Artigo 6 O licopeno afeta as respostas imunes de porcos em terminação

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O licopeno afeta as respostas imunes de porcos em terminação
Marcelise Regina Fachinello,Nelson Luis Mello Fernandes ,Eliezer Rodrigues de Souto ,Tatiana Carlesso dos Santos ,Alcides Emanuel Rodrigues da Costa ePaulo Cesar Pozza
Resumo
O objetivo deste estudo foi avaliar os níveis de licopeno na dieta sobre as respostas imunes de porcos em terminação. Quarenta carrinhos de mão e 40 marrãs, com média de 75,04 ± 1,6 kg de peso inicial, foram distribuídos em um delineamento de blocos casualizados, em esquema fatorial 2 × 5, composto por dois sexos (machos e fêmeas) e cinco níveis de licopeno (0, 12,5, 25,0 37,5, 50,0 mg / kg de dieta). Os parâmetros estudados foram submetidos à análise estatística com significância de 5%. O aumento do licopeno nas dietas para suínos aumentou a albumina plasmática ( p  = 0,023). Não houve interação ( p  > 0,05) entre sexo e licopeno no perfil de leucócitos ou na concentração de hematócrito. À medida que os níveis de licopeno aumentavam na dieta, a concentração de linfócitos aumentava linearmente ( p = 0,045). A concentração de neutrófilos e a proporção de neutrófilos: linfócitos foram afetadas ( p  <0,05) pelos níveis de licopeno na dieta, mostrando uma menor concentração de neutrófilos em 17,49 mg de licopeno / kg de dieta e a menor proporção de neutrófilos: linfócitos foi observada em 16,46 mg / kg . Os eosinófilos também foram afetados ( p  = 0,050) pela suplementação de licopeno, estimando a maior resposta adicionando 22,69 mg de licopeno / kg de dieta. Houve uma interação ( p = 0,011) entre o período de coleta de sangue e os níveis de licopeno para anti-BSA IgG, resultando em maior produção de anti-BSA IgG com a suplementação de até 20,06 mg de licopeno / kg de dieta. A suplementação de licopeno na dieta para porcos de acabamento afetou a resposta imune celular e humoral, e a maior produção de IgG anti-BSA foi alcançada com a suplementação de 20,06 mg de licopeno / kg de dieta.
Palavras-chave: Imunoglobulinas ,  leucócitos ,  IgG ,  carotenóides
Introdução
A alta densidade dos animais e as condições ambientais em muitas fazendas de porcos a expõem a um número expressivo de bactérias patogênicas, vírus e também alguns parasitas. Como resultado, os nutrientes da dieta que poderiam ser direcionados para o desempenho do crescimento são redirecionados para o sistema imunológico, a fim de fornecer proteção contra microorganismos patogênicos, afetando diretamente o desempenho do porco. A adição de antioxidantes e compostos imunomoduladores naturais na dieta é considerada uma boa maneira de melhorar a saúde e o desempenho dos animais (Zhao et al. 2016) Na ausência de um processo infeccioso, a necessidade de elaborar uma resposta imune, por si só, é capaz de afetar a capacidade produtiva. No entanto, a ativação do sistema imunológico afeta a utilização de nutrientes e energia, e a ativação do sistema imunológico depende de um mecanismo muito complexo, que está sujeito aos efeitos de fatores internos e externos (Pechinskii e Kuregyan 2014 ).
Os carotenóides são antioxidantes e um dos fatores externos que podem afetar o sistema imunológico (Pechinskii e Kuregyan 2014 ), mostrando um amplo espectro de efeitos biológicos e atuando como imunomodulador, também afeta a função das células T e B, induz a diferenciação e inibe a proliferação de algumas células (Darroch 2001 ) e são capazes de afetar a imunidade celular e humoural (Zhao et al. 2016 ). O licopeno é um carotenóide que mostra uma capacidade expressiva de seqüestro de oxigênio singlete, possivelmente devido a suas duas ligações duplas não conjugadas, fornecendo uma reatividade mais alta que outros carotenóides (Shami e Moreira 2004 ).
