Prévia do material em texto
Grande parte dos métodos utilizados em bioquímica clínica estão baseados na medida quantitativa da absorção da luz pelas soluções. A concentração na solução de substância absorvente é proporcional à quantidade de luz absorvida. Estas medidas são efetuadas por instrumentos fotocolorímetros ou espectrofotômetros. MEDIDA DA TRANSMITÂNCIA E ABSORBÂNCIA A transmitância e a absorbância das soluções coloridas são medida por meio de instrumentos denominados espectrofotômetros (fotômetros). Estes instrumentos empregam como fonte luminosa uma lâmpada incandescente produtora de luz branca. Potencialmente, pode-se empregar qualquer comprimento de onda da região visível. Para a resolução da luz num determinado comprimento de onda desejado, são utilizados monocromadores que consistem de filtros interferentes ou de absorção (fotômetros de filtro), prismas ou retículos de difração (espectrofotômetros). A luz atravessa uma solução colorida presente em uma cubeta; parte é absorvida(esta absorção depende da intensidade da cor da solução) . A luz transmitida ( detectada por uma fotocélula ) tem intensidade menor que a luz incidente. A fotocélula converte a energia elétrica, emitindo um sinal que pode ser lido na escala de um galvanômetro, em percentagem de transmitância (luz transmitida) ou em absorbância (luz absorvida). LEI DE BEER-LAMBERT A lei de Beer-Lambert (ou simplesmente Lei de Beer ) afirma que a concentração de uma substância é diretamente proporcional à quantidade de luz absorvia ou inversamente proporcional ao logaritmo da luz transmitida. Na prática laboratorial, a aplicação quantitativa da lei de Beer é realizada pelo emprego de espectrômetros, onde são lidas as absorbâncias de uma solução teste e uma solução padrão de concentração conhecida ( após submetida a reações apropriadas) e aplicada a seguinte relação: Concentração do teste = conc. do padrão x absorb. do teste absorb. do padrão Obs: Esta relação só é aplicada quando a reação colorimétrica segue a Lei de Beer Contexto clínico laboratorial MOTA. V.T. Bioquímica Clínica para o laboratório . 4 ed. Porto Alegre: Editora Médica Missau MOURA,Roberto de Almeida & WADA, Carlos S. & PURCHIO, Adhemar & ALMEIDA Therezinha V. Técnicas de Laboratório. 3 ed. São Paulo: Editora Atheneu Exercício 1: Na prática laboratorial, a aplicação quantitativa da lei de Beer é realizada pelo emprego de espectro fotômetros,onde são lidas as absorbâncias de um tubo teste e de um tubo padrão. Qual a função do tubo padrão? A) É um tubo com concentração conhecida, utilizado para efeitos de cálculo. B) É um tubo com concentração desconhecida, utilizado para efeitos de cálculo. C) É um tubo contendo amostra, com concentração conhecida. D) É um tubo contendo uma solução colorida, com concentração desconhecida. E) É um tubo contendo uma solução incolor. O aluno respondeu e acertou. Alternativa(A) Comentários: A) Exercício 2: A maioria dos métodos utilizados em bioquímica clínica baseia-se na medida quantitativa da absorção de luz pelas soluções. Essas medidas são efetuadas por um instrumento denominado A) fotômetro de chama. B) espectrofotômetro. C) galvanômetro. D) grades de difração. E) espectrofotômetro de chama. O aluno respondeu e acertou. Alternativa(B) Comentários: B) Exercício 3: Na prática laboratorial, o princípio da Lei de Lambert-Beer afirma que A) A concentração de uma substância é diretamente proporcional à quantidade de luz transmitida. B) A concentração de uma substância é inversamente proporcional à intensidade de cor. C) A concentração de uma substância é inversamente proporcional à quantidade de luz absorvida. D) A concentração de uma substância é diretamente proporcional à quantidade de luz absorvida. E) A intensidade de cor de uma substância é diretamente proporcional à quantidade de luz transmitida. O aluno respondeu e acertou. Alternativa(D) Comentários: D) Exercício 5: Em laboratório clínico, as determinações bioquímicas são realizadas pelo emprego de fotômetros, onde são lidas as absorbâncias do tubo tesse e do tubo padrão. Segundo a Lei de Lambert-Beer, qual a relação quantitativa aplicada? A) Concentração do padrão = conc. do teste x absorb. do teste. B) Concentração do padrão = conc. do padrão x absorb. do padrão. C) Concentração do teste = conc. do teste x absorb. do padrão. D) Concentração do teste = conc. do padrão x absorb. do teste. absorb. do teste. E) Concentração do teste = conc. do padrão x absorb. do teste absorb. do padrão. O aluno respondeu e acertou. Alternativa(E) Comentários: E)