Avaliação 1 unidade 2020 2

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Faculdade Independente do Nordeste 
Data: 05/10/2020 
Profª. Dra. Tatielle Pereira Silva 
Disciplina: Enzimologia Curso: Farmácia 
Discente: CAROLINA NEVES PAIXÃO 
Avaliação 1ª Unidade 
 
1. Um farmacêutico isolou um polipeptídeo de origem fúngica através da 
cromatografia liquida de proteínas. Após o isolamento passou para a 
caracterização e através da espectrometria de massa observou-se que o 
mesmo possui 117 ligações peptídicas, logo esse polipeptídeo possui ___ 
aminoácidos. 
 
R: 118 aminoácidos 
 
2. Sabe-se que os fungos e bactérias conseguem secretar biomoléculas de 
interesse biotecnológico e industriais por técnicas, tais como fermentação em 
estado líquido ou sólido. Um cientista isolou e sequenciou um peptídeo que 
possui 104 ligações peptídicas, determine os respectivos números de: 
Aminoácidos e de Grupamento(s) Amino-terminal e Grupamento(s) Ácido-
terminal são: 
 
Aminoácidos - 105 
Amino-terminal- 105 
Ácido-terminal- 105 
 
3. Algumas proteínas dependem de um grupo prostético para manter sua 
atividade em sua forma nativa. Qual alternativa não representa um exemplo 
de grupo prostético de proteínas? 
 
a) Zinco 
b) Cisteína 
c) Ácido graxo 
d) Glicose 
 
 
4. Um pesquisador da área de Química de Proteínas observou em seus 
experimentos de isolamento, caracterização e identificação dessas 
macromoléculas que isolou mais de uma biomolécula ativa. Uma possuía 
massa molecular de 9000 e outra de 20000. Ao realizar os testes de 
caracterização observaram que o pH ótimo da molécula menor de (9000) era 
5 e da maior (20000) 8. Além disso, observou-se que a atividade dessas 
biomoléculas era maior e mais estável a 50 e 40ºC respectivamente. 
a) Quais tipos de biomoléculas foram isolados por esse pesquisador? 
 
o A de massa molecular de 20.000 são proteínas (Apresentam maior peso 
molecular) 
o A de massa molecular de 900 são polipeptídios. 
 
b) O que poderia acontecer se essas biomoléculas fossem incubadas em um 
tampão 10 e 3 respectivamente? 
 
Ao serem incubadas em um tampão, evitaria a variação do pH. 
 
c) Apresente a estrutura química da molécula em comum que compõe essas 
biomoléculas isoladas por esse pesquisador. E nomeie cada elemento 
presente nessa estrutura. Qual o grupo que altera a função dessa molécula? 
o A estrutura química dessas biomoléculas é formada por meio de um grupo amino, 
um grupo carboxila, hidrogênio e cadeia lateral R. 
o A e cadeia lateral R.é que é responsável pela característica da molécula. 
d) Se existirem átomos de enxofre na estrutura dessas biomoléculas isoladas 
por esse pesquisador, como acontecem às ligações? Quais fatores externos 
podem destruir essa ligação? Dê um exemplo prático e real de onde podemos 
encontrar esse tipo de ligação. 
o As ligações aconteceriam por ponte de sulfetos. 
o Temperatura , extremos de pH 
 