O licopeno estimula o sistema imunológico agindo contra o dano oxidativo do DNA dos linfócitos (Palabiyik et al. 2013 ). Estimula os linfócitos aumentando a produção de IL-2 e interferon-gama (INF-δ), um potente ativador de linfócitos T (Yuksek et al. 2013 ). O licopeno também afeta a produção de imunoglobulinas, aumentando os níveis sanguíneos de IgA, IgG e IgM, e aumenta a imunidade (Lumeij 2008 ), estimulando a comunicação entre as células e aumentando a resposta imune (Olson et al. 2008 ).
Além disso, o licopeno é um potente antioxidante, bem como um inibidor de fatores pró-inflamatórios e pró-trombóticos (Türk et al. 2010 ). O licopeno suprime a inflamação em vários tecidos, inibindo a formação de citocinas e quimiocinas pró-inflamatórias em macrófagos (Lee et al. 2012 ; Marcotorchino et al. 2012 ), além de controlar processos imunológicos e inflamatórios crônicos e também atrasar a maturação das células dendríticas (Kim et al., 2004 ).
O papel imunomodulador do licopeno foi estudado, mas há uma falta de informações sobre a suplementação alimentar de licopeno no sistema imunológico dos porcos. Assim, este estudo teve como objetivo avaliar os níveis de licopeno na dieta sobre as respostas imunes de porcos de 75 a 100 kg.
materiais e métodos
O experimento foi realizado na Fazenda Experimental de Iguatemi - EFI, pertencente à Universidade Estadual de Maringá, Paraná, Brasil (23 ° 21′S, 52 ° 04′W e Altitude de 564m), de janeiro a maio de 2016. Todos os procedimentos experimentais foram previamente aprovados pelo Comitê de Cuidados e Uso de Animais (número de protocolo 6570200815).
Animais e instalações
Os porcos (Piétrain × Landrace × Large White) foram alojados em um celeiro de acabamento aberto, dividido em duas asas, cada uma composta por 20 currais (3 m 2 ). Cada caneta foi fornecida por um bebedor automático e um alimentador semi-automático, fornecendo acesso gratuito à alimentação e água durante todo o período experimental.
A temperatura foi registrada com o auxílio de um termômetro digital, instalado no centro do edifício experimental, registrando a temperatura mínima e máxima de 19,62 ± 2,54 ° C e 32,11 ± 3,2 ° C, respectivamente.
Desenho experimental e dieta
Quarenta carrinhos de mão e 40 marrãs, com média de 75,04 ± 1,6 kg de peso inicial, foram distribuídos em delineamento de blocos casualizados em esquema fatorial 2 × 5, composto por dois sexos (carrinhos de mão e marrãs) e cinco níveis de licopeno (0, 12,5, 25,0, 37,5 e 50,0 mg / kg de dieta), com oito repetições e um animal por unidade experimental. O período foi o critério adotado para estabelecer os blocos, uma vez que o edifício recebeu 40 canetas.
As dietas experimentais (Tabela 1 ) foram baseadas em milho, farelo de soja, minerais, vitaminas e aditivos, para atender às recomendações nutricionais propostas pelo Conselho Nacional de Pesquisa - NRC ( 2012 ). A fonte de licopeno utilizada nas dietas experimentais consistiu em um produto comercial contendo 10% de licopeno (extrato de licopeno) que foi adicionado às dietas às custas de 0, 125, 250, 375 e 500 mg de inerte / kg de dieta, correspondentes a 0, 12,5, 25,0, 37,5 e 50,0 mg de licopeno / kg de dieta, respectivamente.
Tabela 1. Ingredientes, composição química e energética da dieta basal.
Tabela de exibiçãoCSV
Imunização de suínos antes da coleta de sangue
Os porcos foram imunizados com 1 mg de uma solução de albumina sérica bovina (BSA) (A3912, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA) diluída com 0,5 mL de uma solução salina tamponada com fosfato (PBS) e 0,5 mL de um adjuvante , por imunização subcutânea (Li et al. 1999 ). Este procedimento foi realizado nos dias 0 e 12 do período experimental. O adjuvante completo de Freund (F5881, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA) foi utilizado na primeira inoculação (dia 0) e o adjuvante incompleto de Freund (F5506 Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA) foi utilizado. na segunda inoculação (dia 12) (Figura 1 ).
Figura 1. Protocolo de imunização e coleta de sangue para determinar IgG de albumina sérica antibovina (anti-BSA) por ELISA indireto.
