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Introdução à Biotecnologia Profª Ma. Raphaella Ingrid Santana Oliveira Tópicos da aula: • Conceitos, Histórico e Bases da Biotecnologia; • Tipos de Biotecnologia; • Modelos em Biotecnologia. Biotecnologia • A biotecnologia consiste no uso de sistemas celulares para o desenvolvimento de processos e produtos de interesse econômico ou social. Qual a função da Biotecnologia? • A Biotecnologia concentra-se em aplicações práticas da ciência e inclui as tecnologias de base biológica que são usadas para produzir vários produtos. É definida como qualquer técnica que utilize sistemas biológicos para produzir ou modificar produtos, desenvolver microrganismos para usos específicos ou melhorar plantas e animais, impactando diferentes campos da ciência. Como aplicações de vinificação e biologia celular envolvendo cultura de tecidos, transgenia e clonagem. Biotecnologia • Envolve tecnologias que visam a solução de problemas a fim de trazer melhorias para a vida humana. Na agricultura, agora é possível projetar geneticamente certas espécies de plantas e, na indústria médica, foram desenvolvidas tecnologias para identificar indivíduos vulneráveis a certas doenças. EXEMPLO: Biotecnologia • Características de inovação radical, impacto atual e potencial frente a problemas globais (doenças, nutrição e poluição ambiental) com promessa de desenvolvimento industrial sustentável (utilização de recursos renováveis, “tecnologia limpa”, redução do aquecimento global). Por ser uma área que interliga ciência e tecnologia, a Biotecnologia, envolve biologia, química, microbiologia, genética, engenharia, tecnologias das fermentações, purificações e o controle de processos industriais. Ela gera serviços e produtos como: •Biogás. •Biorremediação. •Biofertilizantes. •Mudas de plantas livres de doenças. •Etanol. •Combustíveis de segunda e terceira geração. As três gerações da Biotecnologia • Embora a Biotecnologia possa parecer uma tecnologia recente, sua origem pode ter ocorrido há mais de seis mil anos, a partir dos relatos de que os microrganismos eram usados nos processos fermentativos para produção da cerveja e do pão. • A Biotecnologia evolutivamente foi separada em três gerações. Primeira Geração Segunda Geração Terceira Geração As três gerações da Biotecnologia Primeira Geração • A Primeira Geração, conhecida como Idade Nova, começou com o desenvolvimento de tecnologias datadas entre 6000-2000 a.C. por Sumérios, Babilônios, Egípcios e Gregos, que: • Utilizavam organismos inteiros na fermentação de grãos de cereais para obtenção de pães e bebidas alcoólicas. • Domesticavam plantas e animais. • Realizavam o cruzamento de espécies animais e plantas. • Faziam uso de fitoterápicos. • Esta geração teve seu início marcado pelo domínio das técnicas de domesticação e cruzamento de espécies animais e plantas, pelas antigas civilizações. A capacidade de domesticar e selecionar seletivamente plantas e animais foi formativa no desenvolvimento humano. Contudo os agentes causadores das fermentações ainda eram desconhecidos. As três gerações da Biotecnologia Segunda Geração • A segunda geração teve mais compreensão microbiológica e levou ao desenvolvimento de técnicas de cultivo e extração em meados do século XX, com a produção de antibióticos a partir de fungos. • Nessa mesma época, Pasteur descobriu que as fermentações eram causadas por microrganismos anaeróbios e que a fermentação se iniciava com a transformação da glicose a partir da glicólise. • Na indústria, a fermentação é considerada como qualquer processo para a produção de vários compostos químicos ou farmacêuticos por meio do cultivo em massa de microrganismos. Louis