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1 SINOPSE * Assunto: DNA. * Pré-requisito: Conhecimento dos conceitos básicos de Bioquímica. * Objetivo: Reconhecer a estrutura e função dos ácidos nucléicos na técnicas de Biologia Molecular. * Bibliografia: 1 - ALBERTS, B. et al. Biologia molecular da célula. 2 -ROBERTIS & de ROBERTIS, Jr. Bases da Biologia Celular e Molecular. 3 - LEWIN, B. Genes XI. Estrutura e função dos ácidos nucléicos Paulo Queiroz Dr. Biologia Animal Características do material genético 1 – Deve conter informação complexa. Armazenar grandes quantidades de informação. Informação deve sofrer variação (mutação). Deve ser estável. 2 – Replicação fiel Transmissão célula-mãe � célula-filha. Transmissão para a descendência. 3 – Codificar o fenótipo Gene � codificar RNA ou PTN � característica (fenótipo). * Primária = seqüência de linear de nucleotídeos unidos por ligações fosfodiéster; A ESTRUTURA DO DNA * Secundária = corresponde a sua estrutura tridimensional (helicoidal) A ESTRUTURA DO DNA A ESTRUTURA DO DNA * Terciária = corresponde aos graus de empacotamento do DNA nos cromossomos. 2 OS ÁCIDOS NUCLÉICOS Definição: Polímeros de nucleotídeos não ramificados unidos por ligações fosfodiéster. Função: DNA (ácido desoxirribonucléico) � Armazenamento e transmissão da informação genética. RNA (ácido ribonucléico) � Controle e expressão das características genéticas. COMPOSIÇÃO DE UM NUCLEOTÍDEO 1 – Pentoses (açúcares de 5 C) RIBOSE DESOXIRRIBOSE (RNA) (DNA) COMPOSIÇÃO DE UM NUCLEOTÍDEO 2 – Bases nitrogenadas COMPOSIÇÃO DE UM NUCLEOTÍDEO 3 – Grupo fosfato ESTRUTURA 3 Características básicas... * As bases nitrogenadas se ligam ao açúcar por uma ligação glicosídica. * Os nucleotídeos ligam-se por ligações fosfodiéster. * Bases se pareiam por ligações de hidrogênio. * A extremidade 5’ termina com fosfato (-PO3-2). * A extremidade 3’ termina com hidroxila (-OH). Características básicas... * A ligação fosfodiéster = ocorre entre o grupo hidroxila (3’-OH) de um nucleotídeo e o grupo fosfato (5’-PO4-3) do outro nucleotídeo. * Conformação não aleatória. Maior rotação entre: 1 - Oxigênio e fosfato (ligação fosfodiéster); 2 - Pentose e base (ligação glicosídica). * Duas cadeias polinucleotídicas; * Dupla fita em hélice; * As cadeias têm sentidos opostos (antiparalelas); * As cadeias estão unidas pelo pareamento de bases; * Complementaridade de bases: As bases de uma cadeia estabelecem ligações de hidrogênio com as bases da outra cadeia. MODELO DO DNA Complementaridade: * As bases são complementares... A pareia-se com T e G pareia-se com C. * Duas ligações de hidrogênio para A / T * Três ligações de hidrogênio entre C / G A molécula de DNA apresenta duas cavidades (maior e menor) = para o reconhecimento de proteínas � expressão gênica. Manutenção da molécula de DNA * Ligações fosfodiéster entre nucleotídeos; * Ligações de hidrogênio entre cadeias; * Efeitos hidrofóbicos entre as bases; * Empilhamento ou Stacking (forças de Van der Walls) entre as bases; * Interações de carga entre ose-fosfato (negativa) com íons Mg+2 (positivo) = neutraliza a repulsão entre as cadeias e estabiliza a dupla hélice. 4 Empilhamento ou Stacking DESNATURAÇÃO E RENATURAÇÃO Importante para a replicação, transcrição e recombinação. Desnaturação = pontes de hidrogênio entre as cadeias complementares são rompidas e as fitas se separam. Renaturação = efeito contrário ao da desnaturação. Obtida por temperatura, bases e agentes desnaturantes (geram cargas no interior da dupla fita). Temperatura de desnaturação Tm * Temperatura em que 50% do DNA está desnaturado. * Efeito hipercrômico = absorção máxima de luz ultravioleta pelo DNA desnaturado. * Importância: ↑ Conteúdo GC no DNA = maior Tm; ↑ Conteúdo AT no DNA = menor Tm. 0 0.5 1.0 Tm Formas de DNA e torção molecular * DNA linear = eucariotos = DNA com extremidades livres. * DNA circular = mitocôndrias, cloroplastos, vírus, bacteriófagos e bactérias = DNA sem extremidades livres. 