Anticorpos Monoclonais 2018

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Anticorpos Monoclonais 
Profa. Renata Aparecida de Camargo Bittencourt 
Disciplina: Imunologia Clínica 
UNIP 
Anticorpos Monoclonais 
• Em 1984, Kohler and Milstein receberam o 
Prêmio Nobel de Medicina pelo trabalho 
pioneiro na produção de Anticorpos 
Monoclonais (MAb, monoclonal 
antibody). 
• Uma das grandes vantagens foi a 
capacidade de desenvolver uma linhagem 
celular imortalizada capaz de produzir 
uma fonte contínua do mesmo anticorpo 
para um antígeno em específico. 
Anticorpos 
Policlonais Monoclonais 
Anticorpos obtidos de um 
animal após exposição ao Ag 
reconhecem 
múltiplos sítios 
antigênicos 
Produtos obtidos in vitro por meio de 
engenharia celular, através da 
imortalização de Ly B ativados 
reconhecem 
UM único sítio antigênico 
Anticorpos Monoclonais 
Murinos 
Quiméricos 
Humanizados 
 
Imunização 
Seleção enzimática 
Caracterização bioquímica 
Fusão 
Screening 
Expansão dos hibridomas 
Clonagem 
Congelamento 
Anticorpos Monoclonais: 
diversas etapas 
1975 Köhler and Milstein 
1ª geração: fusão pelo vírus 
Sendai 
2ª geração PEG 
Hibridoma 
• Camundongos isogênicos 
Balb/C 
• Induziram a formação do 
tumor por injeção peritoneal de 
óleo mineral; 
• Obtiveram a linhagem tumoral 
e causaram a hipermetilação do 
gene; 
• Todos os AcM murinos são 
HGPRT (hipoxantina guanina 
fosforribosil-transferase) 
negativos – seleção dos 
hibridomas. 
 
Anticorpos Monoclonais na Veterinária 
Imunização: camundongos BALB/c, linhagem 
isogênica. O ag escolhido pode ser orgânico 
(proteínas, células, etc.) ou inorgânico. 
linfócitos 
FUSÃO QUÍMICA 
Fusão Celular 
Hibridomas em placas de 
cultura celular 
NS1 
Anticorpos Monoclonais na Veterinária 
Seleção Enzimática: células mielomatosas mutantes têm 
deficiência metabólica (HGPRT-), o que impede seu 
crescimento no meio com hipoxantina e timidina (HAT). 
Screening: teste de eleição depende da natureza do ag 
utilizado. Ex: hemaglutinação, citometria de fluxo, western 
blooting, etc. 
Expansão dos hibridomas: as células crescem em 
placas e frascos de culturas com capacidade crescente; ou 
em equipamentos próprios como biorreatores. 
Congelamento: feito em nitrogênio líquido, 
conserva células em perfeitas condições durante 
vários anos. 
http://www.biotecnologia.com.br/bio22/6image006.jpg
Anticorpos Monoclonais 
Clonagem: uma única célula do hibridoma é a origem de 
toda a população celular do clone, que secretará um tipo de 
ac (AcM). Diluição limitante ou micromanipulação. 
Determinação de classe e 
subclasse da Ig: feita por 
citometria de fluxo, onde o aparelho 
capta a ligação de ac marcados com 
fluoresceína (FITC) com as células do 
clone. 
Caracterização bioquímica: 
composta de várias técnicas como 
imunodifusão dupla em gel de ágar, 
eletroforese em gel de poliacrilamida, 
immunoblotting, etc. 
Eletroforese em gel 
Citometria de Fluxo 
Micromanipulador 
http://www.clonaid.com/common_ressources/illustrations/services/lab1.jpg
Anticorpos Monoclonais 
Anticorpos Monoclonais 
Aplicações em diversas áreas 
Biologia 
celular 
Bioquímica 
Fisiologia 
Patologia 
Hematologia 
Genética 
molecular 
Oncologia 
Microbiologia 
Terapêutica 
Laboratório 
clínico 
Produção de Reagentes anti-A, 
anti-B e anti-AB 
Uso dos Anticorpos 
Monoclonais 
 
• Purificação de proteínas 
• Identificação e isolamento de células e de sub-
população de células usando fluorocromos e 
“cell sorting” – pelo método de citometria de 
fluxo. 
• Detecção de tumores e imagem 
• Lise tumoral – Tratamento de Tumores 
• Reagentes diagnósticos. 
• Desintoxicação 
 
Imunofluorescência 
Anticorpos marcados com FITC e leitura por IF 
Método Direto ou Indireto com a adição de um anticorpo fluoresceinado 
UV light 
Imunofluorescência 
www.cdc.gov www.phenopath.com/clinical/ skin.html 
Pênfigo bolhoso com linhas de depósito IgG 
 na junção dermo-epidérmica 
IFA de Ehrlichia chaffeensis 
400X 
http://www.phenopath.com/clinical/skin.html
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Monoclonal antibodies approaching a cancerous cell. 
Appeared in the October 2001 issue of Scientific American.