE ÓPTICA 
1. Condensadoras: consta de um conjunto de lentes situado abaixo da platina que 
concentra e torna paralelo o feixe luminoso, fornecendo a luz necessária à 
iluminação uniforme do objeto em estudo. O “parafuso” do condensador, localizado 
lateralmente no braço do microscópio, permite a movimentação das lentes 
condensadoras que devem ser mantidas na posição mais elevada para obtenção 
de uma iluminação uniforme. 
2. Objetivas: o microscópio possui, geralmente, quatro objetivas. Toda objetiva traz 
gravado o aumento que proporciona (o número superior e em caracteres maiores). 
O segundo número gravado constitui detalhe de óptica e se refere a abertura 
numérica da lente. 
Ex.: A objetiva de 100x tem as seguintes especificações: 100x/0.32 e 160/0.17, 
significa o número de vezes que esta objetiva amplia o objeto. 0.32 é o valor da 
abertura numérica; 160 e a distância (mm) a da rosca da objetiva até a ocular e 
0.17 é a espessura dada em mm da lamínula que deve ser usada para esta 
objetiva. 
3. Oculares: é a lente superior do microscópio que se encaixa no tubo. Toda ocular 
traz gravado o aumento que proporciona. 
 
 
 
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BASES ÓPTICAS DA MICROSCOPIA 
 
 A luz que atravessa as lentes condensadoras é uniformemente espalhada sob a 
lâmina e atravessa o objeto, incidindo na lente objetiva. Estando o objeto colocado 
anteriormente ao foco da lente objetiva, formar-se-á, no plano focal da lente ocular, uma 
imagem real (que pode ser projetada em um anteparo), maior e invertida. 
 A luz, ao atravessar a ocular, formará uma imagem virtual, maior e direita com 
relação à imagem formada pela objetiva. Entretanto, a imagem final do objeto, 
proporcionada pelo microscópio, será virtual, ampliada e invertida em relação ao mesmo. 
E o aumento final da imagem é resultado do produto do aumento proporcionado pelas 
lentes. 
 O processo de formação da imagem no microscópio pode ser comparado ao 
sistema empregado na projeção de um “slide” (Fig. 1), no qual, temos a formação de uma 
imagem real e invertida do objeto original. 
 
 
 
 
 
 
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Fig. 1 – Esquema do trajeto da luz no processo de formação da imagem em um sistema 
óptico hipotético (extraída de “A Célula” – Carvalho, H.F. & Recco-Pimentel, S.H., 2007). 
1. Fonte de luz. 
2. Um sistema de lentes com função de concentrar a luz sobre o objeto (lâmina ou 
slide), que no caso do microscópio, se chama condensador. 
3. O objeto que é atravessado pela luz (material biológico colocado sobre a lâmina, 
caso do microscópio: ou filme fotográfico, no caso do projetor). 
4. Lente objetiva, formando uma imagem real, aumentada e invertida. 
5. Uma lente intermediária, situada no plano de formação da imagem, com a 
função de condensar a luz proveniente desta, sobre a lente ocular, a qual 
confere o aumento. No caso do projetor de slide, consta de um anteparo para a 
projeção da imagem. 
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6. Lente ocular, que forma a imagem final do objeto ao microscópio. Esta imagem 
é virtual, aumentado e invertida. 
7. Olho do observador. 
 
