Plataformas Moleculares para as Atividades Biológicas

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Plataformas Moleculares para as Atividades Biológicas
1° avaliação 
		1a
          Questão
	Acerto: 1,0  / 1,0
	
	São exemplos de ácidos nucleicos:
		
	
	Timina e uracila.
	 
	DNA e RNA;
	
	Adenina e guanina;
	
	Proteínas e lipídios;
	
	Monossacarídeos e dissacarídeos;
		Explicação: As demais alternativas fornecem exemplos de outras macromoléculas ou bases nitrogenadas.
	
		2a
          Questão
	Acerto: 1,0  / 1,0
	
	(POLÍCIA CIENTÍFICA, PE, 2016) - Acerca da reação em cadeia da polimerase (PCR), assinale a opção correta:
		
	 
	PCR é a tecnologia por meio da qual são produzidos bilhões de cópias de fragmentos de DNA. Os fragmentos do DNA amplificado pela PCR são chamados amplicons e podem ser tipificados usando-se diferentes métodos.
	
	Os iniciadores são pequenos fragmentos sintéticos de DNA de fita dupla, usualmente com extremidade 3'-OH, e complementares à sequência do segmento de DNA de interesse;
	
	A enzima termoestável direciona o posicionamento dos precursores de DNA ― dNTP ― iniciando a síntese de novas fitas de DNA. A temperatura ideal para a polimerização varia entre 25 ºC e 45 ºC;
	
	A reação de PCR é dependente da atividade de cópia de fragmentos de DNA, catalisada pela enzima DNA sintetase;
	
	O último passo da PCR, a polimerização, é a excisão da fita de DNA no sentido 3'→5', começando no primeiro nucleotídeo do primer iniciador incorporado;
		Explicação: A enzima é chamada DNA polimerase. Os iniciadores são moléculas fita-simples com a extremidade 3´OH livre, complementares às bordas do fragmento de interesse. A fita de DNA molde lida no sentido 3´--> 5´ não é removida após a polimerização/extensão da fita nascente no sentido 5´ --> 3´ na última etapa de um ciclo de PCR. Na ciclagem subsequente, esse DNA hídrido será desnaturado, disponibilizando ambas as fitas como molde para novas reações de polimerização. O estabelecimento dos dNTPs a serem incorporados pela enzima termoestável se dá pela fita de DNA molde, em função da complementariedade de bases. A temperatura ideal de polimerização varia entre 50-55°C.
	
		3a
          Questão
	Acerto: 0,0  / 1,0
	
	(Prefeitura de Barra Mansa, RJ, 2010) - Eletroforese em gel é uma técnica de separação de moléculas que envolve a migração de partículas em um determinado gel durante a aplicação de uma diferença de potencial. Em relação à eletroforese em gel é correto afirmar que:
		
	 
	após a eletroforese em gel, os fragmentos de DNA normalmente são corados com brometo de etídeo, que possui afinidade pelo DNA e fluoresce (torna-se visível) vivamente em contato com a luz infra-vermelha.
	
	as moléculas são separadas de acordo com o seu tamanho, as de menor massa situam-se na porção superior do gel e as de maior massa na porção inferior;
	 
	as moléculas são separadas de acordo com o seu tamanho, as de maior massa situam-se na porção superior do gel e as de menor massa na região inferior;
	
	na migração do DNA em um gel de agarose, sendo o DNA positivamente carregado, ele é atraído pelo eletrodo negativo;
	
	Na migração do DNA em um gel de agarose, sendo o DNA negativamente carregado, ele é atraído pelo eletrodo negativo;
		Explicação: O DNA possui carga negativa, o que faz com que a migração ocorra do polo negativo (repulsão) em direção ao polo positivo (atração). A facilidade com que isso ocorre depende do tamanho das partículas. As maiores ficam atrasadas na trama do polímero, e são retardadas na migração, fazendo com que ocupem posições superiores no gel. Para a revelação do resultado, é necessário excitar o brometo de etídeo com luz UV.
	
		4a
          Questão
	Acerto: 0,0  / 1,0
	
	(Fiocruz, 2010) - Assinale a afirmativa incorreta:
		
	
	Na metodologia de PCR em Tempo - Real, a utilização de sondas marcadas com fluoróforos permite a realização de reações multiplex;
	 
	É a curva de dissociação obtida ao final da corrida de PCR em Tempo - Real que permite a verificação da especificidade da amplificação obtida;
	
	A técnica de PCR em Tempo - Real é mais sensível que a técnica de PCR convencional.
	
	Na metodologia de PCR em Tempo - Real, quanto maior for a quantidade de DNA alvo presente em uma dada amostra um menor número de ciclos de PCR será necessário para se obter uma quantidade de fluorescência a partir desta dada amostra acima do ruído de fundo do aparelho (Ct);
	 
	A metodologia de PCR em Tempo - Real é a única metodologia de PCR quantitativo existente;
		Explicação: A metodologia de PCR digital corresponde a um avanço da metodologia de PCR em tempo real, permitindo a quantificação de ácidos nucleicos com grande sensibilidade e dispensando a necessidade de curva-padrão.
	
		5a
          Questão
	Acerto: 0,0  / 1,0
	
	(Unesp, 2012): Um clone de cDNA para um gene humano que codifica uma proteína amilase foi marcado com radioatividade e utilizado em um experimento de Southern blotting. Nesse experimento, o DNA genômico de Ratos Wistar foi digerido com a enzima de restrição Eco RI e três fragmentos de DNA foram observados na análise de Southern blotting. Quando os pesquisadores realizaram os mesmos experimentos com outra linhagem de ratos, foi observada a ausência de fragmentos na análise de Western blotting, mesmo após estes experimentos terem sido repetidos três vezes. Podemos concluir corretamente que:
		
	
	os resultados da análise de Southern blotting com os ratos Wistar demonstram que há o reconhecimento de sítios de restrição pela enzima Eco RI na sequência de DNA do gene que codifica a proteína amilase. Entretanto, a ausência de fragmentos na outra linhagem de camundongo analisada é certamente resultado de erros metodológicos na aplicação dessas análises, pois este seria um resultado improvável;
	
	esses resultados demonstram que o DNA dos ratos Wistar contém dois ou mais sítios de restrição para a enzima Eco RI e, após a digestão com essa enzima, são gerados três fragmentos de tamanhos diferentes. Na outra linhagem de ratos, a ausência de fragmentos fornece prova de que esses animais sofreram mutações na sequência de DNA que codifica a proteína amilase e essa sequência não é mais reconhecida pela enzima de restrição Eco RI, portanto não são observados fragmentos na análise de Southern blotting;
	 
	esses resultados mostram que existem três sítios de restrição para a enzima Eco RI no DNA genômico dos ratos Wistar, gerando, portanto, três fragmentos de tamanhos diferentes na análise de Southern blotting. Na outra linhagem de ratos, a presença de apenas um sítio de restrição para essa enzima (Eco RI) gera um fragmento muito grande, o qual não é capaz de se hibridizar com o clone de cDNA e, portanto, não é possível ser detectado pela análise de Southern blotting;
	 
	na linhagem de ratos Wistar a região do DNA que codifica a proteína amilase contém dois sítios de restrição para a enzima Eco RI e, após a digestão com essa enzima, são gerados três fragmentos que sofreram hibridação com o clone de cDNA. Na outra linhagem de ratos, a ausência de fragmentos sugere que esses animais não têm a capacidade de produzir essa enzima amilase, pois essa sequência de DNA pode ter sido perdida ou deletada;
	
	esses resultados demonstram que, na linhagem de ratos Wistar, existe um sítio de restrição para a enzima Eco RI na sequência da proteína amilase e, portanto, são observados três fragmentos com tamanhos diferentes que sofreram hibridação com o clone de cDNA. Na outra linhagem de ratos, a ausência de fragmentos demonstra a falta de sítios de restrição para a enzima Eco RI na proteína amilase desses animais, indicando, portanto, que o gene da amilase está deletado por mutação no DNA desses animais.
		Explicação:O número de sítios de restrição cliváveis pela enzima Eco RI para o gene analisado irá implicar na quantidade de fragmentos encontrados. Um sítio de restrição gera dois fragmentos, dois sítios de restrição gera três fragmentos e, assim sucessivamente. Na outra linhagem de ratos, a ausência de bandas no Western Blot sinaliza a ausênciada proteína (amilase) que seria codificada pelo seu respectivo gene codificante.
	
		6a
          Questão
	Acerto: 1,0  / 1,0
	
	(Fiocruz, 2010): Nas análises rotineiras de eletroforese bidimensional, após a ruptura dos tecidos e/ou das células, as proteínas são solubilizadas e desnaturadas em soluções contendo detergentes não iônicos ou zwiteriônicos, agentes caotrópicos e pequenas quantidades de agentes redutores, para posterior análise em gel. Assinale abaixo a única alternativa que não descreve exemplos, respectivamente, destas três classes de substâncias:
		
	
	Triton X-100, hidrocloreto de guanidina e Ditiotreitol;
	 
	Duodecil sulfato de sódio, uréia e Ditiotreitol;
	
	CHAPS (3-[(3-Cloroamidopropil)dimetilamônio]-1 propanosulfonato), uréia e iodoacetamida;
	
	sulfobetaínas, tiouréia e β-mercaptoetanol.
	
