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Técnicas de Obtenção de Espermatozóides ●MESA – microsurgical epidydimal sperm aspiration – ou aspiração microcirúrgica de espermatozóides do epidídimo (exposto); → Mais chances de colher SPTZ. ●PESA – percutaneous epidydimal sperm aspiration – ou aspiração percutânea de espermatozóides do epidídimo (agulha entrando); ↳ aspiração do epidídimo - Técnica é indicada para: homens com vasectomia e homens com azoospermia por obstrução dos ductos deferentes. Mesa e Pesa são as técnicas mais indicadas. ●TESA – testicular sperm aspiration – ou aspiração percutânea de espermatozóides do testículo; ●TESE – testicular sperm extraction – ou extração de espermatozóides do testículo. ↳ Todas essas técnicas permitem a obtenção de espermatozóides para fertilizar os óvulos através da técnica de injeção intracitoplasmática de espermatozóide (ICSI). ●MicroTESE - Microdissection Testicular Sperm Extraction – ou Extração de Espermatozóides por microdissecação testicular. Técnicas de Fertilização ●Coito Programado → Curto prazo → Mulher faz um tratamento hormonal com hormônios para estimular o desenvolvimento do(s) folículo(s), quando ele atinge o tamanho ideal, a mulher utiliza outro hormônio para induzir a liberação do óvulo (ovulação). → Após a indução da ovulação, o casal deverá manter relações sexuais próximas ao momento da ovulação, isto é, 36 horas após a injeção. ●FIV → Médio prazo → Origem fora do corpo da futura mãe. → Uso de drogas que estimulem a produção de mais de um óvulo por ciclo. → Óvulos são aspirados por uma agulha e colocados em uma substância cheia de nutrientes, para mantê-los vivos. → Os espermatozoides são colocados no mesmo recipiente, para que haja a fecundação. → Após sua fertilização, o óvulo é mantido em uma estufa, onde começa a ocorrer a divisão celular. → Depois de se formarem 8 ou 16 células, o embrião é colocado no útero da mulher. ●ICSI → Longo prazo (para quem tenha há muitos anos) →A injeção intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI). → Consiste em introduzir um único espermatozoide previamente selecionado dentro do óvulo e, dessa forma, realizar a fecundação. → Cortar o caminho percorrido pelos espermatozoides. → Sêmen do parceiro é coletado e introduzido diretamente no óvulo → Indicações ICSI: infertilidade de fator masculino grave ou quando há uma amostra limitada de SPTZ → oligospermia e vasectomia, doença infecciosa, infertilidade causa imunitária → amostras criopreservadas → após vários ciclos de FIV, baixo número de óvulos, ejaculação retrógrada. → Diferenças: Na fertilização, no laboratório, o espermatozoide deve penetrar sozinho no óvulo para ser fecundado. → ICSI, o espermatozoide é injetado no óvulo maduro, dessa forma, melhorando os índices de fertilização → etapas de tratamento são as mesmas → A paciente recebe estimulação do ovário, Coleta de óvulos e espermatozoides, Transferência do embrião no útero. Cultivo In Vitro ● Desenvolvimento dos ovócitos fecundados até o estágio de desenvolvimento do blastocisto. →Durante esse período, é que ocorre o processo de clivagem e posterior compactação dos blastômeros no estágio de mórula (até 5° dia), início da diferenciação embrionária, com a formação do blastocele (7° dia) → troca dos meios (finalidade nutrir os embriões), realizada 18 h depois da fecundação, quando os ovócitos são retirados do meio de fecundação e colocados em um meio de desenvolvimento (SOF) → No segundo dia e no quinto dia, é realizada a troca de metade da gota com meio SOF. → Limite legal de 14 dias para o cultivo de embriões humanos in vitro → Até o 13° dia para fazer a implantação, após esse prazo os embriões devem ser descartados. → SNC à 22/23 dia → 5° e 7° dia, momento ideal para fazer a implantação, pois após ocorrer a fertilização, irá ocorrer a formação de blastocistos → mórula (até 5° dia) → 7° formação dos blastocistos, dia seleção e avaliação final dos embriões para a transferência embrionária a fresco ou para o congelamento ●Passo-a-Passo → Dia 0 → Fecundação → FIV ou ICSI → Dia 1 → A fecundação se comprova a partir da observação do