Relatório prática_ Biologia Molecular_01_Maria_Vera

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RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS - EaD
	
AULA ____
	
	
	DATA:
______/______/______
VERSÃO:01
01
RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS: Biologia Molecular 
DADOS DO(A) ALUNO(A):
01275626
	NOME: MARIA VERA LÚCIA TAVARES MENDES
	MATRÍCULA:
	CURSO: FARMÁCIA
	POLO: GARANHUNS
	PROFESSOR(A) ORIENTADOR(A): WELLINGTON SANTOS
	ORIENTAÇÕES GERAIS: 
· O relatório deve ser elaborado individualmente e deve ser escrito de forma clara e
· concisa;
· O relatório deve conter apenas 01 (uma) lauda por tema;
· Fonte: Arial ou Times New Roman (Normal e Justificado);
· Tamanho: 12;
Margens: Superior 3 cm; Inferior: 2 cm; Esquerda: 3 cm; Direita: 2 cm;
· Espaçamento entre linhas: simples;
· Título: Arial ou Times New Roman (Negrito e Centralizado). 
		TEMA DE AULA: EXTRAÇÃO DE DNA 
RELATÓRIO:
1. EXTRAÇÃO DE DNA DE MORANGO
A. Descrever detalhadamente o que ocorreu em cada etapa da extração
B. Identificar o que acontece biologicamente com as células
C. Anexar uma foto após conclusão do procedimento 
2. EXTRAÇÃO DE DNA DE HUMANO OU PLASMIDIAL
A. Descrever a função de cada uma das soluções utilizadas no protocolo 
B. Identificar o que acontece biologicamente com as células 
C. Apontar as diferenças entre a extração de DNA de morango e a extração de DNA humano ou plasmidial 
RELATÓRIO
1- EXTRAÇÃO DE DNA DE MORANGO:
· Descrever detalhadamente o que ocorreu em cada etapa da extração
· Identificar o que acontece biologicamente com as células
· Anexar uma foto após conclusão do procedimento 
Observação:
	 	Não foi feito a prática da extração de morango por falta de material no laboratório no dia da aula prática, não foi providenciado previamente. O professor e a técnica de laboratório que também estava presente afirmou que iria informar à coordenação do curso a falta de material.
RELATÓRIO
2- EXTRAÇÃO DE DNA DE HUMANO OU PLASMIDIAL:
· Descrever a função de cada uma das soluções utilizadas no protocolo 
· Identificar o que acontece biologicamente com as células 
· Apontar as diferenças entre a extração de DNA de morango e a extração de DNA humano ou plasmidial 
RELATÓRIO
Solução de Lise (NaOH e SDS): saponificação de lipídeos e rompimento da parede bacteriana pela solubilização da bicamada lipídica.
Solução de formação de protoplastos: isotônica (isosmótica) a fim de que não haja o rompimento das membranas das células bacterianas.
Lisozima: enzima presente nas lágrimas e muco, assim como na clara de ovo. Catalisam a hidrólise da ligação glicosídica entre N-acetilglucosamina (NAG) e ácido N-acetilmurâmico (NAM). Consequentemente, tratamento de bactérias Gram(+) com lisozima degrada as suas paredes bacterianas e resulta na lise das células. Bactérias Gram(-) como E. coli são resistentes à lisozima e ocorre somente o enfraquecimento da mesma. Peptideoglicano: peptídeo + polissacarídeo b(1---->4) NAG-NAM Peptideoglicano: Gram(+) ~ 250Å; Gram(-) ~ 30Å + parede externa complexa
O EDTA é um ácido que atua como ligante hexadentado, ou seja, pode complexar o íon metálico através de seis posições de coordenação. ... Também é usado durante tratamento endodôntico por ter uma função quelante e retirar íons cálcio (Ca2+). Essa afinidade com o cálcio, faz com que seja também utilizado como anticoagulante.
Glicose/Tris/EDTA: a glicose funciona para manter a pressão osmótica, enquanto que o Tris tampona as células em um pH 8.0. O EDTA liga-se a cátions divalentes da bicamada lipídica, fragilizando deste modo o envelope celular. Após a lise celular, o EDTA evita a degradação do DNA, ligando-se a íons Mg++ , que são cofatores necessários para a ação das nucleases bacterianas. 
SDS/hidróxido de sódio: esta mistura alcalina lisa as células bacterianas. O detergente SDS dissolve os componentes lipídicos do envelope celular. O hidróxido de sódio degrada a parede celular e desnatura os DNAs plasmidial e cromossômico em cadeias simples; os círculos intactos do DNA plasmidial permanecem concatenados. 
Acetato de potássio/ácido acético: o ácido acético neutraliza o pH, permitindo que as cadeias do DNA renaturem. Pedaços grandes de cadeias cromossômicas rompidas não voltam a hibridar perfeitamente, colapsando em um entrelaçado parcialmente hibridado. Ao mesmo tempo, o acetato de potássio precipita o SDS da suspensão celular, juntamente com os lipídeos e proteínas associados.