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Coleta de sangue
Amostras de sangue foram coletadas no final do experimento para determinar o conteúdo total de proteínas e suas frações, perfil de hematócrito e leucócitos. Os porcos foram submetidos a jejum durante seis horas antes da coleta de sangue realizada por uma punçãoda veia jugular (Oliveira et al. 2004 ). Também foram coletadas amostras de sangue nos dias 0, 12 e 24 do período experimental para determinar a produção sérica de IgG.
As amostras de sangue foram colhidas em tubos de vidro contendo EDTA, para determinar as proteínas totais e suas frações, e a heparina foi utilizada em tubos de vidro para determinar o perfil de hematócrito e leucócitos, pois o soro sanguíneo foi utilizado para a determinação de IgG. Após a coleta, as amostras de sangue foram imediatamente centrifugadas a 3000 rpm durante 15 min, no Laboratório Suíno da EFI, a fim de obter o plasma e o soro, que foram extraídos dos tubos de vidro por uma pipeta automática e armazenados em microtubos do tipo Eppendorf em -20 ° C.
Determinação do perfil de hematócritos e leucócitos
Tubos de vidro contendo amostras de sangue foram colocados em um homogeneizador automático durante 5 minutos antes da determinação do hematócrito. Depois disso, as amostras de sangue foram transferidas para microtubos capilares e centrifugadas a 13.416 × g durante cinco minutos. A porcentagem de hematócrito foi determinada usando uma escala percentual.
Um esfregaço de sangue foi preparado em lâminas de vidro e depois corado pelo método de May-Grunwald-Giemsa. A contagem diferencial foi realizada em microscópio óptico, com objetivo de imersão, e as células foram classificadas em linfócitos, eosinófilos, monócitos, neutrófilos e basófilos, calculando a proporção de cada 100 células.
Total de proteínas e frações
As proteínas totais (TP) e as albuminas (AB) foram determinadas utilizando kits específicos (Bioclin ® ), de acordo com os procedimentos operacionais padrão descritos para cada parâmetro. A leitura da absorvância foi realizada em um Analisador Bioquímico (Bioplus ® 2000, Brasil). A quantificação das globulinas (GL) foi realizada pela diferença entre AB e TP, e a razão AB: GL também foi calculada.
Produção de IgG de albumina sérica anti-bovina (anti-BSA)
A produção de IgG anti-BSA foi determinada usando a técnica ELISA indireta. As placas ELISA de 96 poços foram revestidas com uma solução (100 μL / poço) contendo 0,01 mg de BSA / mL de tampão de carbonato (pH 9,6). As placas foram então incubadas a 4 ° C durante 16 h. Uma solução de bloqueio foi usada a 100 μL / poço e a placa foi incubada por 1 h a 37 ° C. As amostras de soro foram testadas em triplicata (100 μL / poço, 1: 10.000) e incubadas em estufa por 2 h a 37 ° C. O antígeno IgG conjugado à peroxidase produzida por coelho (100 μL / poço, 1: 30.000, SAB3700420, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA) foi adicionado e incubado por 1 hora a 37 ° C. Em seguida, foram adicionados 00 μL / poço do substrato 3,3 ′, 5,5 ′, - tetrametilbenzidina (TMB) (T0440, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA) e incubados durante 30 minutos a 27 ° C . A reação foi interrompida usando HCl (2M, 100 μL / poço).
A produção de IgG anti-BSA foi quantificada por meio de leitura de absorvância, com medições em um leitor de placas ELISA (SMP500 - 13334-RCPP acoplado ao número de série do SoftMaxR Pro 5) a 450 nm e os resultados foram expressos em densidade óptica. As placas foram lavadas três vezes com uma solução de lavagem de NaCl e Tween-20 entre cada etapa acima mencionada. Para determinar a diluição ideal de soro e antipig IgG, para fazer as leituras de absorvância, uma série de diluições foi testada. O soro foi testado nas diluições 1: 1000, 1: 5000, 1: 10.000, 1: 15.000, 1: 20.000 e o antígeno IgG foi testado nas diluições 1: 5000, 1: 10.000, 1: 15.000; 1: 30.000; 1: 50.000. As melhores leituras foram obtidas em 1: 10.000 e 1: 30.000, para soro e antígeno IgG, respectivamente.
