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CLARETIANO FACULDADE – RIO CLARO PROJETO DE PESQUISA Iniciação Científica Influência da testosterona no processo de decomposição em ratos fêmeas castradas Inaê F. de Luccas M. Lima / 8064525 2º Semestre Biomedicina ORIENTADOR: Tamires Dos Santos 2019 2 SUMÁRIO 1. Resumo ............................................................................................................. 3 2. Introdução .......................................................................................................... 3 a. Problema da pesquisa ........................................................................... 4 b. Objetivo ................................................................................................. 4 c. Justificativa ........................................................................................... 4 d. Metodologia .......................................................................................... 5 3. Cronograma ....................................................................................................... 5 4. Referências Bibliográficas .................................................................................. 6 3 1. Resumo A toxicologia forense é uma ciência multidisciplinar, que identifica os efeitos prejudiciais de determinados agentes tóxicos, é capaz de solucionar crimes através de análises feitas no cadáver e até mesmo de substancias encontradas na cena do crime. Há milhares de agentes tóxicos que são capazes de alterar nosso metabolismo, através dessas informações o projeto em questão tem como principal objetivo identificar a influência que um esteroide sexual pode causar na fase de decomposição do cadáver, dificultando assim o trabalho do perito. Acredita-se que perfis hormonais podem interferir no processo de decomposição corporal, o que pode causar duvidas na determinação do tempo de morte e um atraso significativo na investigação. Sabemos que a decomposição entre ratos machos e mais acelerada em relação as fêmeas, mesmo estando expostos as mesmas condições ambientais e sepultados no mesmo lugar, o macho atinge esqueletização completa antes da fêmea. Com base nessas informações o desenvolvimento desse projeto tem como objetivo analisar a decomposição de ratos (Wistar) fêmeas, sob influência da testosterona em seu organismo. Será necessário utilizar trinta ratos fêmeas, onde apenas vinte serão submetidos a cirurgia de castração com 21 dias de idade e os outros dez faram a cirurgia sham. Os animais terão que ser divididos em grupos, Co- controle (cirurgia sham); Ca- castrados; Ct - castrados + testosterona, após completarem 80 dias de idade serão mortos em câmara de CO2 e sepultados no mesmo local sob as mesmas condições, para analise dos resultados a exumação deverá ser realizada após 120 dias do sepultamento. Palavras-chaves: Forense, testosterona, decomposição. 2. Introdução Sabemos que muitos fatores podem interferir na decomposição corporal, há documentos da literatura cientifica que comprovam as variações que podem ocorrer na decomposição por conta da temperatura, umidade, condições do solo e até mesmo por conta de microrganismos, esses fatores podem destruir ou promover maior preservação do cadáver. Contudo observa-se uma carência na parte de estudos relacionados a decomposição corporal por conta de características biológicas como idade, sexo ou perfis endócrinos. A investigação da morte nas ciências forenses nem sempre são relacionadas a endocrinologia, exceto em alguns casos isolado quando o uso abusivo de hormônios pode estar relacionado com morte acidental, suicídio ou até mesmo homicídio. É muito provável que o processo de preservação de cadáver (tafonomia) que mais se encaixa nessa situação é a formação de adipocera, que é uma variação de putrefação, habitualmente encontrada em corpos imersos em água, em solos muito úmidos e quentes, em crianças no sexo feminino ou indivíduos que sofrem de obesidade, por conta da grande porcentagem de gordura encontrada nesses indivíduos esse feito pode prejudicar a identificação correta do intervalo pós- morte. Foi desenvolvido um modelo experimental no Centro de Medicina Legal (CEMEL) da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto da Universidade de São Paulo (FMRP/USP), onde usaram ratos machos e fêmeas para descobrir se ambos fossem sepultados sob as mesmas condições de temperatura, umidade, entre outros, apresentariam o mesmo estágio de decomposição após determinado tempo. Conseguiram observar que o macho atingiu esqueletização completa antes das fêmeas, esses resultados são capazes de influenciar a 4 ciência forense, pois para determinar o intervalo pós-morte será necessária levar em consideração o gênero (sexo) do corpo. Sabendo que os esteroides sexuais são responsáveis pela diferenciação de características sexuais, é importante pesquisar qual esteroide pode estar envolvido na diferença de decomposição entre machos e fêmeas. Para comprovar a influencia de esteroides na decomposição corporal o esteroide sexual escolhido foi a testosterona (C19 H28 O2), o principal hormônio sexual masculino e um esteroide anabolizante, nos indivíduos de sexo masculino a testosterona tem um papel fundamental no desenvolvimento de tecidos reprodutores como, testículos e próstata. Promove também características secundarias em relação ao aumento de massa muscular, maturação dos ossos e crescimento do cabelo corporal, além disse é responsável pela prevenção da osteoporose, podendo ser usada também como medicamentos para tratar certos tipos de câncer de mama. A medida em que o homem envelhece a testosterona tende a diminuir gradativamente em alguns casos a testosterona sintética pode ser prescrita pelo médico