Isopropanol: o álcool rapidamente precipita os ácidos nucléicos, enquanto as proteínas precipitam mais lentamente. Portanto, uma precipitação rápida leva para baixo preferencialmente os ácidos nucléicos
Etanol 70%: a água presente no etanol 70% remove alguns sais e o SDS remanescentes da preparação. Tris/EDTA: o Tris tampona a solução de EDTA. O EDTA protege o DNA da degradação por DNases, ligando-se aos cátions divalentes (especialmente Mg++), que são cofatores necessários para a atividade da DNase
SDS: é um agente detergente que solubiliza lipídeos. É um desnaturante de proteínas e também rompe ligações não-covalentes inter-subunidades de proteínas oligoméricas. Também é utilizado para se certificar que nenhuma nuclease que não depende de Mg2+, cause qualquer degradação.
· Identificar o que acontece biologicamente com as células:
O fragmento de DNA ligado a um vetor de super-expressão será introduzido em células bacterianas hospedeiras.
Transformação é a introdução de moléculas de DNA em uma célula hospedeira (bactérias são ideais, mas células eucarióticas são utilizadas em alguns casos). Várias técnicas têm sido descritas para a introdução de DNA em células bacterianas:
· Apontar as diferenças entre a extração de DNA de morango e a extração de DNA humano ou plasmidial:
Observação:
Não foi possível verificar diferenças entre a extração de DNA de morango e a extração de DNA plasmidial, pois não foi feito a prática da extração de morango por falta de material no laboratório no dia da aula, não foi providenciado previamente. O professor e a técnica de laboratório que também estava presente afirmou que iria informar à coordenação do curso a falta de material.
AULA PRÁTICA
	A aula prática de Biologia Molecular foi de DNA Plasmidial, para extração DNA Plasmidial por lise alcalina em pequena escala.
 	Foram usadas soluções para extração do DNA.
	O procedimento seguido foi para retirar o DNA da bactéria E coli. 
	Crescimento bacteriano E coli
	A colônia de E coli foi crescida em meio por 16h a 37°c 
	Foi centrifugado por dez minutos, após centrifugar fica um sedmento precipitado, tem que descartar o sobrenadante (líquido).
Foi adicionado no tubo 100 microlitros da solução I (LDTA, GLICOSE, TRIS, HCL E LTDA) para manter estável o pH da célula bacteriana, estabilizar a célula.
200 microlitros da solução II (SDS 1%, gira por cinco vezes com a luva.
150 mililitros de tampão acetato de potássio PH 4,8 
Coloca-se 200 mililitros da solução II
Para acontecer a lise vira o tubo por três vezes com a solução I e II, acrescenta a solução III e aguarda por cinco minutos. Depois de cinco minutos centrifugar 2000 xg por 10 minutos.
Após centrifugar adiciona o sobrenadante ao etanol. 
O precipitado é descartado ficando em outro tubo.
No sobrenadante acrescenta 800 mililitros de etanol 
Centrifuga po cinco minutos
Descarta sobrenadante
Secar precipitado
30 mililitros de RNase
Depois de seco adicionar 30 mililitros no tubo seco
Coloca na geladeira.
IMAGENS DA AULA PRÁTICA
Coloca a bactéria e coli para centrifugar por 10 minutos
E coli
Centrifuga
Centrifuga
Bactéria após centrigugar
Sedmento precipitado
 						 
O DNA está no líquido que é o sobrenadante
O líquido é transferido para outro tubo.
Seca o tubo em papel toalha e o DNA fica dentro do tubo para ser analisado em eletroforese.
Proveta
 
Mistura água destilada com TBE, gel de agarose, vai para o micro-ondas, tira, mexe e coloca novamente no micro-ondas.
	 						 
Irá aguardar esfriar até 45 graus para colocar no suporte.Agarose 
						Aparelho de eletroferese
						Suporte e cuba
						
Espera 30 minutos p solidificar e mais 30 minutos p correr o gel.
Cuba com o gel
Observação: Não foi possível realizar todas as etapas seguintes por falta da fonte para conectar os cabos, o professor explicou todas as etapas.
Considerações finais:
	As aulas práticas de Biologia Molecular foram de grande importância, pois trouxeram bastante aprendizado para a prática profissional, como também despertaram a curiosidade para buscar mais informações sobre o tema estudado.
REFERÊNCIAS:
https://edisciplinas.usp.br/pluginfile.php/3126587/mod_resource/content/0/Apostila_Pra%CC%81ticas_2017.pdf
http://www.ufrgs.br/depbiot/discipl/rev-prat.htm