Pasteur. Fermentação É um processo químico com a ausência de O2 onde os microrganismos realizam a transformação de matéria orgânica em outros produtos e energia. É a forma em que os microrganismos encontram para produzir energia para desempenhar suas funções. É uma via de produção de energia que utiliza matéria orgânica, como glicose. Antes de fermentação ocorrer, necessário ocorrer a glicólise. Fermentação alcoólica, láctea, butírica e acética.EXEMPLOS: Fermentação • A fermentação é usada em muitas indústrias para a produção de: • Vários alimentos. • Bebidas alcoólicas. • Levedura de padaria. • Biocombustíveis. • Ácidos orgânicos. • Enzimas. • Vitaminas. • Antibióticos. • Vacinas. • Anticorpos monoclonais. • Esteroides. • Hormônios. • Produtos químicos. Pasteurização • Pasteurização é o processo utilizado em alimentos para destruir microrganismos patogênicos ali existentes. Foi criado em homenagem ao químico francês que o criou, Louis Pasteur. • A pasteurização é o processo de aquecimento de um líquido abaixo do ponto de ebulição para destruir microrganismos. Foi desenvolvida por Louis Pasteur em 1864 para auxiliar na conservação do vinho. Embora o próprio Pasteur não tenha aplicado a pasteurização ao leite, ele realizou estudos posteriores demonstrando que a acidificação do leite era devido ao crescimento de microrganismos. O trabalho de Pasteur explicou o papel dos microrganismos como causa de mudanças indesejáveis nos alimentos. • A criação de técnicas para a conservação dos alimentos desenvolvidas por Louis Pasteur que permitiu o crescimento das indústrias alimentícias As três gerações da Biotecnologia Terceira Geração • A terceira geração está relacionada ao isolamento, manipulação de genes, aplicação de enzimas de restrição e anticorpos monoclonais. • Werner Arber e colaboradores descobriram enzimas de restrição enquanto estudavam um fenômeno denominado restrição ou modificação, como era conhecido na época, de bacteriófagos controlada pelo hospedeiro. • Essas enzimas têm a capacidade de reconhecer sequências de bases específicas no DNA e, em seguida, cortar cada a dupla hélice de maneira muito precisa, dividindo o DNA em fragmentos nos locais de reconhecimento específicos ou próximos a eles, dentro da molécula, conhecidos como locais de restrição. Por isso, são chamadas de tesouras moleculares. • Arber descobriu que a bactéria Escherichia coli possuía uma tesoura capaz de cortar regiões específicas do DNA de um vírus descrevendo a enzima como EcoRI (Escherichia coli Restriction I). Curiosidades: A descoberta das endonucleases de restrição e das DNA ligases serviram de base para a produção de: •Insulina em bactérias. •Drogas monoclonais de hibridomas de células de mamíferos. •Técnicas de cultura de célula ou de tecidos. •Purificação em larga escala de proteínas e macromoléculas. • A descoberta da estrutura da molécula de DNA por Watson e Crick em 1953, que é considerada um marco importante para o desenvolvimento da Engenharia Genética, pois a partir de então, foi possível a manipulação da molécula de DNA. • Este evento permitiu a criação do DNA recombinante, e com ele surgiram os organismos geneticamente modificados, a obtenção de proteínas heterólogas para o tratamento de doenças como o diabetes, o desenvolvimento da Genética Forense, da reprodução assistida e do diagnóstico genético. O que é DNA recombinante? Novas tecnologias e produtos são desenvolvidos todos os anos nas áreas de: •Medicina - desenvolvimento de novos medicamentos e terapias. •Agricultura- desenvolvimento de plantas geneticamente modificadas, biocombustíveis, tratamento biológico. •Biotecnologia Industrial - produção de produtos químicos, papel, têxteis e alimentos. O marco no