Análise estatística
O procedimento UNIVARIATE do SAS (Statistical Analysis System, versão 9.0, Cary, NC, EUA) foi aplicado para avaliar a presença de discrepantes. Posteriormente, os dados foram submetidos à análise de variância (ANOVA) e os efeitos das interações entre blocos, sexo, licopeno e sexo × licopeno foram incluídos no modelo. Além disso, para a produção de IgG anti-BSA, os efeitos de interações dias, sexo × dias, licopeno × dias e dias × sexo × licopeno foram incluídos no modelo.
Os graus de liberdade em relação aos níveis de licopeno e / ou dias de coleta foram implantados em polinômios ortogonais para ajustar as equações de regressão por meio dos modelos quadrático e / ou linear, assim como o modelo Linear Response Plateou (LRP) também foi ajustado. Os dados foram submetidos à análise estatística utilizando o SAS (Statistical Analysis System, versão 9.0, Cary, NC, EUA). O nível de significância de 5% foi adotado para todos os procedimentos estatísticos.
Resultados
Total de proteínas e frações
Não houve interação entre sexo e licopeno (Tabela 2 ) no TP ( p  = 0,971), AB ( p  = 0,430), GL ( p  = 0,648) e relação AB: GL ( p  = 0,527). A inclusão de licopeno nas dietas de suínos afetou as frações plasmáticas das proteínas, com um aumento linear ( p  = 0,023) na concentração plasmática de albumina, à medida que o licopeno aumentou na dieta ( Ŷ  = 0,0071x + 3,23; R 2  = 0,89 )
Tabela 2. Proteínas plasmáticas de carrinhos de mão e marrãs, de 75 a 100 kg, alimentadas com dietas contendo diferentes níveis de licopeno.
Tabela de exibiçãoCSV
As razões TP, GL e AB: GL não foram afetadas ( p  > 0,05) pelos níveis de licopeno. Entretanto, o sexo afetou as frações plasmáticas das proteínas, com as marrãs com  concentrações mais altas de TP ( p  = 0,001) e GL ( p = 0,001) e menores concentrações de AB ( p  = 0,049) e AB: GL ( p  = 0,001) do que carrinho de mão.
Perfil de leucócitos e hematócrito
Não houve interação ( p>  0,05) entre os níveis de sexo e licopeno no perfil de leucócitos e hematócrito (Tabela 3 ). O perfil de linfócitos foi afectada por níveis de licopeno dietéticos, com um aumento linear ( p  = 0,045) na concentração de linfócitos como o licopeno aumentada ( Ŷ  = .1382x + 68,81; R 2  = 0,58) em dietas para suínos (machos castrados e fêmeas).
Tabela 3. Perfil de leucócitos no sangue e hematócrito de carrinhos de mão e marrãs, de 75 a 100 kg, alimentados com dietas contendo diferentes níveis de licopeno.
Tabela de exibiçãoCSV
Os neutrófilos foram linearmente (p  = 0,024) e quadraticamente ( p  = 0,003) afetados pelos níveis de licopeno na dieta, de acordo com as equações Ŷ  = −0,1225x + 19,87 ( R 2  = 0,35) e Ŷ  = 0,0110x 2  - 0,6710x + 23,26 ( R 2  = 0,97), respectivamente. O modelo LRP também foi equipado ( Ŷ  = -0.66x + 23,75; R 2 = 1,00) e a sua associação com o modelo quadrático mostrou um células de neutrófilos inferiores a 17,49 mg de licopeno / kg de dieta (Figura 2 (A) ). O neutrófilo: proporção de linfócitos estava linearmente ( Ŷ  = -0.002592x + 0,328; R 2 = 0,33) e quadraticamente ( Ŷ  = 0.00024x 2  - 0.146x + 0,4024; R 2  = 0,97) afectada por níveis de licopeno dietéticas ( p  = 0,005), e também o modelo LRP ( Ŷ = -0.01x + 0,4114; R 2 = 1,00). A associação dos modelos quadrático e PRL mostrou a menor proporção de neutrófilos: linfócitos no nível de 16,46 mg de licopeno / kg de dieta (Figura 2 (B) ).
Figura 2. (A) Concentração de neutrófilos / total de 100 células e (B) proporção de neutrófilos: linfócitos no sangue de porcos (carrinhos de mão e marrãs) recebendo dietas contendo diferentes níveis de licopeno.
