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Complexo de Golgi - Estudo Dirigido - estudar pelo Junqueira & Carneiro Questão 1 - Descreva a ultraestrutura do complexo de Golgi e sua localização intracelular O aparelho de Golgi em geral está localizado próximo ao núcleo celular e, em células animais, costuma estar nas proximidades do centrossomo – uma pequena estrutura do citoesqueleto localizada próximo ao centro celular. O aparelho de Golgi consiste em um conjunto de sacos achatados delimitados por membrana, denominados cisternas, que estão amontoados como pilhas de pães pita. Cada pilha contém de 3 a 20 cisternas. O número de pilhas de Golgi por célula varia bastante dependendo do tipo celular: algumas células contêm uma única pilha grande, e outras contêm centenas de pilhas muito pequenas. Cada pilha de Golgi possui duas faces distintas: uma face de entrada, ou cis, e uma face de saída, ou trans. A face cis é adjacente ao RE, e a face trans está voltada em direção à membrana plasmática. A cisterna mais externa de cada face está conectada a uma rede de vesículas e tubos membranosos interconectados. As proteínas solúveis e de membrana entram na rede cis--Golgi pelas vesículas transportadoras derivadas do RE. As proteínas viajam pelas cisternas em sequência por meio de vesículas transportadoras que brotam de uma cisterna e se fundem com a próxima. As proteínas deixam a rede trans-Golgi em vesículas transportadoras destinadas à superfície celular ou outra organela do sistema de endomembranas . Acredita-se que tanto a rede cis quanto a rede trans de Golgi sejam importantes para a distribuição protéica: as proteínas que entram na rede cis-Golgi podem mover-se adiante pela pilha de Golgi ou, caso contenham um sinal de retenção no RE, ser direcionadas de volta ao RE; as proteínas que saem da rede trans-Golgi são distribuídas de acordo com o seu destino, para os lisossomos (via endossomos) ou para a superfície celular. A membrana do complexo de Golgi é constituída de 35-40% de lipídeos, do tipo fosfolipídeos, assimetricamente distribuídos e 60-65% de proteínas, sendo estas estruturais, enzimas, e responsáveis pela formação e direcionamento das vesículas. Na luz, ou cisterna, da organela encontram-se mono e polissacarídeos, proteínas de secreção e enzima. O complexo de Golgi também possui uma matriz proteica difusa: um arcabouço proteico (golginas) envolvido na manutenção da organização das cisternas do aparelho de Golgi, além de atuarem na fosforilação durante a divisão celular Questão 2 - Quais as principais funções do complexo de Golgi? - processamento de proteínas e lipídios - síntese de polissacarídeos - transporte e endereçamento de substâncias Questão 3 - Cite um exemplo importante para cada uma das principais reações bioquímicas que ocorrem no complexo de Golgi a) Glicosilações: processamento de oligossacarídeos N-ligados → remoção de manoses e adição de outros oligossacarídeos ou remoção de algumas manoses e nenhum outro oligossacarídeos é adicionado. Há, portanto, a formação de oligossacarídeos O-ligados: adição de açúcares aos grupos OH das cadeias laterais de serina e treonina exemplo: polimerização de cadeias de glicosaminoglicanos em proteoglicanos; glicosilação de lipídeos de membrana diferenciais do sistema ABO b) Fosforilações: adição de um fosfato à uma manose dos oligossacarídeos N-ligados, com a formação do resíduo manose-6-fosfato (M6P) em enzimas lisossomiais c) Sulfatações: sulfatação de proteínas de secreção e domínios extracelulares de lipídios e proteínas da membrana plasmática → adição de sulfato, pela 3-fosfoadenosina-5’-fosfosulfato (PAPS), à cadeias glicídicas de proteínas e lipídios e/ou resíduos de tirosina exemplo: sulfatação de proteoglicanos da matriz extracelular animal (sulfatação dos resíduos de carboidratos) Questão 4 - Qual o papel das proteínas de cobertura? As vesículas se formam a partir de regiões especializadas da membrana do aparelho de Golgi e são revestidas por proteínas específicas chamadas proteínas de curvatura. As proteínas de curvatura são responsáveis por auxiliar a curvatura da membrana para viabilizar o brotamento da vesícula e realiza a seleção do material a ser transportado pela vesícula formada. As proteínas são: clatrina, COP I e COP II. Questão 5 - Onde encontramos formação de vesículas cobertas por: a) Clatrinas As vesículas mais bem estudadas são aquelas que têm uma capa externa composta por clatrina. Essas vesículas revestidas por clatrina brotam do aparelho de Golgi, na via secretória, e da membrana plasmática, na via endocítica. Na membrana plasmática, por exemplo, cada vesícula se inicia como uma diminuta invaginação revestida por clatrina. As moléculas de clatrina se associam em uma rede de forma esférica na superfície citosólica da membrana, e é esse processo de associação que começa a dar o formato de vesícula à membrana b) COP I e II: As vesículas cobertas pela COP 1 brotam do complexo de Golgi e fazem o transporte entre os sáculos golgianos, o transporte anterógrado de moléculas do Golgi para o retículo, a reciclagem de moléculas, tais como receptores, e o transporte para a membrana plasmática. As vesículas cobertas pela COP lI, por sua vez, brotam do retículo endoplasmático e fazem o transporte de moléculas do RE para o complexo de Golgi Questão 6 - Qual a importância do trânsito retrógrado que ocorre no sistema de endomembranas? O trânsito retrógrado é capaz de devolver ao retículo endoplasmático proteínas e outras macromoléculas residentes do RE que, por engano, foram englobadas na vesícula e endereçadas ao Golgi. Para não haver perda ou eliminação por exocitose dessas substâncias, o trânsito retrógrado permite que elas voltem ao seu local de origem → COP I reconhece os chamados sinais de recuperação (sequências de duas lisinas e dois aminoácidos quaisquer na região C terminal) que identificam a proteína como pertencente à membrana do RE; sequência KDEL (Lys-Asp-Glu-Leu) na região C-terminal identifica a proteína como pertencente à cisterna no RE (proteína solúvel de RE) e interagem com o receptor KDEL. Questão 7 - Quais as principais moléculas envolvidas no reconhecimento entre vesícula e membrana-alvo? Como elas funcionam? Um aspecto importante do transporte por meio de vesículas é que deve haver um reconhecimento específico entre a membrana da vesícula e a membrana com a qual ela devefundir-se. Além disso, a fusão entre as duas membranas deve processar-se de maneira correta para que a vesícula descarregue seu conteúdo na organela a que se destina. O reconhecimento específico e a fusão subsequente são mediados por proteínas denominadas SNARE. Essas proteínas são intrínsecas às membranas da vesícula e da organela-alvo, constituindo, respectivamente, as v-SNARE e as t-SNARE (a letra t refere-se a target, do inglês, alvo). As vesículas cobertas brotam de um compartimento apresentando, intrínsecas a suas membranas, proteínas v-SNARE com domínios citoplasmáticos salientes. A vesícula é transportada por microtúbulos até encontrar a membrana-alvo, que contém, por sua vez, proteínas t-SNARE com domínios voltados para a face citoplasmática da membrana. Os domínios v-SNARE reconhecem e se ligam aos domínios t-SNARE das membranas-alvo, formando complexos trans-SNARE que garantem a proximidade entre as duas membranas e a fusão.
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