desenvolvimento da Biotecnologia moderna, contudo, foi a inserção do DNA recombinante ou rDNA nas bactérias, de modo que o DNA estranho se replicasse naturalmente. Os cientistas Boyer e Cohen, realizaram alguns experimentos expressando em bactérias genes de outras espécies. Isso incluiu genes da rã Xenopus laevis que, em 1974, foram inseridos com sucesso na bactéria Escherichia coli, criando o primeiro Organismo Geneticamente Modificado (OGM), que expressava um gene de um organismo de um domínio diferente – bactéria transgênica. A partir disso, váriosavanços foram obtidos, como, por exemplo, a produção de insulina humana e o mosquito transgênico, que foi liberado no Brasil para combater a dengue. O que é DNA recombinante? O que é DNA recombinante? • A técnica do DNA recombinante possibilita a remoção de genes de um organismo colocando em outro organismo, criando, assim, um híbrido. A tecnologia é mediada por duas enzimas: a endonuclease de restrição e DNA ligase. • A enzima de restrição reconhece uma sequência específica de DNA e corta dentro ou próximo a essa sequência, gerando fragmentos de DNA que são unidos novamente pela ação enzima da DNA ligase. O que é DNA recombinante? • Com essa técnica, foi possível o desenvolvimento em diversas áreas como, por exemplo, na medicina, com as vacinas gênicas, na indústria alimentícia, com a produção de alimentos transgênicos, e, na agricultura, com a obtenção de plantas resistentes a pragas. • Possibilidade de obtenção de novas características, bioprodutos, desenvolvimento de novos protocolos para o tratamento de doenças, bioprocessos para a indústria e o meio ambiente. • A Biotecnologia Moderna envolve a fabricação de produtos úteis a partir de organismos inteiros ou partes de organismos, como moléculas, células, tecidos e órgãos e incluem organismos geneticamente modificados, terapias celulares e nanotecnologia. • Quando a Biotecnologia Moderna surgiu, no final da década de 1970, foi aplicada pela primeira vez no setor da saúde, com o aparecimento de DNA recombinante. Uma década depois, as mesmas abordagens moleculares chegaram às indústrias agrícola e de alimentos. Biotecnologia Moderna As Biotecnologias, então, começaram a enriquecer as capacidades dos processos microbianos industriais, trazendo novos genes para catalisadores vivos e modificando seus genomas para atender às necessidades de produção pré- especificadas. EXEMPLO: Agora, algumas bactérias e leveduras conhecidas pela indústria podem ser reprogramadas e reaproveitadas geneticamente. Para produzir lipídios que servem como precursores de biocombustíveis. Até produtos químicos não naturais, como gasolina e ácido tereftálico, já podem ser produzidos por engenharia metabólica. A chegada da Biologia de Sistemas no final dos anos 1990 e o surgimento da Biologia Sintética no início dos anos 2000, no entanto, mudaram completamente o jogo de projetar microrganismos e sistemas vivos ainda mais elevados, como agentes de transformações em escala industrial de matérias-primas de diversas origens em produtos valiosos. Microrganismos capazes de produzir uma variedade de produtos químicos de importância industrial, incluindo alguns ácidos dicarboxílicos, como o ácido succínico e o ácido adípico, diois, 1,3-propanodiol, 1,4-butanodiol e as diaminas putrescina e cadaverina, entre muitos outros desenvolvidos. • Além disso, a Biotecnologia Contemporânea produziu biomateriais, incluindo polissacarídeos (celulose microbiana), proteínas (seda de aranha) e até polímeros sintéticos por fermentação de microrganismos manipulados. • Algumas cepas foram projetadas com sucesso para produzir poli-hidroxialcanoatos, uma família de diversos biopolímeros, para aplicações em