Exercícios 2 de Bioquímica: ELETROFORESE DE AMINOÁCIDOS E PEPTÍDEOS

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Disciplina: Bioquímica Professor: Adriano Gonçalves Viana 
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DESAFIOS DE BIOQUÍMICA 2020 
 
DESAFIO 02: ELETROFORESE DE AMINOÁCIDOS E PEPTÍDEOS 
A eletroforese é uma técnica de separação de uma mistura de moléculas que 
envolve a migração de partículas carregadas eletricamente em um determinado gel ou 
papel quando se aplica uma diferença de potencial. Uma mistura de aminoácidos é 
separada na eletroforese com base em seus valores de ponto isoelétrico (pI). Para fazer 
a separação algumas gotas de uma solução da mistura de aminoácidos são aplicadas em 
um papel de filtro ou em um gel, conforme representado na figura abaixo. Quando o 
papel ou o gel é colocado entre dois eletrodos em uma solução tamponada e é aplicado 
um campo elétrico, o aminoácido com pI maior do que o pH da solução terá uma carga 
global positiva e migrará na direção do catodo (o eletrodo eletronegativo). Quanto 
maior for a diferença do pI do aminoácido do pH da solução, mais positivo estará o 
aminoácido e mais rápido ele migrará na direção do catodo. Um aminoácido com pI 
menor do que o pH da solução do tampão terá uma carga global negativa e migrará em 
direção ao anodo (o eletrodo positivo). Quando duas moléculas têm cargas iguais, a 
separação se dará também em virtude do tamanho destas moléculas (ou massa 
molecular), pois a molécula maior se moverá mais lentamente. Para fazer a detecção 
dos aminoácidos após sua separação podem ser utilizadas várias técnicas, dentre elas 
podemos citar uma técnica de coloração que simplesmente consiste em borrifar o papel 
de filtro com o reagente conhecido como ninhidrina. Após secar sob temperatura a 
maioria dos aminoácidos pode ser visualizada no papel de filtro como um produto de 
cor púrpura. 
 
 
 
 
 
 
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Desafio 02A: Eletroforese de aminoácidos. 
Em uma mistura de aminoácidos encontramos: 
 
Aminoácido pK1 pK2 pKR 
Glutamato (Glu) 2,19 9,67 4,25 
Lisina (Lys) 2,18 8,95 10,53 
Aspartato (Asp) 1,88 9,60 3,65 
Alanina (Ala) 2,34 9,69 - 
 
a) Determine o ponto isoelétrico de cada um dos aminoácidos. 
 
Aminoácido pI 
Glutamato (Glu) 
Lisina (Lys) 
Aspartato (Asp) 
Alanina (Ala) 
 
b) Ao submeter esta mistura de aminoácidos à técnica de eletroforese em papel, 
utilizando uma solução tampão pH 3,22, preveja qual será o padrão de migração 
esperado para os aminoácidos, indicado a localização dos mesmos na 
eletroforese abaixo: 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Disciplina: Bioquímica Professor: Adriano Gonçalves Viana 
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Desafio 02B: Eletroforese de aminoácidos. 
Como mencionado anteriormente: “quando duas moléculas têm cargas iguais, a 
separação se dará também em virtude do tamanho destas moléculas (ou massa 
molecular - PM), pois a molécula maior se moverá mais lentamente”. Desta forma, 
considerando as informações da tabela abaixo, preveja: o ponto isoelétrico (pI), a 
mobilidade eletroforética (Me) e o padrão de migração em papel de filtro dos 
aminoácidos glicina, leucina, ácido aspártico, ácido glutâmico e lisina, em pH 4,7. 
 
Aminoácido pK1 pK2 pKR PM 
Glutamato (Glu) 2,19 9,67 4,25 147 
Lisina (Lys) 2,18 8,95 10,53 146 
Aspartato (Asp) 1,88 9,60 3,65 133 
Glicina (Gly) 2,34 9,60 - 75 
Leucina (Leu) 2,36 9,60 - 131 
 
Nota: para este exercício utilize a fórmula: 
 
Mobilidade eletroforética (Me) = k.[(pHtampão – pIaminoácido)/PMaminoácido] 
 
Aminoácido pI Me 
Glutamato (Glu) 
Lisina (Lys) 
Aspartato (Asp) 
Glicina (Gly) 
Leucina (Leu) 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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Desafio 02C: eletroforese de peptídeos. 
Considerando os aminoácidos apresentados na tabela abaixo: 
Aminoácido pK1 pK2 pKR 
Alanina (Ala) 2,34 9,69 - 
Lisina (Lys) 2,18 8,95 10,53 
Serina (Ser) 2,21 9,15 - 
 
a) Calcule o pI do tripeptídeo: Ala-Lys-Ser. 
Aminoácido pI 
Ala-Lys-Ser 
 
b) Considerando que em valores de pH acima do pI o tripeptídeo possui carga 
negativa e em valores de pH abaixo do pI o tripeptídeo possui carga positiva, 
preveja para qual polo este tripeptídeo migraria quando submetido a uma 
eletroforese em solução tampão pH 7,0. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Disciplina: Bioquímica Professor: Adriano Gonçalves Viana 
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Desafio 02D: eletroforese de peptídeos. 
Considerando os aminoácidos apresentados na tabela abaixo: 
Aminoácido pK1 pK2 pKR 
Alanina (Ala) 2,34 9,69 - 
Serina (Ser) 2,21 9,15 - 
Ácido glutâmico (Glu) 2,19 9,67 4,25 
 
a) Calcule o pI do tripeptídeo: Ala-Glu-Ser. 
Aminoácido pI 
Ala-Glu-Ser 
 
b) Considerando que em valores de pH acima do pI o tripeptídeo possui carga 
negativa e em valores de pH abaixo do pI o tripeptídeo possui carga positiva, 
preveja para qual polo este tripeptídeo migraria quando submetido a uma 
eletroforese em solução tampão pH 7,0.