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Os eosinófilos apresentaram resposta quadrática ( p  = 0,050) em função da suplementação com licopeno, de acordo com a equação Ŷ  = −0,0016x 2 +0,0726 + 1,79 ( R 2  = 0,69), mostrando a maior concentração de eosinófilos adicionando 22,69 mg de licopeno / kg de dieta. Os outros parâmetros, como basófilos, monócitos e hematócrito, não foram afetados ( p  > 0,05) pelos níveis de licopeno na dieta. O sexo afetou apenas os monócitos ( p  = 0,047), nos quais as porcas jovens apresentaram uma concentração mais baixa que as carrinhos de mão.
Produção de IgG anti-BSA
Houve uma interação ( p  = 0,011) entre os períodos de coleta (dias) e os níveis de licopeno para a produção de IgG anti-BSA (Tabela 4 ). O resultado dessa interação mostrou um melhor ajuste para o modelo quadrático( R 2  = 0,95) do que o linear ( R 2  = 0,57) no dia 24, representado pela equação Ŷ = −0,0005x 2 + 0,03098x + 0,52678 ( R 2  = 0,95), estimando a maior concentração de IgG adicionando 30,98 mg de licopeno / kg de dieta. O modelo LRP também foi ajustado ( Ŷ  = 0,02x + 0,5333; R 2 = 0,99), com a maior concentração de IgG sendo observada em 20,0 mg de licopeno / kg de dieta. O maior coeficiente de determinação ( R 2  = 0,99) (Figura 3 ) foi observado para o modelo PRL, mostrando o melhor ajuste entre todos os modelos testados.
Figura 3. Absorvência de IgG anti-BSA usando ELISA, 24 dias após o início da suplementação com licopeno na dieta de porcos (suínos e marrãs), de 75 a 100 kg.
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Tabela 4. Licopeno dietético para carrinhos de mão e marrãs, de 75 a 100 kg, na produção de IgG em diferentes períodos de coleta.
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A produção de IgG anti-BSA aumentou linearmente durante o estudo em todos os níveis de suplementação com licopeno (Figura 4 ), observada pelas equações Ŷ  = 0,0215x - 0,0071 ( R 2  = 0,98), Ŷ  = 0,0330x - 0,0333 ( R 2  = 0,94) , Ŷ  = 0,0442x - 0,0553 ( R 2  = 0,94), Ŷ  = 0,0406x - 0,04628 ( R 2  = 0,95) e Ŷ  = 0,0391x - 0,0391 ( R 2  = 0,96) para os níveis de licopeno de 0, 12,5, 25,0, 37,5 e 50,0 mg, respectivamente.
Figura 4. Absorvência de IgG anti-BSA usando ELISA, ao longo dos 24 dias após o início da suplementação com licopeno na dieta de porcos (suínos e marrãs), de 75 a 100 g.
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Discussão
O sistema imunológico possui um grande número de proteínas plasmáticas distintas que reagem entre si para opsonizar patógenos e induzem muitas respostas inflamatórias que ajudam a combater a infecção. Em condições de processos inflamatórios, pode haver uma redução do TP, e geralmente há uma alteração na relação AB: GL com um aumento no GL total, mas essa reação não foi observada neste estudo. Além disso, não houve efeito no TP e GL, mas o AB aumentou de acordo com a inclusão de licopeno na dieta, embora a relação AB: GL não tenha sido afetada pelos níveis de licopeno (Tabela 2 ).
A relação AB: GL indica condições inflamatórias (Lumeij 2008 ) e deve estar um pouco acima de 1,0 para ser considerada uma condição normal, pois uma baixa relação AB: GL pode refletir uma superprodução de GL ou um déficit na produção de AB, ou ainda, uma a perda seletiva de AB da corrente sanguínea e uma alta relação AB: GL sugerem uma deficiência na produção de imunoglobulina (Miyada et al. 1997 ). A concentração de AB envolve o transporte de vários compostos químicos exógenos e metabólitos endógenos e regula a pressão osmótica, enquanto o GL é uma parte importante do sistema imunológico (Yuksek et al. 2013) Uma diminuição dos níveis de AB pode levar ao uso de armazenamentos de AB prontamente acessíveis ou a uma síntese reduzida pelos hepatócitos e a redução dos níveis de GL pode indicar uma imunidade reduzida, uma vez que o fígado se tornou incapaz de sintetizar a GL para fins de atividades imunológicas (Narra 2016 ). Como mencionado acima, o aumento nos níveis de AB (Tabela 2 ) pode indicar que o licopeno reduziu o estresse oxidativo em porcos e, assim, minimizou a degradação.