	Triton-X100, tiouréia e β-mercaptoetanol;
		Explicação: O duodecil sulfato de sódio (SDS) é um agente caotrópico.
	
		7a
          Questão
	Acerto: 0,0  / 1,0
	
	(INSTITUTO AOCP, 2018): Considerando as técnicas de sequenciamento do DNA, a respeito das características desse tipo de procedimento, assinale a alternativa correta:
		
	
	A presença de ddNTPs na reação dispensa a adição de desoxinucleotídeos trifosfato normais;
	
	O método de dideoxinucleotídeos utiliza o grupo 3-hidroxila;
	 
	O método Sanger também é conhecido como sequenciamento de nova geração;
	 
	Os fragmentos resultantes são separados eletroforeticamente e submetidos à autorradiografia;
	
	A utilização de vetores plasmidiais, em técnicas de subclonagem de fragmentos de DNA, é denominada "pirossequenciamento".
		Explicação: Devido à ausência do grupamento hidroxila no carbono 3´ da pentose, os nucleotídeos modificados não possuem capacidade de fazer ligação química com um próximo nucleotídeo. O sequenciamento de nova geração corresponde a uma metodologia mais moderna de sequenciamento genômico, de alta vazão, ao contrário do método de Sanger. A presença de ddNTPs não dispensa a necessidade de dNTPs, uma vez que, é necessário produzir moléculas de DNA com diferentes extensões para se elucidar a ordem das bases nitrogenadas. Se apenas ddNTPs estivessem presentes, as moléculas seriam abortadas precocemente, tão logo um ddNTP fosse incorporado. As reações de pirosequenciamento dispensam a necessidade de clonagem molecular.
	
		8a
          Questão
	Acerto: 1,0  / 1,0
	
	 Na clonagem, "células competentes" são:
		
	
	B) a fase de crescimento da estirpe.
	
	A) a marca comercial da estirpe empregada.
	
	 as alternativas "c" e "d" estão corretas
	
	C) o processo de eletroporação.
	 
	D) sinônimo de "células transformadas"
		Explicação: Células competentes ou células transformadas são aquelas que adquiriram o plasmídeo contendo o gene alvo.
	
		9a
          Questão
	Acerto: 1,0  / 1,0
	
	(PUC-Rio, 2015): A figura abaixo representa o resultado de um teste de paternidade. Este teste baseia-se na identificação de marcadores genéticos compartilhados ou não por pai, mãe e filhos.
Considerando a figura, não é correto afirmar que:
		
	
	IV e I são irmãos gêmeos monozigóticos.
	
	III é irmão biológico de I;
	
	II não é filho deste pai;
	
	I é filho biológico do casal;
	 
	V não pode ser filho biológico deste casal;
		Explicação: V pode ser filho biológico do casal, dado que metade das suas bandas apresentam compatibilidade com a mãe e, a outra metade, compatibilidade com o pai.
	
		10a
          Questão
	Acerto: 1,0  / 1,0
	
	(UNIFESP, 2017): Por que a alteração na sequência de DNA provocada pelo CRISPR-Cas9 pode inativar um gene?
 
		
	
	Porque o DNA alterado não será transcrito;
	
	Porque o RNA transcrito tem uma meia vida menor do que o RNA original;
	
	Porque o RNA transcrito não será traduzido;
	
	CRISPR-Cas9 é incapaz de inativar um gene.
	 
	Porque o RNA transcrito a partir dessa sequência também será alterado;
		Explicação: De acordo com o dogma da biologia molecular, a alteração na sequência de DNA implicará na alteração do RNA transcrito. Consequentemente, a proteína traduzida a partir desse RNAm pode não ser funcional, ou seja, o gene pode ser inativado.
		1a
          Questão
	Acerto: 1,0  / 1,0
	
	A respeito da quantificação de DNA utilizando espectofotometria, marque a alternativa INCORRETA. 
		
	
	A quantificação de DNA por espectrofotometria é realizada por medição da quantidade de luz absorvida pelo DNA em solução no comprimento de onda de 260 nm.
	
	O benefício da utilização de análise por espectrofotometria é a capacidade de determinar a pureza da amostra usando o cálculo de razão das leituras no 260 nm/ 280 nm.
	
	Na espectrofotometria quanto maior for a absorção de luz pela amostra, maior a concentração de DNA na amostra.  
	 
	Quando a razão das leituras no comprimento 260nm/280nm estão baixas (abaixo de 1,4 aproximadamente) podemos sugerir uma boa qualidade da extração ácido nucleico (alta pureza).
	
	 A técnica é capaz de determinar as concentrações médias dos ácidos nucléicos DNA ou RNA presentes em uma amostra, bem como sua pureza.
		Explicação: Quando a razão das leituras no 260 nm/ 280 nm é abaixo de 1,4  podemos sugerir a presença de proteínas ou outros contaminantes na amostra de ácido nucleico.  
	
		2a
          Questão
	Acerto: 1,0  / 1,0
	
	(POLÍCIA CIENTÍFICA, PE, 2016) - Acerca da reação em cadeia da polimerase (PCR), assinale a opção correta:
		
	
	Os iniciadores são pequenos fragmentos sintéticos de DNA de fita dupla, usualmente com extremidade 3'-OH, e complementares à sequência do segmento de DNA de interesse;
	
	A enzima termoestável direciona o posicionamento dos precursores de DNA ― dNTP ― iniciando a síntese de novas fitas de DNA. A temperatura ideal para a polimerização varia entre 25 ºC e 45 ºC;
	
	O último passo da PCR, a polimerização, é a excisão da fita de DNA no sentido 3'→5', começando no primeiro nucleotídeo do primer iniciador incorporado;
	
	A reação de PCR é dependente da atividade de cópia de fragmentos de DNA, catalisada pela enzima DNA sintetase;
	 
	PCR é a tecnologia por meio da qual são produzidos bilhões de cópias de fragmentos de DNA. Os fragmentos do DNA amplificado pela PCR são chamados amplicons e podem ser tipificados usando-se diferentes métodos.
		Explicação: A enzima é chamada DNA polimerase. Os iniciadores são moléculas fita-simples com a extremidade 3´OH livre, complementares às bordas do fragmento de interesse. A fita de DNA molde lida no sentido 3´--> 5´ não é removida após a polimerização/extensão da fita nascente no sentido 5´ --> 3´ na última etapa de um ciclo de PCR. Na ciclagem subsequente, esse DNA hídrido será desnaturado, disponibilizando ambas as fitas como molde para novas reações de polimerização. O estabelecimento dos dNTPs a serem incorporados pela enzima termoestável se dá pela fita de DNA molde, em função da complementariedade de bases. A temperatura ideal de polimerização varia entre 50-55°C.
	
		3a
          Questão
	Acerto: 1,0  / 1,0
	
	(Unesp, 2012): A eletroforese em gel de agarose é uma técnica bastante utilizada em laboratório de biologia molecular para separação de ácidos nucleicos pelo seu tamanho. Assim, é correto afirmar que, na eletroforese em gel de agarose:
		
	
	as moléculas de DNA vão migrar sob campo elétrico para o polo negativo;
	
	as moléculas maiores de DNA vão migrar mais rápido que as menores;
	
	quanto maior a concentração da agarose no gel mais rápido as moléculas de DNA vão migrar.
	 
	as moléculas menores de DNA vão migrar mais rápido que as maiores;
	
	as moléculas de RNA não migram sob campo elétrico em agarose;
		Explicação: As moléculas de DNA, dotadas de carga negativa, migram do polo negativo (por repulsão), em direção ao polo positivo (atração). A concentração do gel irá determinar o tamanho dos poros e, consequentemente, influenciará na velocidade com que as partículas migrarão na malha. O tamanho do amplicon será inversamente proporcionalà sua velocidade de deslocamento. 
	
		4a
          Questão
	Acerto: 1,0  / 1,0
	
	(Fiocruz, 2010) - Assinale a afirmativa incorreta:
		
	
	Na metodologia de PCR em Tempo - Real, quanto maior for a quantidade de DNA alvo presente em uma dada amostra um menor número de ciclos de PCR será necessário para se obter uma quantidade de fluorescência a partir desta dada amostra acima do ruído de fundo do aparelho (Ct);
	 
	A metodologia de PCR em Tempo - Real é a única metodologia de PCR quantitativo existente;
	
	É a curva de dissociação obtida ao final da corrida de PCR em Tempo - Real que permite a verificação da especificidade da amplificação obtida;
	
	Na metodologia de PCR em Tempo - Real, a utilização de sondas marcadas com fluoróforos permite a realização de reações multiplex;
	
	A técnica de PCR em Tempo - Real é mais sensível que a técnica de PCR convencional.
		Explicação: A metodologia de PCR digital corresponde a um avanço da metodologia de PCR em tempo real, permitindo a quantificação de ácidos nucleicos com grande sensibilidade e dispensando a necessidade de curva-padrão.
	