para neutralizar essa deficiência. Há uma relação entre testosterona e criminalidade, onde estudos apontam que esse esteroide pode ser responsável por comportamentos e traços de personalidade reversos ligados a criminalidade como por exemplos indivíduos antissociais, pesquisas foram feitas sobre a relação entre comportamento agressivo e a testosterona cerca de metade dos homens estudados apontou um resultado positivo. Então com base nessas informações esse projeto tem com intuito investiga se ratos do grupo Ct submetidos a ingestão de testosterona iram apresentar maior decomposição corporal em relação ao grupo Co e Ca. a. Problema da pesquisa A diferença na decomposição entre homem e mulher já é algo comprovado, porém não há confirmações de que isso aconteça por influência dos esteroides masculinos. A testosterona é um esteroide sexual de exclusividade masculina, contudo sabemos que atualmente cresce o numero de transexuais no país, onde muitos tem a opção de realizar tratamentos utilizando hormônios masculinos para adequar seu corpo ao sexo psicológico. O Brasil lidera o ranking mundial de assassinatos de transexuais, o numero de mortos nos últimos oitos anos é algo assustador, foram ao menos 870 transexuais e travestis bruscamente assassinados. Levando em consideração essas informações, suponhamos que aconteça um homicídio contra um transexual, que optou por fazer um tratamento com esteroide masculino (testosterona), seria possível seu cadáver apresentar um avanço na decomposição por conta da ingestão continua de testosterona? b. Objetivo O principal objetivo é analisar os efeitos prejudicais que a testosterona pode causar na decomposição de um cadáver, avaliar se esse esteroide tem o poder de acelerar o processo de putrefação, podendo assim auxiliar a toxicologia forense a identificar o intervalo de morte do indivíduo com mais precisão. c. Justificativa Como sabemos a ciência forense é uma área interdisciplinar que é composta por um conjunto de conhecimentos científicos e técnicas que são usadas para solucionar crimes, com base nessas informaçõeso projeto em questão tem o intuito de promover um grande avanço na toxicologia forense, busco comprovar que um esteroide sexual, no caso a 5 testosterona, tem a capacidade de interferir na decomposição corporal. Já foi comprovado que pessoas do sexo masculino tendem a se decompor mais rápido em relação ao sexo feminino, contudo se a vítima for uma mulher por exemplo que faz uso continuo de testosterona vier a óbito é possível que sua decomposição seja acelerada por conta do acumulo desse esteroide em seu organismo. Esse estudo será capaz de auxiliar a pericia criminal a identificar exatamente qual seria o intervalor pós-morte, dado que seja identificado testosterona no organismo da vítima. d. Metodologia Serão necessários trinta ratos Wistar fêmeas já desmamados, com 20 dias de vida aproximadamente e pesando 50 a 70g, deveram ser alimentados com comida comercial para roedores e água, e ser mantidos sob temperatura de 24ºC. Os animais passaram pela cirurgia de castração um dia após sua chegada, terão de ser anestesiados (Ketamina 75mg/kg + Midazolam 5mg/kg), onde 20 vão ser castrados e 10 faram a cirurgia de sham, para servir de grupo controle. Após a cirurgia os animais deveram ser divididos em grupos: • Grupo Controle (Co): cirurgia sham e administração de 90µl de óleo de milho, a cada 20 dias, totalizando três doses. • Grupo Castrado (Ca): castração e administração de 90µl de óleo de milho, a cada 20 dias, totalizando três doses. • Grupo Castrado + Testosterona (Ct): castração e administração de 70µg de propionato de testosterona, diluído em 90µl de óleo de milho, a casa 20 dias, totalizando três doses. Após completarem 80 dias de vida, serão mortos em uma câmara saturada de CO2, depois da morte os animais serão envolvidos em uma camada de algodão e gaze, o que facilita a recuperação dos ossos na exumação, será necessário utilizar seis caixas de madeira com tampa, onde cada uma terá cinco repartições para que um animal não entre com contato com o outro, causando assim interferência nos resultados. Para que o cadáver não entre em contato direto com a madeira será necessário cobrir o fundo o caixa com papel alumio e papel filtro. As seis caixas de madeira deveram ser colocadas sobrepostas dentro de outra feita de cimento e com tampa, para que não haja interferência ambiental, a ultima caixa devera ser apoiada por tijolos para não ter contato direto com o chão evitando assim a umidade. Passado se 120 dias a sepultura devera ser aberta para análise dos resultados. 3. Cronograma O cronograma mostra uma estimativa de tempo que será necessária para realização do projeto. Mês 01 02 03 04 05 06 07 Chegada dos animais X Cirurgia Sham e castração X 6 Tratamento dos animais X X Sacrifício dos animais X Sepultamento X Exumação X Analise dos resultados X 4. Referências bibliográficas. 1. Andersen ML et al. Princípios éticos e práticos do uso de animais de experimentação. Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), São Paulo; 2004. 2. ANDRADE, A., PINTO, SC., and OLIVEIRA, RS., orgs. Animais de Laboratório: criação e experimentação [online]. Rio de Janeiro: Editora FIOCRUZ, 2002. 388 p. ISBN: 85- 7541-015-6. Available from SciELO Books < http://books.scielo.org/>. 3. BYDLOWSKI, S, P. Fisiologia da diferenciação sexual – puberdade, In: DOUGLAS, C, R. (Editor). Tratado de fisiologia aplicada à saúde. 5ª ed. São Paulo: Robe Editorial, 2002ª. Cap. 80, p. 1291-1300. 4. CHASIN, Alice Aparecida da Matta. Parâmetros de confiança analítica e irrefutabilidade do laudo pericial em toxicologia Forense. Revista Brasileira de Toxicologia, v. 14, n. 1, p. 40-46, 2001. 5. 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