As proteínas plasmáticas também são facilmente afetadas por fatores fisiológicos, nutricionais, sexuais, ambientais e genéticos (Colditz 2002 ; Yuksek et al. 2013 ). Neste estudo, as porcas jovens apresentaram concentrações mais altas de TP e GL do que as carrinhos de mão, como concentrações mais baixas de AB e AB: GL. Os níveis mais altos de TP observados para as marrãs podem ser devidos a uma maior necessidade nutricional de proteínas em comparação com carrinhos de mão (Conselho Nacional de Pesquisa 2012 ), que podem afetar diretamente suas concentrações sanguíneas.
Os leucócitos são a primeira linha de defesa do sistema imunológico e, quando desafiados por patógenos, os leucócitos agem diretamente sobre ele, primeiro pelo subgrupo de leucócitos polimorfonucleares, incluindo neutrófilos, eosinófilos e basófilos, que suprimem o invasor por fagocitose. Neste estudo, a suplementação de licopeno afetou distintamente a proliferação de leucócitos. Os neutrófilos são frequentemente associados a infecções clínicas e subclínicas (Mortara et al. 2015 ) causadas por bactérias e a menor concentração de neutrófilos foi obtida com a suplementação de 17,49 mg de licopeno / kg de dieta (Figura 2 (A)), de acordo com a associação dos modelos quadrático e LRP. Da mesma forma, os eosinófilos foram afetados pelos níveis de licopeno e a maior concentração foi estimada pelo modelo quadrático ao suplementar 22,69 mg de licopeno / kg de dieta.
Os neutrófilos, juntamente com os macrófagos, são fontes de espécies ativas de oxigênio (AOS) e desempenham um papel importante na imunidade celular. Os neutrófilos usam a mieloperoxidase para transformar o peróxido de hidrogênio, resultante da conversão de ânions superóxido pela superóxido dismutase, no íon hipoclorito, um bactericida altamente ativo, enquanto os macrófagos geram um radical hidroxila (Pechinskii e Kuregyan 2014 ). O equilíbrio da AOS é mantido usando antioxidantes endógenos e exógenos, incluindo carotenóides (Pechinskii e Kuregyan 2014 ), sendo o licopeno o carotenóide predominante no plasma sanguíneo.
O sistema imunológico é extremamente sensível a danos oxidativos, devido à alta concentração de ácidos graxos poliinsaturados em sua membrana plasmática e à produção de espécies reativas de oxigênio, podendo comprometer a capacidade do sistema imunológico de produzir uma resposta imune (Meydani et al., 1995 ). Portanto, uma quantidade adequada de antioxidantes é importante, além de interferir positivamente na resposta imune, promovendo a neutralização dos radicais livres, os quais têm sido associados ao envelhecimento, danos e morte celular em animais e humanos (Darroch 2001 ).
O segundo subgrupo são leucócitos mononucleares, que incluem monócitos (macrófagos) e linfócitos (células B, células T e células matadoras naturais). Os monócitos ingerem células mortas ou danificadas (através da fagocitose) e fornecem defesas imunológicas contra muitos organismos infecciosos; os linfócitos já identificam substâncias estranhas e invasoras no corpo e produz anticorpos e células que as visam especificamente. No presente estudo, as células linfocitárias aumentaram em todos os níveis de suplementação de licopeno nas dietas de porcos. Esses resultados estão de acordo com o observado por Watzl et al. ( 2003 ), em que a ingestão diária de suco de tomate (37,0 mg / dia licopeno) por homens saudáveis ​​aumentou a proliferação linfocitária e a citotoxicidade das células assassinas naturais. Além disso, Hasegawa et al. ( 2010) relataram que o licopeno pode modular o potencial de produção de citocinas nas células T ou ativar indiretamente as células T.
