Aula 7 Identificação de Enterobacterias

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Centro Universitário Mauricio de Nassau
Disciplina de Microbiologia Clínica 
Recife/PE
Professora Gleiciere Maia Silva
Especialista em Microbiologia Médica e Micologia
Mestre em Biologia de Fungos
Doutoranda em Biociências e Biotecnologia em Saúde
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Diagnóstico Laboratorial das |nfecções causadas por Enterobactérias
 Conhecer as principais bactérias Gram negativas da familia Enterobacteriaceae
 Aprender as identificar através de testes bioquímicos os principais grupos de microrganismos
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Diagnóstico Laboratorial das |nfecções causadas por Enterobactérias
 Maior e mais heterogênea família de bactérias Gram negativas de importância médica. 
 25 espécies. 
Bastonetes Gram-negativos, anaeróbios facultativos, móveis ou imóveis, sendo, quando móveis, portadores de flagelos peritríquios, oxidase positivos, fermentativos (Prova de OF), e reduzem nitratos a nitritos.
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Diagnóstico Laboratorial das |nfecções causadas por Enterobactérias
 Habitat: Trato gastrointestinal de humanos, no reino animal, na água, solo e vegetais. 
 Enteropatógenos.
 Representam 80% ou mais de todos os gram negativos de importância clínica isolados na rotina microbiológica. 
 Responsáveis por 70% das infecções urinárias e 50% das septicemias (ANVISA,2008).
Escherichia coli, Klebsiella spp., Enterobacter spp, Proteus spp, Providencia spp, Morganella spp, Citrobacter spp, Salmonella spp, Shigella spp, Serratia spp.
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Diagnóstico Laboratorial das |nfecções causadas por Enterobactérias
 Alguns gêneros apresentam características morfocolonial típicas: 
Klebsiella spp e Enterobacter spp pode se apresentar na forma de colônias mucóides ; 
Proteus spp apresenta um véu espalhando-se por toda a placa;
Yersinia spp colônias pequenas e puntiformes;
 Serratia spp apresenta pigmentação vermelha quando incubada no meio de Mueller-Hinton a temperatura ambiente, devido a uma substância conhecida como prodigiosina 
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Os caracteres indicador, seletivo e diferencial dos meios de cultura utilizados no isolamento primário das amostras para cultura, manifestam-se das seguintes formas: 
Agar MacConkey: distingue os gêneros fermentadores de lactose dos não fermentadores. 
Os que fermentam a lactose tomam a cor rosa ou avermelhada os que não fermentam apresentam-se incolor . 
Diagnóstico Laboratorial das |nfecções causadas por Enterobactérias
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Diagnóstico Laboratorial das |nfecções causadas por Enterobactérias
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Diagnóstico Laboratorial das |nfecções causadas por Enterobactérias
 Gastroenterites e infecções extraintestinais como infecções no trato urinário, meningites e sepses.
 A disseminação de E. coli é feita de pessoa – pessoa pela rota fecal-oral ou por contaminação de alimentos, água, leite e alimentos mal cozidos. 
 As cepas de E.c que causam gastroenterites são subdivididas em 5 grupos principais: 
Escherichia coli
 Enterotoxigenica (ETEC), Enteropatogenica (EPEC), Enteroagregativa (EAEC), Entero-hemorragica (EHEC), Enteroinvasiva (EIEC)
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Diagnóstico Laboratorial das |nfecções causadas por Enterobactérias
 Formas de infecção:
 Salmonella entérica- typhi, S. paratyphi.
Salmonella spp
Gastroenterites
Septicemia
Febre entérica 
Colonização assintomática
Febre tifóide
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Diagnóstico Laboratorial das |nfecções causadas por Enterobactérias
S.dysenteriae, S. flexneri, S.boydii, S. sonnei. 
 Shigella causa doença invadindo e se multiplicando nas células que revestem o cólon. 
 Reservatório: humanos
 Doença pediátrica (60%-menores de 10 anos).
Transmissão: pessoa a pessoa pela via oro-fecal, mãos contaminadas e menos comumente em água e alimentos.
Shigella spp
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Diagnóstico Laboratorial das |nfecções causadas por Enterobactérias
 Cápsula proeminente que é responsável pelo aumento da virulência dos micro-organismos e aparência mucoide das colônias isoladas . 
 K.pneumoniae e k. oxytoca são frequentemente isoladas e podem causar pneumonia.
 Destruição necróticas dos espaços alveolares, a formação de cavidades e produção de escarro com sangue. 
 Causa feridas, infecções nos tecidos moles e infecções do trato urinário.
Klebsiella spp e Enterobacter spp
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Diagnóstico Laboratorial das |nfecções causadas por Enterobactérias
 Infecção do trato urinário. P. vulgaris 
 Proteus mirabilis e P. vulgaris
 Favorece o aumento do pH da urina precipitando magnésio e cálcio , resultando na formação de cristais e formando cálculos renais.