embalagens ambientalmente amigáveis, medicamentos e materiais inteligentes. Os tipos: As cores da Biotecnologia • Você sabia que as cores podem distinguir as diferentes áreas de aplicação da Biotecnologia? Biotecnologia Verde • A Biotecnologia Verde dedica-se às aplicações agrícolas e alimentares, como melhoramento de vegetais, sementes e plantas geneticamente modificadas, colheitas mais resistentes às pragas e substâncias químicas, além de alimentos transgênicos. • A Biotecnologia Verde é a área da agricultura que trata do melhoramento genético de plantas, incluindo a produção de plantas e sementes transgênicas, ou seja, Organismos Geneticamente Modificados, resistentes a doenças, herbicidas e inseticidas, aumentando a produtividade. Biotecnologia Vermelha • Na Biotecnologia Vermelha são abordadas as aplicações relativas à saúde. Os maiores usos são a produção de medicamentos, testes genéticos e terapia genética. Os tipos: As cores da Biotecnologia Biotecnologia Branca • Já a Biotecnologia Branca diz respeito às aplicações industriais e ambientais. Os biocatalisadores (enzimas e microrganismos) são as principais ferramentas dessa Biotecnologia, considerados como um dos fatores tecnológicos fundamentais para a crescente Bioeconomia. • Os processos metabólicos dos organismos usam principalmente os contaminantes como fontes de energia, resultando em subprodutos não tóxicos ou menos tóxicos - biorremediação. • A engenharia genética integrada à biorremediação auxilia na manipulação do genoma bacteriano, podendo aumentar a desintoxicação de metais tóxicos e a restauração de locais contaminados. • A Biotecnologia Industrial ou Biotecnologia Branca é a área da Biotecnologia aplicada à prevenção da poluição, conservação de recursos naturais e processos de biorremediação, utilizando sistemas biológicos para a remediação e recuperação de áreas degradadas. Manipulação do genoma bacteriano: Essa técnica pode ser empregada para atacar contaminantes específicos no solo e águas subterrâneas. Os tipos: As cores da Biotecnologia Biotecnologia Azul • As aplicações com origem em organismos aquáticos são abordadas pela Biotecnologia Azul, considerando as necessidades de água do mar, produção e degradação de polímeros marinhos e conteúdo de plasmídeos e os diversos fatores ecológicos que envolvem o ambiente marinho. • Microrganismos estão sendo utilizados para o desenvolvimento de agentes bioativos úteis. Nessa classe, já foram encontrados vários novos antibióticos, antimaláricos, polissacarídeos antitumorais, enzimas degradadoras de glucana e antibióticos aminoglicosídeos. Biotecnologia Preta • A Biotecnologia preta trata de questões relacionadas ao bioterrorismo, guerra biológica e biocrimes, aspectos negativos da ciência e das ferramentas biológicas. Nova Era da Biotecnologia • Estamos em uma Nova Era da Biotecnologia, em que é possível aproveitar os organismos biológicos para criar materiais de consumo. • Empresas estudaram como consumimos carne e ovos, entre outros produtos, e fabricaram: Nova Era da Biotecnologia • Além disso, empresas de seda de aranha visualizam materiais tão macios quanto a seda, mas mais duráveis. • Na próxima década, testemunharemos todas as implicações da Biotecnologia do Consumidor. Uma série de novas empresas aproveitará o poder da natureza para criar materiais de maneira ambientalmente sustentável e sem prejudicar os animais. • Será uma transição da imitação para a pura inovação: materiais e produtos que não são apenas produzidos de uma nova maneira, mas exibem qualidades que ainda não existem na natureza. • É a ciência do uso de organismos vivos para construir e fabricar produtos do cotidiano, reduzindo as práticas atuais de produção