		5a
          Questão
	Acerto: 1,0  / 1,0
	
	(Unesp, 2012): Um clone de cDNA para um gene humano que codifica uma proteína amilase foi marcado com radioatividade e utilizado em um experimento de Southern blotting. Nesse experimento, o DNA genômico de Ratos Wistar foi digerido com a enzima de restrição Eco RI e três fragmentos de DNA foram observados na análise de Southern blotting. Quando os pesquisadores realizaram os mesmos experimentos com outra linhagem de ratos, foi observada a ausência de fragmentos na análise de Western blotting, mesmo após estes experimentos terem sido repetidos três vezes. Podemos concluir corretamente que:
		
	
	esses resultados demonstram que, na linhagem de ratos Wistar, existe um sítio de restrição para a enzima Eco RI na sequência da proteína amilase e, portanto, são observados três fragmentos com tamanhos diferentes que sofreram hibridação com o clone de cDNA. Na outra linhagem de ratos, a ausência de fragmentos demonstra a falta de sítios de restrição para a enzima Eco RI na proteína amilase desses animais, indicando, portanto, que o gene da amilase está deletado por mutação no DNA desses animais.
	
	esses resultados mostram que existem três sítios de restrição para a enzima Eco RI no DNA genômico dos ratos Wistar, gerando, portanto, três fragmentos de tamanhos diferentes na análise de Southern blotting. Na outra linhagem de ratos, a presença de apenas um sítio de restrição para essa enzima (Eco RI) gera um fragmento muito grande, o qual não é capaz de se hibridizar com o clone de cDNA e, portanto, não é possível ser detectado pela análise de Southern blotting;
	
	os resultados da análise de Southern blotting com os ratos Wistar demonstram que há o reconhecimento de sítios de restrição pela enzima Eco RI na sequência de DNA do gene que codifica a proteína amilase. Entretanto, a ausência de fragmentos na outra linhagem de camundongo analisada é certamente resultado de erros metodológicos na aplicação dessas análises, pois este seria um resultado improvável;
	 
	na linhagem de ratos Wistar a região do DNA que codifica a proteína amilase contém dois sítios de restrição para a enzima Eco RI e, após a digestão com essa enzima, são gerados três fragmentos que sofreram hibridação com o clone de cDNA. Na outra linhagem de ratos, a ausência de fragmentos sugere que esses animais não têm a capacidade de produzir essa enzima amilase, pois essa sequência de DNA pode ter sido perdida ou deletada;
	
	esses resultados demonstram que o DNA dos ratos Wistar contém dois ou mais sítios de restrição para a enzima Eco RI e, após a digestão com essa enzima, são gerados três fragmentos de tamanhos diferentes. Na outra linhagem de ratos, a ausência de fragmentos fornece prova de que esses animais sofreram mutações na sequência de DNA que codifica a proteína amilase e essa sequência não é mais reconhecida pela enzima de restrição Eco RI, portanto não são observados fragmentos na análise de Southern blotting;
		Explicação: O número de sítios de restrição cliváveis pela enzima Eco RI para o gene analisado irá implicar na quantidade de fragmentos encontrados. Um sítio de restrição gera dois fragmentos, dois sítios de restrição gera três fragmentos e, assim sucessivamente. Na outra linhagem de ratos, a ausência de bandas no Western Blot sinaliza a ausência da proteína (amilase) que seria codificada pelo seu respectivo gene codificante.
	
		6a
          Questão
	Acerto: 1,0  / 1,0
	
	(Policia Cientifica, PR, 2017): A espectrometria de massa é uma técnica utilizada para o estudo de massas de átomos, moléculas ou fragmentos de moléculas, desde que estes estejam eletricamente carregados. A respeito desse assunto, julgue as afirmações.
 I. Um espectrômetro de massas determina a massa de uma molécula ou átomo medindo a razão massa/carga dos íons gerados;
II. Os íons são gerados pela indução, perda ou ganho de carga por uma espécie eletricamente neutra;
III. Uma vez formados, os íons são direcionados, por forças eletrostáticas, para dentro do analisador de massas, separados de acordo com suas razões massa/carga e finalmente detectados.
 Assinale a alternativa correta:
		
	 
	Estão corretas todas as afirmativas;
	
	Estão corretas apenas as afirmativas I e II;
	
	Estão corretas apenas as afirmativas I e III;
	
	Estão corretas apenas as afirmativas II e III;
	
	Está correta apenas a afirmativa I.
		Explicação: Todas as alternativas estão corretas.
	
		7a
          Questão
	Acerto: 1,0  / 1,0
	
	(Adaptado de CESPE, 2018): Complete as lacunas do texto a seguir, a respeito do projeto genoma (humano e outros) e às estratégias de sequenciamento disponíveis:
"No projeto genoma humano, foi empregado o método de Sanger, que adicionava ____________________ modificados, os didesoxirribonucleotídeos, para ____________________ o crescimento de um fragmento de DNA em replicação pela ____________________."
		
	
	Nucleotídeos/ estimular/ RNA polimerase;
	
	Primers/ estimular/ RNA polimerase;
	
	Nucleotídeos/ delimitar/ DNA ligase.
	 
	Nucleotídeos/ impedir/ DNA polimerase;
	
	Primers/ impedir/ DNA polimerase;
		Explicação: O método de Sanger se baseia na interrupção da cadeia nucleotídica em crescimento pela DNA polimerase, através da incorporação de nucleotídeos modificados, os quais não permitem ligações químicas.
	
		8a
          Questão
	Acerto: 1,0  / 1,0
	
	Uma das funções de um vetor (molécula de DNA, a qual pode ser um plasmídio) nos procedimentos de uma clonagem gênica é: 
		
	
	Realizar atividade similar à das enzimas de restrição.
	
	Deletar o gene que foi nele inserido dentro da célula hospedeira.
	 
	Atuar como veículo que transporta o gene para o interior de uma célula hospedeira. 
	
	Neutralizar as cargas dos nucleotídios do DNA.
	
	Atuar como tamponante da PCR.
		Explicação: O vetor apresenta este nome justamente porque ele carreia o gene da molécula alvo.
	
		9a
          Questão
	Acerto: 1,0  / 1,0
	
	(PUC-Rio, 2015): A figura abaixo representa o resultado de um teste de paternidade. Este teste baseia-se na identificação de marcadores genéticos compartilhados ou não por pai, mãe e filhos.
Considerando a figura, não é correto afirmar que:
		
	
	I é filho biológico do casal;
	
	IV e I são irmãos gêmeos monozigóticos.
	
	II não é filho deste pai;
	
	III é irmão biológico de I;
	 
	V não pode ser filho biológico deste casal;
		Explicação: V pode ser filho biológico do casal, dado que metade das suas bandas apresentam compatibilidade com a mãe e, a outra metade, compatibilidade com o pai.
	
		10a
          Questão
	Acerto: 1,0  / 1,0
	
	(UNIFESP, 2017): Por que a alteração na sequência de DNA provocada pelo CRISPR-Cas9 pode inativar um gene?
 
		
	
	CRISPR-Cas9 é incapaz de inativar um gene.
	
	Porque o DNA alterado não será transcrito;
	 
	Porque o RNA transcrito a partirdessa sequência também será alterado;
	
	Porque o RNA transcrito tem uma meia vida menor do que o RNA original;
	
	Porque o RNA transcrito não será traduzido;
		Explicação: De acordo com o dogma da biologia molecular, a alteração na sequência de DNA implicará na alteração do RNA transcrito. Consequentemente, a proteína traduzida a partir desse RNAm pode não ser funcional, ou seja, o gene pode ser inativado.
Aula 01
1. INMETRO (2010): A biotecnologia trabalha predominantemente manipulando material genético de seres vivos; para a maioria dos organismos, o material genético é a molécula de DNA. Acerca da estrutura da molécula de DNA, assinale a opção correta:
a) O DNA é composto por quatro tipos de bases nitrogenadas: adenina, citosina, timina e uracila.
b) O açúcar contido na molécula de DNA é a ribose.
c) Em uma cadeia de DNA, os nucleotídeos se ligam aos açúcares e fosfatos por pontes de hidrogênio.
d) As duas fitas que compõem a molécula de DNA são ligadas por pontes de hidrogênio entre suas bases nitrogenadas.
e) Há complementaridade entre as bases nitrogenadas adenina e timina e entre guanina e uracila.
2. SEDUC-RJ (2013): A diferença encontrada entre DNA e RNA em relação às bases nitrogenadas é:
a) DNA tem adenina e guanina como bases pirimidínicas.
b) RNA possui uracila, mas não possui timina como base purínica.
c) DNA apresenta timina e não uracila como base pirimidínica.
d) RNA possui adenina, citosina e guanina como bases purínicas.
e) DNA apresenta adenina e guanina como bases purínicas.
3. IFN-MG (2016): Hoje em dia, o trabalho com material genético tornou-se rotineiro. Para uma correta extração de ácidos nucleicos, é importante a escolha adequada de protocolos e reagentes para aquele material que se quer extrair e para que fim se destina. Em um protocolo de extração de DNA ou RNA, não se deve usar como reagente:
a) Proteases.
b) Tampão.
c) Nucleases.
d) Sais.
e) Nenhuma da opções acima.
4. FIOCRUZ (2010): Para a extração de RNA/DNA, uma das etapas mais importantes é a eliminação das proteínas durante o processo de purificação. Para a eliminação de proteínas na extração de RNA/DNA, assinale a afirmativa inadequada:
a) Digestão das amostras com a enzima proteinase K.
b) Extrações com misturas de solventes orgânicos com fenol e clorofórmio por repetidas vezes.
c) Solubilização em tampões de guanidina.
d) Precipitação salina.
e) Solubilização em tampões ácidos (pH menor que 3,5).
5 - Em relação ao protocolo de extração de ácidos nucleicos, identifique as principais etapas representadas na figura a seguir, que estão numeradas de 1 a 4 
		1
        Questão
	
	
	(IBFC, 2013, Perito Criminal/ Biologia): O DNA (ácido desoxirribonucléico) é constituído por uma longa fita dupla de nucleotídeos. O sequenciamento de DNA é um processo que determina a ordem desses nucleotídeos. A fita dupla é formada pelo pareamento das bases. Desta forma, referente ao pareamento desses nucleotídeos, não é correto afirmar:                                                         
		
	 
	A guanina se pareia com adenina.
	