núcleo masculino e do núcleo feminino se fundindo. → Este estágio é conhecido como zigoto. → Dia 2 → Zigoto, que é uma célula única, irá começar a dividir-se para formar o embrião no processo chamado de primeira clivagem. → Divide-se uma ou duas vezes. → Dia 3 → A segunda clivagem acontece no dia 3 do embrião. → Momento em que se espera observar entre 7 e 8 células. → Avaliar: Quantidade de células, percentual de fragmentação, qualidade do citoplasma, entre outros fatores que indicam a qualidade do embrião. → Dia 4 → Assim como em todos os dias, a divisão de células do embrião continua, porém, não apresentam mudanças significativas para a observação, o embrião também não é retirado da incubadora → Dia 5 → É um momento muito importante na vida do embrião, pois ele atinge o estágio de blastocisto, onde dois grupos de células se dividem para que um deles dê origem à placenta (trofoectodermo) e outro dê origem ao bebê (massa celular interna). Ao retirar da incubadora, deve-se observar a massa celular interna e as células do trofectodermo, dependendo do desenvolvimento do embrião poderá repetir- se no dia 6 e excepcionalmente no dia 7. Em caso de diagnóstico pré-implantacional, serão retiradas algumas células do trofectodermo, que serão enviadas para análise. Punção Folicular ●Os ovócitos são coletados no interior dos folículos ovarianos, 34-36 horas após a administração hormonal, em pacientes submetidas à estimulação ovariana. ●Ovócito normal: → Forma esférica → 1° Corpúsculo Polar intacto → Espaço Perivitelínico pequeno → Citoplasma (Ooplasma) transparente, homogêneo e sem inclusões → zona pelúcida clara (camada de célula externa do óvulo) e o oolema (parte interna do óvulo) ● Características morfológicas: → Ideal: forma esférica; citoplasma transparente moderadamente granular e livre de inclusões; pequeno espaço perivitelino (EPV) livre de granulações com um único Corpúsculo Polar redondo e intacto; zona pelúcida clara. ●Podem apresentar dimorfismos: → Intra/extracitoplasmáticos: • Grânulos • Inclusões • Vacúolos • Ovócito disforme ●Dismorfismos (A) Grânulos difusos, (B) Grânulos citoplasmáticos localizados, (C) Aglomerados de R.E., (D) vacúolos, (E) zona pelúcida amorfa, (F) espaço perivitelino aumentado. ●Vacúolos, citoplasma escuro e fragmentos – diminui qualidade embrionária e gravidez Simulação ●Você irá explicar quantos óvulos serão retirados e testados na técnica de ICSI, e os espermatozóides pela técnica de MESA Além disso, irá explicar como será feita a fertilização dos óvulos, através da dessa técnica e que após a fertilização os embriões se desenvolverão em cultura até o dia 5° e 7° da transferência embrionária, podendo ficar armazenado até o dia 13° antes da introdução ●No laudo diz que foram recuperados 12 óvulos, o que é um número excelente de gametas. Se todos os óvulos forem fertilizados, há a chance de, ao final do desenvolvimento embrionário, restarem cerca de 12 embriões para transferência pela técnica de ICSI. Como a paciente possui 40 anos, a chance de gravidez dela é baixa e normalmente são transferidos de 2 embriões, os embriões excedentes devem ser preservados até 3 anos ou descartados.(fazer o que?) → Por lei só podem ser transferidos 2 embriões → Podendo ser preservados por até 3 anos, durante esse prazo podem ser reimplantados mais embriões ou descartar. ●Avaliação da condição genética do embrião → Os testes genéticos pré-implantacionais são técnicas utilizadas para avaliar a condição genética do embrião obtido por FIV ou ICSI. →PGD (Diagnóstico Genético Pré- Implantacional) →PGS (Screening Genético Pré- Implantacional) → evitar doenças genéticas e cromossômicas → evitar abortos de causa genética ●Criopreservação →Variações no estágio celular do embrião, tipo de crioprotetor e velocidade de resfriamento. →Objetivo final: Prevenção da formação de cristais de gelo dentro das células, condição incompatível com os sistemas biológicos. →Definição: Redução ou mesmo parada de todos os fenômenos biológicos (movimentos moleculares, reações químicas e atividades enzimáticas), as temperaturas inferiores a - 150 °C. Gametogênese Feminina