5. PRODUÇÃO, PURIFICAÇÃO, CARACTERIZAÇÃO E APLICAÇÃO DE UMA 
NOVA ENDOGLUCANASE HALOTOLERANTE E TERMOESTÁVEL DE 
BOTRYTIS RICINI URM 5627 
RESUMO: Uma proteína catalítica, endoglucanase halotolerante com uma massa 
molecular de 39 kDa foi obtida a partir da fermentação sólida do bagaço de cana-de-açúcar 
pelo fungo Botrytis ricini URM 5627 e isolada utilizando apenas dois processos de 
purificação: fracionamento com sulfato de amônio e Cromatografia líquida de filtração em 
gel, resultando em uma atividade de (1289,83U/mL). Após o isolamento procedeu-se as 
caracterizações bioquímicas, apresentando temperatura e pH ótimos de 50ºC e 5, 
respectivamente. A enzima apresentou-se estável em uma faixa de 39 a 60ºC por 60 min e 
entre os pHs 4 a 6. A atividade enzimática aumentou na presença de Na+, Mn2+, Mg2+, Zn2+ 
e diminuiu quando na presença dos íons Ca2+, Cu2+ e Fe2+. A endoglucanase apresentou um 
perfil halotolerante, uma vez que sua atividade foi aumentada à medida que a concentração 
de NaCl ficava maior. A máxima atividade foi alcançada em 2 M de NaCl com um 
incremento de 75% de atividade. A enzima tem Km de 0,1299 ± 0,0096 mg/ml e Vmax de 
0,097 ± 0,00121 mol/min/mL. Durante a aplicação em ensaios de sacarificação a enzima 
foi capaz de hidrolisar, bagaço de cana, casca de arroz e farelo de trigo, apresentando a 
maior produção de açúcares redutores em 24 horas de sacarificação do farelo de trigo 
(137,21 mg/g). Portanto, todas estas propriedades combinadas fazem desta enzima 
purificada uma potencial candidata para diversas aplicações biotecnológicas e industriais. 
a) Observando o resumo do artigo acima, descreva e explique quais foram 
os passos utilizados para purificar a proteína em questão. 
 
Um dos primeiros passos a se fazer para se ter uma proteína pura é a 
extração, no qual nesta etapa realizou-se a preparação do extrato da planta, 
macerar em água ou em solução tampão. A seguir foi realizado o saltig-out 
com sulfato de amônio para o fracionamento do extrato obtido na etapa 
anterior. Essa técnica baseia-se na diferença de solubilidade, onde o sal na 
presença de água realiza a solvatação, onde os íons vão se ligar a água e 
assim a proteína não vai se ligar, e vai precipitar. Posteriormente realizou a 
cromatografia liquida, ocorre uma exclusão por tamanho. 
 
b) Quais são os princípios da cromatografia utilizada nesse estudo? 
 
As cromatografias no geral se baseiam numa separação por características, 
neste caso a cromatografia utilizada foi a liquida e esta se baseia em uma 
solução rica em peptídeos e passaremos o tampão (exclusivo de peptídeo) e 
a medida que o tampão vai entrando na coluna ele vai saindo por diferença 
de tamanho. 
 
c) Se essa proteína for submetida a pHs alcalinos e temperaturas acima 
de 80ºC o que pode ocorrer? 
 
Desnaturação da proteína por fatores externos ao meio. 
 
6. Exemplifique peptídeos com funções biológicas. Explique como podemos 
diferenciar um peptídeo de uma proteína e aminoácido. Que ligação está 
presente para formação da estrutura dessas biomoléculas? 
 
I. Estes peptídeos desempenham importantes funções biológicas como o 
estimulo a produção de urina, regula a atividade hormonal e dos 
neurotransmissores, função imunológica entre outros. Alguns exemplos 
de peptídeos são: glutationa, ocitocina, bradicinina, vasopressina. A 
Ocitocina por exemplo entre outras funções é responsável pelo 
estímulo da contração uterina no parto e a ejeção do leite na lactação. A 
Bradicinina é um mediador da inflamação. 
 
II. Os aminoácidos são as bases estruturais dos peptídeos e proteínas. O 
peptídeo é um monômero, formado pela união entre dois ou mais 
aminoácidos. Já a proteína são polímeros que são formados por 
filamentos de polipeptídios. 
 