	As bases dos nucleotídeos são adenina (A), timina (T), guanina (G) e citosina (C);
	
	A guanina se pareia com citosina;
	
	Adenina se pareia com timina;
	
	A sequência desse pareamento é responsável pelas características genéticas do homem e de todos os seres vivos;
	
Explicação: O pareamento nucleotídico de guanina é feito única e exclusivamente com citosina.
	
	
		2
        Questão
	
	
	Na técnica de extração de ácidos nucleicos (DNA/RNA), quais os reagentes que podem ser utilizados?
		
	
	Etanol 70% e isopropanol;
	
	Fenol e clorofórmio;
	
	Detergente
	 
	DNAse
	
	Proteinase K
	
Explicação: Todos os ítens listados podem ser utilizados para viabilizar a técnica de extração de acidos nucleicos.
	
	
	 
		3
        Questão
	
	
	A respeito da quantificação de DNA utilizando espectofotometria, marque a alternativa INCORRETA. 
		
	 
	Quando a razão das leituras no comprimento 260nm/280nm estão baixas (abaixo de 1,4 aproximadamente) podemos sugerir uma boa qualidade da extração ácido nucleico (alta pureza).
	
	O benefício da utilização de análise por espectrofotometria é a capacidade de determinar a pureza da amostra usando o cálculo de razão das leituras no 260 nm/ 280 nm.
	
	Na espectrofotometria quanto maior for a absorção de luz pela amostra, maior a concentração de DNA na amostra.  
	
	A quantificação de DNA por espectrofotometria é realizada por medição da quantidade de luz absorvida pelo DNA em solução no comprimento de onda de 260 nm.
	
	 A técnica é capaz de determinar as concentrações médias dos ácidos nucléicos DNA ou RNA presentes em uma amostra, bem como sua pureza.
	
Explicação: Quando a razão das leituras no 260 nm/ 280 nm é abaixo de 1,4  podemos sugerir a presença de proteínas ou outros contaminantes na amostra de ácido nucleico.  
	
	
	 
		4
        Questão
	
	
	Identifique as principais etapas do protocolo de extração de ácidos nucleicos:
		
	 
	Lise celular, Purificação, Precipitação e Hidratação;
	
	Precipitação, lise celular, purificação e Hidratação.
	
	Hidratação, Purificação, Lise celular e Precipitação.
	
	Hidratação, Lise celular, Purificação e Precipitação;
	
	Lise celular, Hidratação, Precipitação e Purificação;
	
Explicação: A extração de ácidos nucleicos envolve etapas sequenciais de ruptura celular e exposição do ácido nucleico, seguida da purificação do material de interesse com a remoção de contaminantes. Em seguida, realiza-se a precipitação do alvo e consequente hidratação do mesmo.
	
	
	 
		5
        Questão
	
	
	(SESAU, 2010): O RNA difere quimicamente do DNA por apresentar:                                         
		
	
	ribonucleotídeos e possuir as bases timina e uracila;
	
	desoxirribonucleotídeos e possuir a base uracila;
	
	ribonucleotídeos e possuir a base timina.
	
	desoxirribonucleotídeos e por possuir a base timina;
	 
	ribonucleotídeos e por possuir a base uracila;
	
Explicação: Desoxirribonucleotídeos e a base nitrogenada timina são encontrados apenas no DNA.
	
	
	 
		6
        Questão
	
	
	São exemplos de ácidos nucleicos:
		
	 
	DNA e RNA;
	
	Timina e uracila.
	
	Adenina e guanina;
	
	Proteínas e lipídios;
	
	Monossacarídeos e dissacarídeos;
	
Explicação: As demais alternativas fornecem exemplos de outras macromoléculas ou bases nitrogenadas.
	
	
	 
		7
        Questão
	
	
	O processo de extração do DNA tem como objetivo isolar os ácidos nucleico dos demais componentes celulares. Baseado neste processo marque a alternativa incorreta.
		
	
	Durante a extração do DNA é necessária fazer a remoção de outros componentes como proteínas, lipídeos e RNA.
	
	Na etapa de purificação do DNA são utilizadas substâncias que fazem a remoção de carboidratos e proteínas presente nas amostras, isolando apenas o DNA
 
	 
	Substâncias com ação de precipitação são utilizadas para remoção dos lipídios da amostra
	
	A precipitação final do DNA pode ser realizada com etanol ou álcool isopropílico.
	
	A primeira etapa da extração é a lise de membranas onde são utilizados substância com ação de um detergente.
	
Explicação:   Substâncias com ação de DETERGENTES são utilizadas para remoção dos lipídios da amostra.
Aula 02
1 - Polícia científica PE (2016): Assinale a opção em que são apresentadas, respectivamente, a enzima que auxilia na quebra das ligações de hidrogênio e a enzima que retira a tensão da dupla fita de DNA no processo de replicação de DNA:
a) DNA enovelase e DNA liase.
b) Tripsina e pepsina.
c) RNA polimerase e DNA isomerase.
d) DNA metilase e topoisomerase.
e) DNA helicase e topoisomerase.
2 - FIOCRUZ (2010): Para a realização da técnica de PCR não é necessário:
a) Enzima DNA polimerase.
b) Iniciadores.
c) Os quatro nucleosídeos trifosfatados.
d) Magnésio.
e) Anticorpos fusionados com peroxidase.
3 - FIOCRUZ (2010): A técnica de RT-PCR utiliza como enzima de reação:
a) Uma RNA polimeraseII humana.
b) Uma DNA polimerase I de E. coli.
c) Uma RNA polimerase III de levedura.
d) Uma protease viral.
e) Uma transcriptase reversa viral.
4 - IF Farroupilha, RS (2016): Analise as afirmativas a seguir, sobre a reação da polimerase e marque (V) para verdadeiro ou (F) para falso:
a) A PCR amplifica regiões específicas do DNA. 
Verdadeiro / Falso
b) A PCR explora certas características do processo de replicação do DNA.
Verdadeiro / Falso
c) O molde de DNA de fita simples, utilizado na PCR, pode ser obtido pelo aquecimento de uma fita dupla de DNA a temperaturas próximas à ebulição.
Verdadeiro / Falso
d) O ponto inicial, para cada síntese de DNA, pode ser determinado pelo fornecimento de um oligonucleotídeo iniciador que se liga ao molde naquele ponto.
Verdadeiro / Falso
e) Na PCR, a DNA polimerase pode ser direcionada para sintetizar uma região específica do DNA.
Verdadeiro / Falso
5 - FICORUZ (2010): Entre as sentenças a seguir, selecione aquela que descreve uma etapa não presente no procedimento de uma reação de PCR padrão:
a) Resfriamento da amostra a 16ºC por 30 segundos a cada ciclo.
b) Anelamento dos iniciadores no DNA alvo a 55ºC por um minuto a cada ciclo.
c) Desnaturação da amostra a 95ºC por 40 segundos a cada ciclo.
d) Alongamento/Polimerização a 72ºC por um minuto a cada ciclo.
e) Desnaturação inicial da amostra a 95ºC por cinco minutos.
		1
        Questão
	
	
	(Fiocruz, 2006): São elementos necessários na técnica de amplificação de DNA através da reação da polimerase em cadeia (PCR):
		
	 
	DNA molde, Taq polimerase, primers, dNTPs e termociclador;
	
	DNA molde, Taq polimerase, primers, dNTPs, etanol e termociclador;
	
	DNA molde, DNA polimerase, primers, dNTPs, endonucleases e termociclador;
	
	DNA molde, Taq polimerase, primers, dNTPs, endonucleases e termociclador;
	
	DNA molde, Taq polimerase, primers, dNTPs e endonucleases;
	
Explicação: As endonucleases são enzimas de restrição utilizadas nas técnicas de clonagem molecular. O etanol é utilizado no processo de extração de ácido nucleico, antes da técnica de PCR. DNA polimerase ou Taq DNA polimerase são a mesma enzima.
	