5 TIPOS DE MOLÉCULAS DE DNA * Forma B = Mais importante em termos biológicos. * Forma A = Só ocorre em condições experimentais. * Forma Z = Pode ocorrer com a forma B. Ocorre em soluções de alta força iônica (NaCl 2 M) ou em seqüências ricas em Pu e Py alternadas. Regulação da expressão gênica. TIPOS DE MOLÉCULAS DE DNA Característica DNA A DNA B DNA Z Hidratação 75 % 92 % Pu e Py alternadas Sentido de rotação Direita Direita Esquerda pb/volta 11 10 12 Rotação pb 32,7° 36° - 30° Distância entre bases 0,26 nm 0,34 nm 0,37 nm Diâmetro 2,3 nm 1,9 nm 1,8 nm Forma Curto e largo Longo e estreito Alongado e estreito Quantidade de DNA por espécie Segundo Chargaff: A = T e C = G, ou seja, A + T + C + G = 1 ou, A + G = C + T Entretanto... (A + T)/(C + G) variam de 1. A + T ≠ C + G O DNA de espécies diferentes é distinto por: 1 – Números de pares AT e CG; 2 – Seqüência de ocorrência; 3 – Números de pares de bases (comprimento DNA) 6 O valor C e o seu paradoxo (Paradoxo C) Definição: A quantidade total de DNA em um genoma haplóide é chamado de valor C. A falta de uma relação consistente entre o valor C e a complexidade de um organismo é chamado paradoxo do valor C. Por exemplo, alguns protistas possuem genomas muito maiores que os humanos. Alterações quantitativas do conteúdo DNA 1 – DNA gametas = ½ células diplóides. Ovócito (n) � Célula germinativa (2n). 2 – Zigotos = dobro DNA dos gametas. 3 – DNA dobra durante a intérfase. 4 – DNA núcleos poliplóides � proporcional ao n° conjuntos de cromossomos presentes. núcleo 4n � 2 (2n). G1 S G2 Metáfase Anáfase PERITO CRIMINAL 2008 PIAUÍ - O Ácido desoxirribonucléico é um longo polímero, formado por unidades repetidas, chamadas nucleotídeos. A cadeia de DNA tem 2,2 a 2,4 nanômetros de largura, e um nucleotídeo possui aproximadamente 0,33 nanômetros de comprimento. Embora os monômeros (nucleotídeos) que constituem o DNA sejam muito pequenos, polímeros de ADN podem ser moléculas enormes, com milhões de nucleotídeos. Por exemplo, o maior cromossomo humano (cromossomo 1), possui 220 milhões de pares de bases de comprimento. Sobre o ADN e sua estrutura são feitas as seguintes afirmativas: I - A dupla hélice do ADN é estabilizada por pontes de hidrogênio entre as bases presas às duas fitas. As quatro bases encontradas no ADN são a adenina (A), citosina (C), guanina (G) e timina (T). Estas quatro bases ligam- se entre si, formando pares. A adenina e a guanina são chamadas de pirimidinas e se unem às bases chamadas de purinas, a citosina e a timina. II - Os dois tipos de pares de base formam diferentes números de pontes de hidrogênio: AT forma duas pontes de hidrogênio, enquanto que GC forma três pontes de hidrogênio. III - Os nucleotídeos estão presentes em ambas as fitas da dupla hélice, unidos com nucleotídeos da mesma fita por ligações fosfodiéster e à fita complementar através de pontes de hidrogênio, formadas pelas suas bases. Em geral, uma base ligada a um açúcar é chamada nucleosídeo e umabase ligada a um açúcar e um ou mais fosfatos, é chamada nucleotídeo. Portanto, o ADN pode ser referido como sendo um polinucleotídeo. IV - As fitas de DNA podem aparecer sob a forma de cromossomos,quando a célula está em metáfase, e como cromatina, quando a célula esta em interfase. É (são) verdadeira(s) a(s) afirmativa(s): a) I e IV b) I e II c) II, III e IV d) IV e) II e III
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