Resumo 2 Bioquímica Clínica

Prévia do material em texto

Resumo Bioquímica Clínica 
Aula 2
Fotometria, Espectrofotometria, Turbidimetria e Nefelometria 
Conceitos Básicos 
• Luz: é uma radiação eletromagnética que se propaga na forma de onda 
• Cada cor de luz: comprimento variável 
Fotometria 
• É um método óptico 
• Estuda a medição de Luz: – Emissão – Transmissão – Absorção 
• A técnica utiliza a propriedade das soluções de absorver ou transmitir a luz para quantificar analitos. 
• Bioquímica clínica: absorção de luz por soluções (urina, plasma ou soro) 
• Instrumentos: fotômetros e espectrofotômetros 
Trasmitância e Absorbância 
• Na prática, a quantidade de luz absorvida ou transmitida é proporcional à concentração da substância em solução .
Trasmitância 
• T = Transmitância • I’ = itensidade final • I = itensidade inicial 
T = I’/I 
 T (%) = I’/I x 100 
 Transmitância é inversamente proporcional à concentração do soluto. 
Absorbância 
• A capacidade de absorver a luz.
 • É inversamente proporcional à transmitância. 
• Lei de Lambert-Beer: A = ε . b . C – A = absorbância (adimensional) – ε = coeficiente absortividade molar (mol-1 . L . cm -1) característico de cada substância em cada λ – b = caminho ótico (cm) – C = concentração (mol. L -1) 
Absorbância é diretamente proporcional à concentração do soluto 
Fotometria 
• Baseia-se na absorção da radiação: ultravioleta - infravermelho; 
 • Quantidade de luz absorvida: transmitância ou absorbância. 
 
• Fotômetro de filtro (fotocolorímetro) - permite o uso de faixas de luz monocromáticas (visível) 
 • Espectrofotômetro: fotômetro com grade de difração – permite medição em uma faixa de comprimentos de onda (UV-VIS-IR) 
Componentes Básicos da Espectrofotometria 
(a) fonte de luz, (b) colimador, (c) monocromador, (d) fenda seletora (e) cubeta (solução), (f) detector, (g) leitor. 
-Lâmpada de Deutério – região do UV 
 -Lâmpada de Tungstênio – região do visível e infravermelho
Aplicações 
• Realizar dosagens bioquímicas em soluções: – AST/ ALT – Uréia – Glicose – Triglicérides – Colesterol – Hemoglobina
Turbidimetria e Neflometria 
• A Turbidimetria e a Neflometria são métodos analíticos inversos mas que são utilizados juntos. 
• Dependendo da concentração e da turbidez da amostra, parte da luz que é incidida é dispersada. 
• São usadas para suspensões 
Turbidez e concentração 
• Redução da transparência de uma amostra devido a presença de partículas em suspensão que interferem a passagem de luz pelo fluido
 • Quanto mais turvo, mais concentrado. 
Turbidimetria 
• Mede a luz não dispersada (a luz que passou) determinando a turbidez da amostra. 
 Neflometria 
• É um método bem mais sensível pois mede a luz dispersada (inverso da turbidimetria) em ângulos entre 45 a 90 graus. 
• A intensidade de luz emitida e captada varia de acordo com o número, tamanho e forma das partículas da amostra. 
• É utilizada uma solução padrão para zerar o aparelho e gerar curva de calibração. 
Turbidimetria e Neflometria 
Aplicações 
• Determinação de proteínas, imunoglobulinas.