	
	 
		2
        Questão
	
	
	A técnica de PCR (reação em cadeia da DNA polimerase) é utilizada com o objetivo de se obter várias cópias (amplificação) de um fragmento específico de DNA. Entretanto, um dos problemas que pode ocorrer durante a PCR é a amplificação inesperada de fragmento(s) inespecífico(s). Dados os fatores que influenciam nesse tipo de problema, I. Sequência de nucleotídeos dos primers. II. Temperatura de anelamento dos primers. III. Concentração do DNA template. IV. Concentração dos primers.
Verifica-se que está(ão) correto(s):  
 
		
	
	D) I, II e IV, apenas.
	
	A) I, apenas.
	 
	E) I, II, III e IV.
	
	C) III e IV, apenas.
	
	B) II e III, apenas.
	
Explicação: Todos os fatores influenciam.
	
	
		3
        Questão
	
	
	Dentre as sentenças abaixo, selecione aquela que descreve uma etapa que não está presente no procedimento de uma reação de PCR padrão.
		
	
	Anelamento dos iniciadores (primers) no DNA alvo a 55 °C por um minuto a cada ciclo.
 
	
	Desnaturação da amostra a 94 - 96°C por 40 segundos a cada ciclo.
 
	
	Anelamento com faixa de temperatura entre 55-60ºC de acordo com o primer utilizado, por um minuto a cada ciclo.
	 
	Resfriamento da amostra a 16 °C por 30 segundos a cada ciclo.
 
	
	Alongamento/Polimerização a 72 °C por um minuto a cada ciclo.
	
Explicação: Não há etapa de resfriamente no ciclo das PCR. Existem apenas desnaturação, anelamento e extensão. 
	
	
	 
		4
        Questão
	
	
	(Fiocruz, 2010): A retrotranscrição de RNA genômico viral em moléculas de DNA complementar para a sua detecção por técnica de PCR é denominada:
		
	 
	RT-PCR;
	
	sequenciamento.
	
	Imunoperoxidase;
	
	microscopia ótica;
	
	PCR em tempo real;
	
Explicação: Do inglês: Reverse transcription polymerase chain reaction.
	
	
	
		5
        Questão
	
	
	(Fiocruz, 2010): Sobre a utilização da técnica de PCR com a finalidade de diagnóstico molecular, analise as afirmativas a seguir.
I. Uma vez que na reação de PCR se utiliza uma DNA Polimerase dependente de DNA, somente os vírus cujo genoma é constituído por DNA podem ser detectados pela técnica de PCR.
II. É possível detectar microorganismos diferentes em uma mesma reação de PCR, desde que se utilize na reação pares de iniciadores específicos para cada microorganismo que se queira detectar.
III. A utilização da técnica de PCR para diagnóstico molecular terá sempre e somente caráter qualitativo.
Assinale:
		
	
	se somente a afirmativa III estiver correta;
	
	se todas as afirmativas estiverem corretas.
	
	se somente as afirmativas I e II estiverem corretas;
	 
	se somente a afirmativa II estiver correta;
	
	se somente a afirmativa I estiver correta;
	
Explicação: É possível detectarmos patógenos cujo genoma seja RNA através de RT-PCR, ou seja, transcrição reversa acoplada à PCR. Também podemos quantificar o nosso alvo através da PCR em tempo real ou, indiretamente, mensurar aproximadamente a sua quantidade através de gel de agarose, reagente Low mass e sistema de coloração adequado para análise dos amplicons.
	
	
	 
		6
        Questão
	
	
	(POLÍCIA CIENTÍFICA, PE, 2016) - Acerca da reação em cadeia da polimerase (PCR), assinale a opção correta:
		
	
	A enzima termoestável direciona o posicionamento dos precursores de DNA ― dNTP ― iniciando a síntese de novas fitas de DNA. A temperatura ideal para a polimerização varia entre 25 ºC e 45 ºC;
	
	O último passo da PCR, a polimerização, é a excisão da fita de DNA no sentido 3'→5', começando no primeiro nucleotídeo do primer iniciador incorporado;
	
	Os iniciadores são pequenos fragmentos sintéticos de DNA de fita dupla, usualmente com extremidade 3'-OH, e complementares à sequência do segmento de DNA de interesse;
	
	A reação de PCR é dependente da atividade de cópia de fragmentos de DNA, catalisada pela enzima DNA sintetase;
	 
	PCR é a tecnologia por meio da qual são produzidos bilhões de cópias de fragmentos de DNA. Os fragmentos do DNA amplificado pela PCR são chamados amplicons e podem ser tipificados usando-se diferentes métodos.
	
Explicação: A enzima é chamada DNA polimerase. Os iniciadores são moléculas fita-simples com a extremidade 3´OH livre, complementares às bordas do fragmento de interesse. A fita de DNA molde lida no sentido 3´--> 5´ não é removida após a polimerização/extensão da fita nascente no sentido 5´ --> 3´ na última etapa de um ciclo de PCR. Na ciclagem subsequente, esse DNA hídrido será desnaturado, disponibilizando ambas as fitas como molde para novas reações de polimerização. O estabelecimento dos dNTPs a serem incorporados pela enzima termoestável se dá pela fita de DNA molde, em função da complementariedade de bases. A temperatura ideal de polimerização varia entre 50-55°C.
	
	
	 
		7
        Questão
	
	
	A reação em cadeia da polimerase (PCR) tem como base a:
 
		
	
	identificação de proteínas.
	
	degradação do DNA.
	
	amplificação de moléculas de RNA.
 
	
	termorreação para hidratação do DNA.
	 
	amplificação de moléculas de DNA.
	
Explicação: PCR é uma técnica de amplificação do DNA que permite a detecção de moléculas e sequências de nucleotideo alvo
Aula 03
1. UFES (2011): O espectrofotômetro é um instrumento que permite:
a) Avaliar a turbidez de amostras de água.
b) Analisar o espectro de radiações em soluções orgânicas.
c) Analisar o espectro de radiações em soluções básicas.
d) Analisar o espectro das radiações de soluções ácidas.
e) Comparar a radiação absorvida ou transmitida por uma solução.
2. HCFMUSP (2015): A eletroforese em gel de agarose separa as moléculas de DNA em função da sua forma e compactação. Essa técnica é rápida, sensível e precisa. Moléculas de DNA de um mesmo tamanho migram com diferentes velocidades se estiverem na forma circular relaxada, linear ou supertorcida. O DNA pode ser visualizadona presença de compostos intercalantes como:
a) Azul de bromofenol.
b) Brometo de etídio.
c) Corante leishman.
d) Corante fucsina.
e) Corante azul cresil brilhante.
3. UFVJM-MG (2017): As técnicas de eletroforese são usadas para a separação e análise de amostras de biomoléculas. Essas técnicas diferenciam trechos de amostras que migram por um campo elétrico em um gel. Essas técnicas são utilizadas para as seguintes biomoléculas:
a) Proteínas e lipídeos.
b) Lipídeos e carboidratos.
c) Carboidratos e ácidos nucleicos.
d) Ácidos nucleicos e proteínas.
e) Nenhuma das respostas acima.
4. IFB (2016): A técnica de eletroforese permite separar fragmentos de proteínas e ácidos nucleicos por tamanho e carga elétrica. Com base na figura a seguir, que representa uma corrida de eletroforese de DNA, marque a alternativa correta:
a) Os fragmentos maiores de DNA migram mais rápido do que os fragmentos menores, devido ao seu alto peso molecular.
b) A utilização do Marcador Molecular é indicada para auxiliar na estimativa da concentração dos fragmentos de DNA que aparecerem no gel.
c) A coloração é feita por um corante intercalante de DNA que tem afinidade com as ligações fosfodiéster da referida molécula.
d) A migração das amostras ocorre no sentido do polo negativo (–) para o polo positivo (+), por causa da carga negativa do fosfato localizado no nucleotídeo de DNA.
e) Os fragmentos menores de DNA migram mais rápido do que os fragmentos maiores, pois se aderem mais facilmente aos íons do tampão utilizado na eletroforese.
5. IF Farroupilha – RS (2016, Adaptada): A análise de DNA engloba uma série de procedimentos, sendo a eletroforese uma das técnicas utilizadas para separação dos seus fragmentos. Analise as afirmativas a seguir:
 1 -Bandas podem ser observadas na luz ultravioleta.
 2 -Amplificação do ácido nucleico através de PCR.
 3 -DNA é extraído e purificado, eliminando proteínas e RNA.
 4 -Padrões de tamanho conhecido são inseridos para comparação.
 5 -Fragmentos de DNA, com carga negativa, migram para o polo positivo.
 6 -Amostras são colocadas em um gel no qual se aplica um campo elétrico.
A sequência da realização da etapa de eletroforese é:
a) 6, 2, 1, 4, 5, 3.
b) 6, 4, 3, 2, 5, 1.
c) 5, 1, 4, 2, 3, 6.
d) 5, 2, 3, 1, 4, 6.
e) 1, 2, 3, 5, 4, 6.
		1
        Questão
	
	
	(Unesp, 2012): A eletroforese em gel de agarose é uma técnica bastante utilizada em laboratório de biologia molecular para separação de ácidos nucleicos pelo seu tamanho. Assim, é correto afirmar que, na eletroforese em gel de agarose:
		
	
	as moléculas de DNA vão migrar sob campo elétrico para o polo negativo;
	
	as moléculas maiores de DNA vão migrar mais rápido que as menores;
	
	as moléculas de RNA não migram sob campo elétrico em agarose;
	
	quanto maior a concentração da agarose no gel mais rápido as moléculas de DNA vão migrar.
	 
	as moléculas menores de DNA vão migrar mais rápido que as maiores;
	
Explicação: As moléculas de DNA, dotadas de carga negativa, migram do polo negativo (por repulsão), em direção ao polo positivo (atração). A concentração do gel irá determinar o tamanho dos poros e, consequentemente, influenciará na velocidade com que as partículas migrarão na malha. O tamanho do amplicon será inversamente proporcional à sua velocidade de deslocamento. 
	