PROCEDIMENTO CORRETO PARA A FOCALIZAÇÃO 
 
1. Destrave o microscópio movimentando a alavanca. Verifique a posição da alavanca 
quando está travada e destravada. 
2. Gire o revólver, encaixando a objetiva panorâmica (4x). Faça isso, olhando 
lateralmente, para evitar que alguma objetiva toque na platina. Verifique se cada 
objetiva está realmente encaixada, pelo ruído característico do encaixe. 
3. Pegue a lâmina, segurando-a apenas pelas bordas. Verifique se a lamínula está 
voltada para cima. 
4. Abra a presilha e coloque a lâmina sobre a platina, encaixando-a ao “charriot”. 
Solte a presilha e verifique se a lâmina está bem encaixada. Centralize o material 
no orifício da platina. Caso seja necessário, abra o diafragma, movimentando a 
alavanca correspondente. 
5. Acenda a luz do microscópio. 
6. Verifique se o diafragma está aberto, olhando lateralmente se há passagem de luz 
através do orifício da platina. Caso seja necessário, abra o diafragma, 
movimentando a alavanca correspondente. 
7. Certifique-se se o condensador encontra-se em posição mais elevada. 
8. Levante a platina até o seu ponto máximo movimentando o parafuso macrométrico. 
9. Olhando através da ocular e utilizando o parafuso macrométrico, abaixe lentamente 
a platina, até que o material a ser observadopossa ser visto. Assim que isto ocorrer, 
corrija a focalização usando o parafuso micrométrico. 
10. Explore o preparado, movimentando os parafusos do “charriot” com uma das mãos 
e o parafuso micrométrico com a outra. Coloque sempre o material a ser analisado 
no centro do campo de observação, antes de passar para a objetiva de aumento 
imediatamente superior. OBS.: procure observar ao microscópio sempre com os 
dois olhos abertos. 
11. Encaixe a objetiva de pequeno aumento (10x) e faça o ajuste da focalização, 
utilizando apenas o parafuso micrométrico. Observe o campo atentamente. 
12. Selecione uma determinada área do material, centralize-a e encaixe a objetiva de 
40x (médio aumento). Faça o ajuste da focalização, utilizando o parafuso 
micrométrico. 
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13. Terminando a observação, desligue a luz, gire o revólver para encaixar a objetiva e 
menor aumento (passando pela objetiva de 10x) e retire a lâmina. OBS.: nunca 
movimente a platina do microscópio com a objetiva de maior aumento ou de 
imersão encaixada. 
 
ATIVIDADES PRÁTICAS 
1. A figura 2 é o desenho esquemático de um microscópio de luz mostrando seus 
diversos componentes. Escreva o nome e a função de cada componente. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Fig. 2 – Representação esquemática de um microscópio de Luz (extraída de Mello e Vidal, 
1980) 
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5.______________________________________________________________________
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6.______________________________________________________________________
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8.______________________________________________________________________
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9.______________________________________________________________________
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10._____________________________________________________________________
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11._____________________________________________________________________
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2. Retire a caixa de lâmina contendo a letra a e coloque-a sobre a platina, de 
modo a manter a letra na posição em que a ela é lida. Focalize, conforme o 
procedimento descrito nas páginas 4 e 5. Observe a posição da letra na imagem 
formada pelo microscópio com a objetiva de 4x. 
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3. Responda as questões de A a D. 
A) Faça esquema da posição e tamanho da letra observada, a vista desarmada e nos 
aumentos de 40x e 100x. 
 
 
 
 Lâmina 
 Aumento: 40x/100x Aumento:200x/400x 
 
B) Qual a diferença observada quanto a posição da imagem? 
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C) Utilizando as diferentes objetivas, o que se pode dizer quanto: 
- Ao tamanho da imagem nas respectivas objetivas? 
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- À área do campo da observação? 
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D) Por que é recomendável centralizar o material no campo, a cada mudança da 
objetiva? 
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OBSERVAÇÃO DOS ORGANISMOS VIVOS 
1. Coloque sobre uma lâmina uma gota de água proveniente de um lago. Cubra com 
uma lamínula, encostando um de seus bordos na gota e deixando-a descer 
suavemente, minimizando a formação de bolhas de ar. Focalize conforme 
procedimento descrito nas páginas 4 e 5. Tente acompanhar os movimentos dos 
organismos através da lâmina, utilizando-se dos parafusos do “charriot”. 
OBS.: Para observar os organismos mais transparentes, diminua a luminosidade, 
usando o diafragma. 
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2. Observe e faça o desenho esquemático de alguns tipos celulares.