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LISTA DE EXERCÍCIOS 
 
CROMATOGRAFIA 
 
1. O que é cromatografia? 
A cromatografia é um método físico-químico de separação. Esta técnica está fundamentada na 
migração diferencial dos componentes de uma mistura, que ocorre devido a diferentes 
interações, entre duas fases imiscíveis, a fase móvel e a fase estacionária 
 
2. Cite duas aplicações da cromatografia. 
- Separação de componentes de uma mistura (extrato) 
- Purificação de uma substância de interesse 
 
EXTRAÇÃO DE DNA 
 
3. Os protocolos de extração de ácidos nucléicos baseiam-se em 3 etapas principais. Quais 
são elas? Para que serve cada etapa? 
- Lise celular: rompe a membrana plasmática e envoltório nuclear 
- Purificação da amostra: remove os detergentes e sais utilizados na lise celular 
- Precipitação dos ácidos nucléicos: separa o DNA da amostra 
 
4. Um pesquisador deseja fazer o sequenciamento do genoma de uma nova espécie de 
planta. Para isso, umas das primeiras etapas do protocolo consiste na extração de DNA. 
Explique de maneira resumida como seria este procedimento. 
Como a amostra biológica é de tecido vegetal, deve ser feito um preparo para rompimento de 
parede celular, geralmente utilizando nitrogênio líquido, seguido pelas etapas de extração de 
DNA de lise celular, purificação e precipitação. 
 
5. Após realizar uma extração de DNA, como você faria para quantificar o DNA da amostra? 
Por que é importante quantificar o material extraído? 
Por meio de espectrofotometria ou fluorescência em gel. É importante quantificar a amostra para 
verificar a qualidade do material extraído (gel) e para padronizar a quantidade de DNA a ser 
utilizada nos experimentos seguintes. 
 
ELETROFORESE EM GEL 
 
6. Sobre o método de eletroforese e gel, 
responda: a) Para que é utilizada esta técnica? 
Para separar fragmentos de DNA, RNA e proteínas 
 
b) No que se baseia a técnica? 
A técnica se baseia na separação de fragmentos de diferentes tamanhos ao serem submetidos a 
uma corrente elétrica. Os fragmentos menores migram mais rapidamente que os fragmentos 
maiores. 
 
c) Quando deve-se usar o gel de agarose ou de poliacrilamida? 
 
O gel de agarose separa fragmentos grandes que variam de 0,2kb a 50kb (1kb = 1000 pares de 
bases), enquanto que o gel de poliacrilamida separa fragmentos pequenos de até 1kb. 
 
7. Um pesquisador está estudando uma proteína que tem sua expressão aumentada quando 
submetida a determinados agentes mutagênicos. Para isso, fez o tratamento químico das células, 
preparou um extrato celular e fez a separação em gel. Que tipo de gel deve utilizar? Por que? 
Deve usar um gel de poliacrilamida, pois permite a separação de proteínas 
 
8. Ao aplicar as amostras de DNA, RNA ou proteínas, porque devemos utilizar um tampão de 
amostra? Para que se utilizar marcador de peso molecular (ladder)? 
O tampão de amostra dá cor ao material e o deixa mais denso, o que facilita a sua aplicação 
no gel. 
O marcador de peso molecular serve como parâmetro para identificar o tamanho das bandas 
formadas no gel. 
 
REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE 
 
9. Qual o princípio da reação em cadeia da polimerase? 
 
O princípio do método baseia-se na replicação artificial do DNA em um tubo, no qual o material 
é submetido a variações controladas de temperatura na presença de uma enzima DNA 
polimerase e seus substratos. 
 
10. Quais os componentes necessários para uma reação de PCR? 
1) DNA polimerase 
2) Desoxirribonucleotídeos trifosfatados (A, T, G e C) 
3) Par de primers 
4) Alguns sais 
5) DNA molde 
 
11. As reações de PCR ocorrem em ciclos repetidos de desnaturação, anelamento e 
extensão. a) Explique o que ocorre em cada etapa. 
- Desnaturação: abertura da dupla fita de DNA 
- Anelamento dos primers: os primers reconhecem as seqüências complementares a eles e se 
hibridizam 
- Extensão: a DNA polimerase faz a síntese de cadeias complementares ao molde 
 
b) Por que devem ser realizados diversos ciclos repetidos? 
Para obtenção de múltiplas cópias de uma seqüência de DNA (molde) 
 
12. Sobre as variações da técnica de PCR, preencha as lacunas com: 
I. RT-PCR 
II. PCR em tempo real 
III. PCR multiplex 
a. ( III ) Utiliza diferentes pares de primers para uma mesma reação de PCR, produzindo 
amplicons com tamanhos variáveis 
 
b. ( I ) Método utilizado para análise da expressão gênica a partir da quantificação de RNAm 
 
c. ( II ) Neste método são utilizados corantes fluorescentes que se ligam ao DNA molde ou ao 
amplicon a medida em que ocorre a síntese de novas fitas 
 
d. ( III ) Este método permite economia de tempo e de reagentes, pois amplifica-se diferentes 
seqüências de DNA ao mesmo tempo 
e. ( I ) A informação do RNAm deve ser convertida para uma fita de cDNA