que utilizam de maneira desenfreada os recursos finitos do nosso planeta. MICROBIOLOGIA E BIOTECNOLOGIA • Embora os microrganismos sejam causadores de doenças humanas, animais e plantas, elas tem grande importância biotecnológica. MICROBIOLOGIA E BIOTECNOLOGIA Revisando o histórico: • Muito antes que o homem entendesse a biologia, ele já lidava com a biotecnologia na produção de vinhos e pães. • Fazendo referência ao preparo de bebidas fermentadas a partir de cereais na Babilônia e no Egito (8.000 a 6.000 anos a.C), à produção de pão, utilizando fermentos, no Egito (4.000 a.C) e à produção de vinhos na Grécia (2.000 a.C). MICROBIOLOGIA E BIOTECNOLOGIA • Os antigos egípcios, no preparo do pão, mantinham a massa (simples mistura de farinha e água), aquecida até a formação de bolhas, indicativo, hoje sabemos, da liberação de CO2 em consequência da fermentação. Logicamente, os povos dessa época não faziam ideia que leveduras e bactérias fossem utilizadas nesses processos de fermentação. MICROBIOLOGIA E BIOTECNOLOGIA Hoje, a exploração da diversidade genética e metabólicados microrganismos são utilizados na: • Próbióticos; • Biotransformação; • Álcoois (etanol); • Ácidos orgânicos (cítrico e fumárico); • Produção de enzimas de interesse industrial e vacinas; • Indústria farmacêutica - Antibióticos (estreptomicina, penicilina), antifúngicos, antineoplásicos; • Prognóstico e prevenção de doenças emergentes em seres humanos, animais e plantas; • Processo de biodegradação e tratamento biológico de efluentes (esgotos domésticos, lixo, despoluição de água); • Produção e processamento de alimentos como os produtos fermentados e bebidas alcoólicas (vinho, cerveja). Eles também são de grande importância agrícola e ecológica: • Mantêm o equilíbrio do ambiente; • Fertilização de solos • Decompõe restos vegetais; • Degrada substâncias tóxicas; • Auxilia plantas a crescerem e se protegerem contra inimigos, como outros microrganismos patogênicos (controle biológico de pragas e doenças); MICROBIOLOGIA E BIOTECNOLOGIA EXEMPLOS DO SEU USO NA BIOTECNOLOGIA: ➢ A penicilina sintetizada a partir de metabólitos do fungo Penicillium notatum, com potencial de combate a doenças infecciosas por bactérias; ➢ Esteróides e hormônios para crescimento vegetal são oriundos também de metabólitos, do Penicillium chrysogenum; ➢ Administração de ciclosporina em pessoas submetidas a transplantes, o que revolucionou a clínica, substância isolada a partir de fungos de solo (Tolypocladium inflatum e Cylindrocarpon lucidum) na década de 70; ➢ E a cefalosporina, isolada de culturas de Cephalosporium acremonium em 1948 por Brotzu. MICROBIOLOGIA E BIOTECNOLOGIA • Mais recentemente, o resveratrol, uma fitoalexina produzida pela videira em resposta de defesa ao fungo Botrytis cinerea, tem sido vastamente estudada pelos seus efeitos benéficos contra doenças cardiovasculares e o tratamento de algumas neoplasias. • Outros exemplos de substâncias produzidas a partir de metabólitos de fungos com atividades farmacológicas: mevinolina um agente redutor de colesterol; ciclosporinas; ergometrina; asperlicina, um antagonista de doenças gastrointestinais e do sistema nervoso central; papulacandinas um agente antifúngico. • Vacina para uso humano “Recombivax” contra hepatite B, e outras proteínas terapêuticas heterólogas produzidas por Saccharomyces cerevisiae, como a insulina, além de ser utilizado tradicionalmente na preparação de alimentos e de bebidas, assim como na produção de etanol, vitaminas e outros metabólitos. MICROBIOLOGIA E BIOTECNOLOGIA • Leveduras dos gêneros Saccharomyces, Kluyveromyces e Candida são capazes de fermentar diferentes açúcares a etanol. • É de particular importância para o Brasil à produção de álcool combustível por fermentação da sacarose do caldo da cana-de-açúcar por S. cerevisiae, tendo em vista ser o país, juntamente com os Estados Unidos, os maiores produtores mundiais de etanol combustível. 