	
	 
		2
        Questão
	
	
	(Adaptada de UFMG, 2013) - Em relação à espectrofotometria, é incorreto afirmar que:
		
	
	a luz visível para o olho humano é a região do espectro eletromagnético com comprimento de onda entre 390 e 780 nm;
	
	a espectrofotometria é a medida da intensidade da luz em comprimentos de onda selecionados;
	
	a energia é transmitida por ondas eletromagnéticas que são caracterizadas pela frequência e comprimento de onda;
	 
	a absorvância é a capacidade de uma substância em absorver ou transmitir radiação;
	
	a espectrofotometria permite estimar a concentração de soluções.
	
Explicação: Absorbância e transmitância são conceitos não sinônimos e inversamente proporcionais; isto é, quanto maior a absorbância, menor a transmitância, e vice-versa.
	
	
	 
		3
        Questão
	
	
	(SESAU, RO, 2017) - Técnica baseada na separação de partículas em um determinado gel de acordo com sua massa e carga. Pode ser utilizada para separação de diversas moléculas orgânicas, como lipoproteínas, proteínas, RNA e DNA. A técnica de separação descrita no texto é denominada:
		
	
	filtração;
	 
	eletroforese;
	
	floculação;
	
	cromatografia.
	
	centrifugação;
	
Explicação: As demais técnicas citadas não envolvem a utilização de campo elétrico para a separação das partículas em função de seus respectivos pesos moleculares.
	
	
	 
		4
        Questão
	
	
	(Polícia Científica, PE, 2016): A respeito de eletroforese, uma metodologia amplamente empregada para separação, isolamento, análise e manipulação dos ácidos nucleicos, assinale a opção correta:
		
	
	A eletroforese consiste na migração das partículas de uma solução coloidal sob a influência de um campo magnético onde a polaridade negativa atrai as moléculas;
	 
	A quantificação de DNA em gel de agarose é uma técnica de menor precisão, comparada a eletroforese em acrilamida, sendo utilizada como instrumento para averiguação de êxito na etapa de extração;
	
	Os ácidos nucleicos possuem uma carga geral total positiva, devido aos seus grupamentos fosfato do arcabouço e, consequentemente, quando aplicados em um gel de agarose ou poliacrilamida, migram em direção ao ânodo.
	
	A identificação dos fragmentos amplificados de DNA não pode ser realizada em gel de poliacrilamida;
	
	A eletroforese em gel de agarose é usada para separar proteínas de tamanhos diferentes, que podem ser detectadas por fluorescência;
	
Explicação: A eletroforese em gel de agarose destina-se apenas a ácidos nucleicos, enquanto a eletroforese em gel de poliacrilamida pode ser empregada para ácidos nucleicos e proteínas. Na técnica de eletroforese, graças à aplicação de campo elétrico, as partículas são induzidas a migrar no polímero. O movimento das partículas é determinado em função da repulsão do pólo negativo uma vez que, em função dos seus respectivos grupamentos fosfato, o DNA possui cargas semelhante.
	
	
	 
		5
        Questão
	
	
	(Prefeitura de Barra Mansa, RJ, 2010) - Eletroforese em gel é uma técnica de separação de moléculas que envolve a migração de partículas em um determinado gel durante a aplicação de uma diferença de potencial. Em relação à eletroforese em gel é correto afirmar que:
		
	
	as moléculas são separadas de acordo com o seu tamanho, as de menor massa situam-se na porção superior do gel e as de maior massa na porção inferior;
	
	Na migração do DNA em um gel de agarose, sendo o DNA negativamente carregado, ele é atraído pelo eletrodo negativo;
	
	após a eletroforese em gel, os fragmentos de DNA normalmente são corados com brometo de etídeo, que possui afinidade pelo DNA e fluoresce (torna-se visível) vivamente em contato com a luz infra-vermelha.
	 
	as moléculas são separadas de acordo com o seu tamanho, as de maior massa situam-se na porção superior do gel e as de menor massa na região inferior;
	
	na migração do DNA em um gel de agarose, sendo o DNA positivamente carregado, ele é atraído pelo eletrodo negativo;
	
Explicação: O DNA possui carga negativa, o que faz com que a migração ocorra do polo negativo (repulsão) em direção ao polo positivo (atração). A facilidade com que isso ocorre depende do tamanho das partículas. As maiores ficam atrasadas na trama do polímero, e são retardadas na migração, fazendo com que ocupem posições superiores no gel. Para a revelação do resultado, é necessário excitar o brometo de etídeo com luz UV.
	
	
	 
		6
        Questão
	
	
	(FIOCRUZ, 2010) - Analise as afirmativas a seguir:
I. A eletroforese em gel é uma técnica de separação de moléculas que envolve a migração de partículas em um determinado gel durante a aplicação de uma diferença de potencial.
II.A eletroforese em gel é utilizada para separar proteínas e moléculas de DNA e RNA.
III. Existem vários tipos de eletroforese em gel para analisar proteínas durante o processo de purificação. Entre elas, estão a eletroforese em gel de poliacrilamida contendo dodecil de sódio sulfatado (SDS-PAGE), a eletroforese em gel de poliacrilamida não desnaturante (Native PAGE) e o gel em duas dimensões.
Assinale:
		
	
	se apenas a afirmativa III estiver correta;
	
	se apenas as afirmativas I e III estiverem corretas.
	
	se apenas a afirmativa I estiver correta;
	
	se apenas a afirmativa II estiver correta;
	 
	se apenas as afirmativas I e II estiverem corretas;
	
Explicação: A eletroforese bidimensional não é utilizada para avaliação do grau de pureza, mas sim para a separação simultânea de um conjunto de proteínas presentes em uma amostra, através da diferença entre seus pesos moleculares e pontos isoelétricos.
	
	
	 
		7
        Questão
	
	
	(Adaptada de IF, RN, 2017) - Entre as técnicas usadas na biotecnologia:
		
	 
	a eletroforese é usada para separar fragmentos de DNA de tamanhos diferentes a partir de corrente elétrica;
	
	na reação em cadeia da polimerase (PCR), utiliza-se a DNA helicase para separar as fitas de DNA a 94° C;
	
	na técnica do DNA recombinante, utilizam-se as endonucleases e a Taq polimerase para unir as duas fitas de DNA;
	
	Nenhuma das alternativas acima.
	
	a biobalística usa microprojéteis revestidos com DNA para identificar trechos que se repetem no DNA;
	
Explicação: Na técnica de PCR, promovemos a desnaturação das fitas de DNA através de processo térmico, e não enzimático. Na técnica de DNA recombinante, além de endonucleases, utilizamos as DNA ligases para promover o restabelecimento das ligações químicas. A biobalística corresponde a uma estratégia de transferência gênica/transformação de organismos.
Aula 04
1. FIOCRUZ (2010): A retrotranscrição de RNA genômico viral em moléculas de DNA complementar para a sua detecção por técnica de PCR é denominada:
a) PCR em tempo real.
b) RT-PCR.
c) Imunoperoxidase.
d) Microscopia ótica.
e) Sequenciamento.
2. FIOCRUZ (2010): Entre as técnicas moleculares para diagnóstico viral, as listadas a seguir fazem uso de gel de agarose ou poliacrilamida para revelar a presença de material genético, exceto:
a) PCR.
b) RFLP.
c) PCR em Tempo Real.
d) Northern blot.
e) Southern blot.
3. SEDUCE-GO (2010): Durante a intérfase, o DNA pode atuar de duas maneiras. Observe o esquema a seguir:
Os processos representados pelos números 1, 2 e 3 são, respectivamente:
a) Conjugação, tradução e transcrição.
b) Transcrição, replicação e duplicação.
c) Duplicação, conjugação e transformação.
d) Replicação, transcrição e tradução.
e) Tradução, transcrição e replicação.
4. PC-RJ (2013): A técnica de PCR (reação em cadeia de polimerase) em tempo real revolucionou o processo de quantificação de fragmentos de DNA. Ela realiza a quantificação desses ácidos nucleicos de maneira precisa e com maior reprodutividade. Assinale o fator que permite essa quantificação:
a) O sequenciamento de DNA.
b) A eletroforese.
c) A fluorescência.
d) Os marcadores STRs.
e) O termociclador.
5. Fundação Saúde RJ (2014): Avaliando uma reação de PCR quantitativo, o parâmetro conhecido como CT significa:
a) Limiar de detecção.
b) Centro de temperatura.
c) Ciclo de transição.
d) Ciclo que atinge o limiar de detecção.
e) Ciclo de temperatura.
		1
        Questão
	
	
	A PCR em Tempo Real também denominada qPCR, foi descrita pela primeira vez em 1993 por Higuchi e seus colaboradores. Sobre esse tema, marque V para as afirmativas verdadeiras e F para as falsas.
( ) Ela é uma variante da reação de PCR convencional, pois a amplificação e a detecção ocorrem simultaneamente, com possibilidade de gerar resultados quantitativos com maior precisão.
( ) A quantificação na PCR em Tempo Real é mensurada pela quantidade de produto amplificado durante cada ciclo (através da fluorescência emitida). Essa metodologia utiliza um equipamento com sistema de monitoramento da emissão de fluorescência.
( ) Na PCR convencional, é necessária a preparação de gel de agarose para visualização; na PCR em tempo real não ocorre manipulação pós-PCR.
Assinale a alternativa correta.
		