III. Os peptídeos são biomoléculas formadas por meio de ligações 
peptídicas (covalentes) por dois ou mais aminoácidos. São constituídos 
por um grupo amino (N+H3) um grupo carboxila (COOH), um átomo 
de hidrogênio (H) e um grupo radical (R), todos ligados a um carbono 
alfa. 
7. Discorra sobre estrutura de proteínas, quantas e quais estruturas existem e 
quais ligações as estabilizam. 
o Estrutura primária – Nível estrutural mais simples e importante pois dela 
que se deriva as demais estruturas. Cadeia principal da proteína com 
sequência de aminoácidos unidos por ligação peptídica e algumas pontes de 
sulfeto. 
o Estrutura secundária-. Corresponde a regiões localizadas de estruturas 
estabilizadas. Os dois tipos principais de estrutura secundária são a hélice alfa 
(estrutura helicoidal) e folha beta. Ambas as estruturas são estabilizadas 
por ligações de hidrogénio entre os grupos -NH e C=O da cadeia principal. 
 
o Estrutura terciária- Arranjo tridimensional das estruturas secundárias numa 
cadeia polipeptídica, mantida por ligações fracas como pontes de 
H, ligações iônicas e interações hidrofóbicas ou ligações de pontes de sulfeto. 
Proteínas Globulares, Proteínas Fibrosas, Proteínas secretadas, Proteínas de 
membrana. 
o Estrutura quartenaria - arranjotridimensional de diferentes cadeias 
polipeptídicas (subunidades) que constituem uma proteína ativa. 
8. Através de que técnica podemos inferir se um peptídeo ou proteína está pura? 
Quais características devem ser observadas? 
 A técnica é a eletroforese onde se utiliza um gel de poliacrilamida Deve ser observadas 
o aparecimento de bandas. Quanto menor numero de bandas maior o grau de pureza. 
Uma banda apenas significa que a proteína está pura e assim pode-se determinar suas 
características como temperatura e pH ótimo dentre outros parâmetros bioquímicos. 
 
9. Diferencie proteínas simples de proteínas conjugadas. 
As proteínas simples como o próprio nome diz, são proteínas menos complexas em 
relação as proteínas conjugadas, pois possuem apenas aminoácidos em sua 
https://www.infoescola.com/reproducao/lactacao-e-amamentacao/
estrutura. Nas proteínas conjugadas além de aminoácidos, possuem em sua 
composição demais componentes químicos (grupos prostéticos). 
EX: Glicoproteínas, Lipoproteínas e Metaloproteínas. 
10. Quanto à solubilidade em água, como as proteínas podem ser classificadas? 
Podem ser classificadas em proteínas globulares), apresentam muitos aminoácidos 
polares e por isto é solúvel em H2O e fibrosas apresentam muitos aminoácidos 
apolares e devido a isto sem sempre insolúveis em H2O. 
 
11. Comente sobre funções de proteínas fibrosas e globulares. 
As proteínas podem se emaranhar em formatos diversos, todavia é possível 
identificar dois principais formatos que são as proteínas globulares e as proteínas 
fibrosas. 
✓ As proteínas fibrosas apresentam cadeias polipeptídicas em longas fitas 
ou folhas. Desempenham um papel estrutural: Conferindo resistência/ 
elasticidade (queratina ) e Colágeno no tecido conjuntivo. 
 
✓ As proteínas globulares já apresentam cadeias polipeptídicas enoveladas (forma 
esférica ou globular). Como exemplo de proteínas globulares temos as enzimas 
(catalise de reações orgânicas no organismo), as hemoproteinas como a 
hemoglobina (transporte de oxigênio) e os anticorpos( proteção do corpo contra 
organismos patogênicos). 
12. O que é desnaturação proteica? Quais são os agentes desnaturantes e 
que tipo de ligação eles podem romper? 
A desnaturação proteica é um processo que ocorre quando as proteínas (molécula 
biológica) tem algumas de suas estruturas (primária, secundária, terciária) 
modificadas ou destruídas o que as deixam inativas pois muitas funções que esta 
molécula desempenha estão ligadas a suas estruturas. Esse processo ocorre devido 
a exposição dessas moléculas a condições diversas como variações de temperatura, 
mudanças de pH, força iônica, a alteração da temperatura, extremos de pH do meio, 
ação de solventes orgânicos, agentes oxidantes e redutores, agitação vigorosa. Com 
isso as suas cadeias polipeptídicas desenrolam-se e perdem a conformação natural.