Proteus spp, Morganella morganni e Providencia spp- 
 Uréia
Urease
Co2
NH3
 P. vulgaris 
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Exame Macroscópicos
Exame Microscópico
Provas Bioquímicas
Provas Sorológicas
Diagnóstico Laboratorial das |nfecções causadas por Enterobactérias
 Cultura: Meios seletivos: ágar MacConkey, ágar SS.
 O uso permite a separação das enterobacterias fermentadoras de lactose + ou não.
Determinar a importância clínica do isolado (ex: cepas patogênicas sorotipo especifico) e finalidade epidemiológica.
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Diagnóstico Laboratorial das |nfecções causadas por Enterobactérias
Principais Provas de Identificação
 MEIO IAL (INSTITUTO ADOLFO LUTZ)
Este meio foi elaborado para triagem de enterobactérias e consiste de 9 provas em apenas um tubo de ensaio, que consistem em: indol (tampa), fermentação da sacarose e glicose e produção de gás, fenilalanina, uréia, H2S, Lisina, Motilidade.
CONJUNTO EPM / MILI / CITRATO
Trata-se praticamente da mesma combinação de reações do meio IAL ou Rugai & Araújo (modificado por Pessoa & Silva), separados em 2 tubos, passando a verificação do indol da tampa do IAL, para o meio MILi após adição do reativo de Kovacs.
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 MEIO IAL 
Diagnóstico Laboratorial das |nfecções causadas por Enterobactérias
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Diagnóstico Laboratorial das |nfecções causadas por Enterobactérias
Principais Provas de Identificação
1. Fermentação da glicose
2. Fermentação da lactose
3. Motilidade
4. Utilização de citrato
5. Descarboxilação da lisina
6. Produção de sulfeto de hidrogênio (H2S)
7. Produção de gás (CO2)
8. Oxidase
9. Produção de indol
10. Produção de urease
11. Produção de fenilalanina desaminase ou opção triptofanase
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Triagem - TSI (triple sugar iron) : avalia a capacidade de a bactéria fermentar ou não, glicose, lactose, sacarose; produzir ou não H2S; produzir ou não gás (CO2) .
Demais testes: 
S I M - avalia a capacidade de a bactéria produzir ou não, H2S; de produzir ou não indol e de ser ou não móvel.
Uréia - avalia a capacidade de a bactéria hidrolizar ou não, a uréia .
Citrato - avalia a capacidade de a bactéria utilizar ou não o carbono (C) de uma fonte inorgânica que é o citrato sódico .
Outras provas adicionais poderão ser utilizadas quando se encontrar dificuldades na identificação utilizando apenas os meios acima descritos. Sugerimos os seguintes meios: LDC (lisina descarboxilase), ODC (ornitina descarboxilase), Malonato, fenilalania desaminase
Diagnóstico Laboratorial das |nfecções causadas por Enterobactérias
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Negativo
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 MEIO TSI (TRÍPLICE AÇUCAR FERRO) 
Considerado o mais clássico dos sistemas de identificação, necessita de provas adicionais, mas tem a vantagem de ser de mais fácil interpretação.
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Diagnóstico Laboratorial das |nfecções causadas por Enterobactérias
Principais Provas de Identificação: SIM
 Motilidade e H2S e Indol (reativo de Kovacs). 
 Inoculação da bactéria através de picada central e incubar 24hs/35 C, adicionar 3 gotas de reativo de Kovacs após a leitura dos demais para o teste de indol.
 Motilidade: (+) meio turvo (-) meio límpido ou crescimento só no local do inóculo.
 SIM: coloração escura(+), meio permanece inalterado (-) .
 Indol: (+) formação de um anel rosa na superfície do meio.
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Diagnóstico Laboratorial das |nfecções causadas por Enterobactérias
Principais Provas de Identificação:Citrato de Simmons
 Inocular na superfície e incubar 24h/35oC
 Citrato positivo = azul e/ou crescimento no meio
 Citrato negativo = cor verde (inalterado)
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Uréia - avalia a capacidade de a bactéria hidrolizar ou não, a uréia
 Semeia por estrias em seguida incuba por 24 horas a 37ºC. 
Diagnóstico Laboratorial das |nfecções causadas por Enterobactérias
Principais Provas de Identificação: Uréia
Negativo
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Diagnóstico Laboratorial das |nfecções causadas por Enterobactérias
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Diagnóstico Laboratorial das |nfecções causadas por Enterobactérias
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Alcalino/ Ácido: Principais exemplos de bactéria de interesse: Shigella spp e Serratia spp
Ácido/ Ácido: E.coli/ Enterobacter spp e Klebsiella spp
Alcalino/ ácido/ H2S: Principais: Proteus mirabilis e Salmonella spp
TSI
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Diagnóstico Laboratorial das |nfecções causadas por Enterobactérias
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Referências Bibliográficas
Microbiologia- Gerard J. Tortora.
 Microbiologia Ilustrada- Willian A. Strohl
 Procedimentos Básicos em Microbiologia Clínica- Carmen Oplustil et al.
 ANVISA
Meu DEUS, eu sou um gênio!!!
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Centro Universitário Mauricio de Nassau
Disciplina de Microbiologia Clínica 
Recife/PE
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Mestre em Biologia de Fungos
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