	
	F, F, F
	
	F, F, V
	 
	V, V, V
	
	F, V, F
	
	V, F, F
	
Explicação: V, V, V
	
	
	 
		2
        Questão
	
	
	PCR em tempo real é uma inovação tecnológica derivada da PCR que tem se difundido rapidamente nos laboratórios de biotecnologia. Dadas as afirmativas sobre a PCR em tempo real,
I. Permite quantificar os fragmentos de DNA amplificados durante a fase exponencial da reação em cadeia da polimerase.
II. Apresenta um detector de fluorescência para o monitoramento da reação ao longo dos ciclos de amplificação.
III. Permite a investigação de alterações genéticas e dos níveis de expressão dos genes.
IV. Utiliza uma análise eletroforética para a detecção dos produtos da reação.
Verifica-se que está(ão) correta(s):
 
		
	
	A) II, apenas.
	
	E) I, II, III e IV.
	 
	D) I, II e III, apenas.
	
	B) I e IV, apenas.
	
	C) III e IV, apenas.
	
Explicação: A qPCR  faz a quantificação do material genético em tempo real, não necessitando de processamento eletroforético pós-PCR 
	
	
	 
		3
        Questão
	
	
	(INCA, 2014): Um oligonucleotídeo de DNA curto utilizado para amplificação por PCR é adequadamente chamado de:
		
	
	vetor.
	 
	primer;
	
	polimerase;
	
	sonda;
	
	inserto;
	
Explicação: As sondas são utilizadas para a detecção de ácidos nucleicos. Insertos correspondem a pequenos fragmentos de DNA os quais são clonados em plasmídeos ou vetores, utilizados para a transferência de material genético. A polimerase é a enzima responsável pela amplificação do ácido nucleico.
	
	
	 
		4
        Questão
	
	
	(INCA, 2014): Qual afirmação descreve com precisão o processo de PCR?
		
	
	A reação de PCR requer um tipo especial de enzima de restrição;
	
	Os produtos de PCR são inibidores da reação em cadeia da polimerase;
	
	A reação de PCR amplifica geometricamente um fragmento de DNA.
	
	O peso molecular do fragmento de DNA não é diagnóstico de especificidade de um PCR;
	 
	É necessário um par de primers para a amplificação de um fragmento de DNA;
	
Explicação: Os produtos de uma etapa da reação de PCR servem como substrato para as etapas subsequentes. Não é necessário utilizar enzima de restrição para essa metodologia. O uso de pesos moleculares auxilia na deteção de amplificações inespecíficas. A amplificação é considerada exponencial.
	
	
	 
		5
        Questão
	
	
	(PC, DF, 2012) - O propósito da PCR é fazer um número imenso de cópias de um determinado fragmento gênico, cujo tamanho pode variar de poucos pares de base até milhares de pares de base. A PCR é constituída de três ciclos. Assinale a alternativa que apresenta esses ciclos:
		
	
	fase de desnaturação, fase de fixação e fase de hibridização ou anelamento;
	 
	fase de desnaturação, fase de hibridização ou anelamento e fase de extensão;
	
	fase de desnaturação, fase de captação e fase de extensão.
	
	fase de desnaturação, fase de hibridização e fase de fixação ou anelamento;
	
	fase de desnaturação, fase de extensão ou anelamento e fase de fixação;
	
Explicação: As fases de fixação e captação não fazem parte da reação de PCR. Além disso, só é possível a fase de extensão se, na fase imediatamente anterior, houver a hibridização ou anelamento dors primers com a fita molde.
	
	
	
		6
        Questão
	
	
	(UFES, 2015): Considere as seguintes afirmações sobre a reação em cadeia da DNA polimerase (PCR):
 
I. Segmentos específicos de DNA podem ser facilmente amplificados a milhões de cópias.
II. A PCR pode ser utilizada em medicina forense e diagnósticos clínicos. Produtos da reação de PCR podem ser usados em clonagem.
III. A PCR utiliza uma DNA-polimerase termoestável, porque, para cada etapa de amplificação, o DNA de fita dupla deve ser desnaturado pelocalor.
 É correto o que se afirma em:
		
	 
	I, II e III.
	
	II apenas;
	
	II e III apenas;
	
	I e II apenas;
	
	I apenas;
	
Explicação: Todas as afirmativas estão corretas.
	
	
	 
		7
        Questão
	
	
	(Fiocruz, 2010) - Assinale a afirmativa incorreta:
		
	
	É a curva de dissociação obtida ao final da corrida de PCR em Tempo - Real que permite a verificação da especificidade da amplificação obtida;
	
	Na metodologia de PCR em Tempo - Real, quanto maior for a quantidade de DNA alvo presente em uma dada amostra um menor número de ciclos de PCR será necessário para se obter uma quantidade de fluorescência a partir desta dada amostra acima do ruído de fundo do aparelho (Ct);
	 
	A metodologia de PCR em Tempo - Real é a única metodologia de PCR quantitativo existente;
	
	Na metodologia de PCR em Tempo - Real, a utilização de sondas marcadas com fluoróforos permite a realização de reações multiplex;
	
	A técnica de PCR em Tempo - Real é mais sensível que a técnica de PCR convencional.
	
Explicação: A metodologia de PCR digital corresponde a um avanço da metodologia de PCR em tempo real, permitindo a quantificação de ácidos nucleicos com grande sensibilidade e dispensando a necessidade de curva-padrão.
Aula 05
1. UFPI (2013) — A eletroforese em gel é uma das principais ferramentas de trabalho no campo da biologia molecular e tem sido utilizada no estudo de proteínas, DNA e RNA. Marque a opção que apresente técnicas de biologia molecular que analisam, respectivamente, proteínas, DNA e RNA:
a) Western blot, Southern blot e Northern blot.
b) Southern blot, Northern blot e Western blot.
c) Northern blot, Southern blot e Western blot.
d) Western blot, Northern blot e Southern blot.
e) Southern blot, Western blot e Northern blot.
2. UFTM (2016): A eletroforese é uma técnica muito utilizada nos laboratórios de bioquímica, com a finalidade de acompanhar a purificação, a expressão e o isolamento de proteínas para análise por espectrometria de massa ou determinar a massa molecular (Mr) da proteína. Analise as afirmações a seguir e escolha a alternativa correta:
a) A separação eletroforética de proteínas é comumente realizada empregando-se géis de agarose, os quais possuem alta capacidade de resolução.
b) Eletroforese descreve a migração de uma partícula carregada sob influência de um campo elétrico.
c) A eletroforese desnaturante separa as proteínas com relação à sua carga e forma.
d) Em um gel SDS-PAGE, as proteínas com maior massa molecular (Mr) são encontradas na parte inferior do gel.
e) Todas as alternativas estão certas.
3. PC-ES (2011) — A tecnologia do DNA recombinante abrange várias técnicas passíveis de serem utilizadas na identificação humana. Com relação a essas técnicas, responda se a sentença está certa ou errada.
“A técnica de Western blot consiste na análise de sequências de RNA cortados por enzimas de restrição.”
a) Certo
b) Errado
4. UFES (2016) — Uma mutação que gera um códon de parada prematuro na sequência de DNA de um gene causará nos géis de Southern blot, Northern blot e Western blot, respectivamente, os seguintes resultados:
a) Banda mais alta, banda mais baixa, banda não varia.
b) Banda não varia, banda mais alta, banda mais alta.
c) Banda não varia, banda não varia, banda mais baixa.
d) Banda mais baixa, banda mais baixa, banda mais alta.
e) Banda mais baixa, banda não varia, banda não varia.
5. Adaptada de UFBA (2013) – Com relação às técnicas de blotting, responda se a sentença está certa ou errada:
“O bloqueio dos sítios inespecíficos é uma etapa importante e deve ser realizada antes da incubação do anticorpo primário.”
a) Certo
b) Errado
		1
        Questão
	