A proporção de neutrófilos: linfócitos são biomarcadores inflamatórios usados ​​como fatores prognósticos em muitas doenças e infecções inflamatórias (Forget et al. 2017 ). Como os neutrófilos e os linfócitos foram afetados pelo licopeno na dieta (Tabela 3 ), sua proporção também foi afetada, resultando em uma melhor resposta adicionando 16,46 mg de licopeno / kg de dieta, fornecendo a menor proporção de neutrófilos: linfócitos (Figura 2 (B) ), também obtido pela associação dos modelos quadrático e LRP.
Apesar dos resultados obtidos sobre os efeitos do licopeno nas células leucocitárias, principalmente nos linfócitos, pouco se sabe sobre o licopeno afetando a ativação, proliferação e diferenciação dos plasmócitos secretores de imunoglobulina (anticorpos). Sabe-se que dietas enriquecidas com licopeno e outros carotenóides aumentam os linfócitos B e a IgG sérica, após 7 dias de tratamento, sugerindo que a suplementação alimentar à base de carotenóide pode aumentar a produção de linfócitos B e a concentração de imunoglobulinas circulantes (Garcia et al. 2003 ).
A resposta específica do anticorpo à ovalbumina é uma característica da imunidade humoral (Zhao et al. 2016 ), porque as imunoglobulinas são sintetizadas e excretadaspelas células plasmáticas derivadas dos linfócitos B. A IgM é o primeiro anticorpo formado quando os glóbulos brancos são inicialmente expostos a um antígeno e, quando expostos a um antígeno pela segunda vez, o porco cria níveis muito altos de anticorpos, principalmente a classe IgG, e os glóbulos brancos deixam de sintetizar IgM a IgG, após uma exposição contínua ao antígeno (Chu e Song 2013 ).
A IgG sérica é considerada o principal constituinte da imunoglobulina no sangue e é o anticorpo mais importante da resposta imune secundária, além de ter alta afinidade pela ligação específica ao antígeno (Chu e Song 2013 ), é o objetivo deste estudo. A produção de IgG anti-BSA foi avaliada e observou-se que a IgG anti-BSA aumentou ao longo dos dias da avaliação em todos os níveis (0, 12,5, 25,0, 37,5 e 50,0 mg) de suplementação de licopeno (Figura 4 ). Essa resposta mostra que o licopeno afeta a construção da imunidade, como o efeito foi observado ao longo do tempo.
No entanto, o estímulo máximo fornecido pelo licopeno não foi alcançado, provavelmente devido a um curto período de avaliação (24º dia), sugerindo um período mais longo para o efeito máximo do licopeno na produção de IgG anti-BSA. Essa estimulação do licopeno na produção de IgG foi observada em outros estudos, como o realizado por Luo e Wu ( 2011 ), mostrando que o licopeno pode aumentar os níveis sanguíneos de IgA, IgG e IgM, melhorando a imunidade de ratos com câncer. Da mesma forma, Neyestani et al. ( 2007 ) observaram que a suplementação dietética de licopeno estimula a formação de anticorpos específicos, principalmente o isotipo IgG, relatando que o licopeno não é apenas um intensificador imunológico comum, pois fornece uma estimulação imunológica específica.
A suplementação com licopeno mostrou um efeito benéfico na produção a longo prazo de IgG anti-BSA, aumentando até o 24º dia do período experimental, e foi observada a estimulação da imunidade humoral complementando até 20,06 mg de licopeno / kg de dieta (Figura 3 ) Como se torna um mediador imune, nem sempre a maior concentração de suplementação nutracêutica promove a melhor resposta imune (Moraes et al. 2012 ). Avaliando três níveis alimentares de vitamina E (30, 65 e 100 mg / kg) para frangos de corte, Silva et al. ( 2009) observaram que a concentração intermediária promoveu a maior produção de anticorpos contra a doença de Newcastle. Da mesma forma, este estudo também mostrou que um nível intermediário de licopeno (20,06 mg de licopeno / kg de dieta) forneceu a melhor resposta à produção de IgG anti-BSA. Além disso, o licopeno afetou tanto a imunidade celular, estimulando a produção de leucócitos, quanto a imunidade humoral, pela resposta imune específica devido ao aumento da produção de IgG.
Conclusões
A suplementação de licopeno na dieta para porcos de acabamento afetou a resposta imune celular e humoral, e a maior produção de IgG anti-BSA foi alcançada com a suplementação de 20,06 mg de licopeno / kg de dieta.