36 MICROBIOLOGIA E BIOTECNOLOGIA • Os cogumelos já eram utilizados desde os tempos remotos com finalidades medicinais para combater hemorragias, cólicas, feridas, asma e outros problemas. Algumas tribos indígenas brasileiras usavam Pycnoporus sanguineus (orelha-de-pau, cor vermelho intenso) para cicatrização de feridas. • Pesquisas recentes indicam atributos medicinais de diversas espécies de cogumelos, como efeitos antivirais, antibacteriano, antiparasitários, antitumorais, anti-hipertensivos, antiateroscleróticos, hepatoprotetores, antidiabéticos, antiinflamatórios e moduladores do sistema imune. 37 MICROBIOLOGIA E BIOTECNOLOGIA • O fungo Aspergillus niger faz parte do nosso dia-a- dia de forma agradável, é usado como um dos ingredientes principais de muitos refrigerantes, o ácido cítrico. Como é muito caro isolar ácido cítrico de frutas cítricas, quase todo o ácido cítrico usado em refrigerantes é produzido em larga escala através da fermentação de culturas deste fungo. • Pela capacidade de manipular seres vivos ou parte deles, a biotecnologia torna possível a obtenção de produtos e processos, como vacinas. A primeira vacina foi criada em 1796 por Edward Jenner, e combatia a varíola, doença já erradicada no mundo. • A primeira vacina surgiu a partir dos estudos realizados pelo médico inglês Edward Jenner. Ele observou pessoas que se contaminaram, ao ordenharem vacas, por uma doença de gado e chegou à conclusão de que essas pessoas tornavam- se imunes à varíola. A doença, chamada de cowpox (varíola da vaca), assemelhava-se à varíola humana pela formação de pústulas (lesões com pus). • Diante dessa observação, em 1796, Jenner inoculou o pus presente em uma lesão de uma ordenhadora chamada Sarah Nelmes, que possuía a doença (cowpox), em um garoto de oito anos de nome James Phipps. Phipps adquiriu a infecção de forma leve e, após dez dias, estava curado. Posteriormente, Jenner inoculou em Phipps pus de uma pessoa com varíola, e o garoto nada sofreu. Surgia aí a primeira vacina. MICROBIOLOGIA E BIOTECNOLOGIA FERMENTAÇÃO!!! MICROBIOLOGIA E BIOTECNOLOGIA Canhos & Manfio, 2001 MICROBIOLOGIA E BIOTECNOLOGIA Canhos & Manfio, 2001 MICROBIOLOGIA E BIOTECNOLOGIA MICROBIOLOGIA E BIOTECNOLOGIA • Canhos & Manfio, 2001 MICROBIOLOGIA E BIOTECNOLOGIA • Entretanto, novos avanços nessa área demandam tempo, em pesquisas e planejamento. Assim, o desenvolvimento da biotecnologia exige: • Uma forte base acadêmica e científica e um setor produtivo capaz de transformar esta produção em bens e serviços contribuindo no ganho ou potencialização de características desejáveis para sua utilização. • IMPORTÂNCIA: A vasta diversidade microbiológica apresenta grande potencial para estudos de aplicações biotecnológicas. 45 REFERÊNCIAS • CANHOS, V. P.; MANFIO, G. P. Recursos Microbiológicos para Biotecnologia. Campinas, 2001. • CANHOS, V. P.; MANFIO, G. P. Recursos Microbiológicos para Biotecnologia. Campinas, 2010. • SILVA, C. J. A.; MALTA, D. J. N. A importância dos fungos na biotecnologia. Ciências biológicas e da saúde. Recife, v. 2, n. 3, p. 49-66, Jul 2016. • BRUNO, A. N. et al. Biotecnologia I: princípios e métodos. Porto Alegre: Artmed, 2014. • LIMA, N.; MOTA, M (Coord.). Biotecnologia: fundamentos e aplicações. Lisboa: Lidel, 2003. • LIMA, U. A.; AQUARONE, E.; BORZANI; W. SCHMIDELL, W. Biotecnologia Industrial: Processos Fermentativos e Enzimáticos. v. 3. São Paulo: Editora Edgard Blücher Ltda, 2001.
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