	
	(Unesp, 2012): Um clone de cDNA para um gene humano que codifica uma proteína amilase foi marcado com radioatividade e utilizado em um experimento de Southern blotting. Nesse experimento, o DNA genômico de Ratos Wistar foi digerido com a enzima de restrição Eco RI e três fragmentos de DNA foram observados na análise de Southern blotting. Quando os pesquisadores realizaram os mesmos experimentos com outra linhagem de ratos, foi observada a ausência de fragmentos na análise de Western blotting, mesmo após estes experimentos terem sido repetidos três vezes. Podemos concluir corretamente que:
		
	
	os resultados da análise de Southern blotting com os ratos Wistar demonstram que há o reconhecimento de sítios de restrição pela enzima Eco RI na sequência de DNA do gene que codifica a proteína amilase. Entretanto, a ausência de fragmentos na outra linhagem de camundongo analisada é certamente resultado de erros metodológicos na aplicação dessas análises, pois este seria um resultado improvável;
	
	esses resultados demonstram que, na linhagem de ratos Wistar, existe um sítio de restrição para a enzima Eco RI na sequência da proteína amilase e, portanto, são observados três fragmentos com tamanhos diferentes que sofreram hibridação com o clone de cDNA. Na outra linhagem de ratos, a ausência de fragmentos demonstra a falta de sítios de restrição para a enzima Eco RI na proteína amilase desses animais, indicando, portanto, que o gene da amilase está deletado por mutação no DNA desses animais.
	
	esses resultados mostram que existem três sítios de restrição para a enzima Eco RI no DNA genômico dos ratos Wistar, gerando, portanto, três fragmentos de tamanhos diferentes na análise de Southern blotting. Na outra linhagem de ratos, a presença de apenas um sítio de restrição para essa enzima (Eco RI) gera um fragmento muito grande, o qual não é capaz de se hibridizar com o clone de cDNA e, portanto, não é possível ser detectado pela análise de Southern blotting;
	
	esses resultados demonstram que o DNA dos ratos Wistar contém dois ou mais sítios de restrição para a enzima Eco RI e, após a digestão com essa enzima, são gerados três fragmentos de tamanhos diferentes. Na outra linhagem de ratos, a ausência de fragmentos fornece prova de que esses animais sofreram mutações na sequência de DNA que codifica a proteína amilase e essa sequência não é mais reconhecida pela enzima de restrição Eco RI, portanto não são observados fragmentos na análise de Southern blotting;
	 
	na linhagem de ratos Wistar a região do DNA que codifica a proteína amilase contém dois sítios de restrição para a enzima Eco RI e, após a digestão com essa enzima, são gerados três fragmentos que sofreram hibridação com o clone de cDNA. Na outra linhagem de ratos, a ausência de fragmentos sugere que esses animais não têm a capacidade de produzir essa enzima amilase, pois essa sequência de DNA pode ter sido perdida ou deletada;
	
Explicação: O número de sítios de restrição cliváveis pela enzima Eco RI para o gene analisado irá implicar na quantidade de fragmentos encontrados. Um sítio de restrição gera dois fragmentos, dois sítios de restrição gera três fragmentos e, assim sucessivamente. Na outra linhagem de ratos, a ausência de bandas no Western Blot sinaliza a ausência da proteína (amilase) que seria codificada pelo seu respectivo gene codificante.
	
	
	 
		2
        Questão
	
	
	A eletroforese em gel é uma das principais ferramentas de trabalho no campo da biologia molecular e tem sido utilizada no estudo de proteínas, DNA e RNA. Marque a opção que apresente técnicas de biologia molecular que analisam, respectivamente, proteínas, DNA e RNA.
		
	
	Western blot, Northern blot e Southern blot.
	
	Southern blot, Western blot e Northern blot.
	
	Southern blot, Northern blot e Western blot.
	 
	​​​​​​Western blot, Southern blot e Northern blot.
	
	​​​​​ Northern blot, Southern blot e Western blot.
	
Explicação: Western blot - analisa proteína. Southern blot- analisa DNA . Northern blot - analisa RNA
	
	
	 
		3
        Questão
	
	
	Num estudo para verificar se a espécie "A" de bactéria apresenta e expressa um gene similar ao gene tox da espécie "B", seria correto afirmar que:
 
		
	 
	uma hibridação tipo Southern-blot com sonda tox marcada com DNA total, indicaria que um DNA similara este gene está presente em "A" sem informação sobre transcrição ou tradução do mesmo"
	
	uma hibridação tipo Western-blot com sonda tox marcada empregando amostras de DNA total da espécie "A", indicaria que um DNA similar a este gene está presente no genoma da espécie "A".
	
	uma hibridação tipo Northern-blot com sonda tox marcada empregando amostras de RNA total da espécie "A", indicaria que de fato este gene é traduzido na espécie "A".
 
	
	A obtenção de um produto de PCR amplificado a partir de iniciadores para tox da espécie "B" comprova a presença de um gene tox sendo expresso na espécie "A".
	
	uma hibridação tipo Southern-blot com sonda tox marcada empregando amostras de DNA total da espécie "A", indicaria que de fato este gene é expresso na espécie "A".
 
	Explicação: O Southern-blot revelaria a presença do gene especifico na especie A, porém não seria possível afirmar se esse gene é transcrito ou traduzido. 
	
	
	 
		4
        Questão
	
	
	(Adaptada de UFG, 2017): A identificação e quantificação de moléculas específicas em células e tecidos pode ser realizada pela interação antígeno-anticorpo. Qual metodologia utiliza dessa interação para identificação molecular?
		
	
	Nenhuma das alternativas acima.
	
	espectrofotometria;
	
	qRT-PCR;
	
	espectrometria de massa;
	 
	Western Blot;
	
Explicação: As demais metodologias citadas não envolvem interação antígeno x anticorpo.
	
	
	 
		5
        Questão
	
	
	Considerando os princípios das técnicas de hibridização e suas aplicações dentro da biologia molecular, assinale a alternativa correta:
		
	
	A técnica de hibridização ideal para estudos envolvendo expressão gênica é o Western Blotting;
	 
	A técnica de hibridização ideal para estudos envolvendo expressão gênica é o Northern Blotting;
	
	A técnica de hibridização ideal para estudos envolvendo expressão gênica é o Southern Blotting;
	
	Southern, Northern e Western Blotting podem ser utilizadas para estudos envolvendo expressão gênica;
	
	Não existe técnica de hibridização capaz de avaliar expressão gênica.
	
Explicação: A técnica de Northern blot corresponde a uma técnica de hibridização de moléculas de RNA com sondas de oligonucleotídeos marcadas. Trata-se de uma metodologia útil, portanto, na detecção de RNA mensageiro (RNAm), nos estudos de expressão gênica, na avaliação da degradação de RNA e splicing, por exemplo.
	
	
	
		6
        Questão
	
	
	(UFRJ, 2013): Selecione a opção que contém as etapas necessárias para execução do protocolo de Western blotting:
		
	 
	Transferência de proteínas do gel para membrana; bloqueio da membrana; incubação com anticorpo primário; incubação com anticorpo secundário; revelação.
	
	Transferência do DNA do gel para membrana; incubação com sonda hibridizadora radioativa; revelação.
	
	Imobilização em coluna de afinidade, eluição com tampão glicina, neutralização do eluato, dot blot.
	
	Desnaturação de proteínas; incubação com anticorpo primário; incubação com anticorpo secundário; revelação.
	
	Cromatografia de afinidade; incubação com anticorpo primário; incubação com anticorpo secundário; revelação.
	
Explicação: É necessária a transferência das proteínas para uma membrana, onde as reações antígeno x anticorpo se processarão. Colunas de afinidade não são necessárias nesse procedimento.
	
	
	 
		7
        Questão
	
	
	(FGV, 2010): Num estudo para verificar se a espécie "A" de bactéria apresenta e expressa um gene similar ao gene tox da espécie "B", seria correto afirmar que:
		
	
	a obtenção de um produto de PCR amplificado a partir de iniciadores para tox da espécie "B" comprova a presença de um gene tox sendo expresso na espécie "A";
	 
	uma hibridação tipo Southern-blot com sonda tox marcada com DNA total, indicaria que um DNA similar a este gene está presente em "A" sem informação sobre transcrição ou tradução do mesmo;
	
	uma hibridação tipo Southern-blot com sonda tox marcada empregando amostras de DNA total da espécie "A", indicaria que de fato este gene é expresso na espécie "A";
	
	uma hibridação tipo Northern-blot com sonda tox marcada empregando amostras de RNA total da espécie "A", indicaria que de fato este gene é traduzido na espécie "A";
	
	uma hibridação tipo Western-blot com sonda tox marcada empregando amostras de DNA total da espécie "A", indicaria que um DNA similar a este gene está presente no genoma da espécie "A".
	
Explicação: A obtenção de produtos de PCR amplificados utilizando-se iniciadores para tox apenas detecta a presença do gene, assim como a hibridização por Southern Blot. Para avaliação da expressão gênica por hibridização, seria necessário realizar a técnica de Northern Blot. Para avaliação da tradução do gene por técnica de hibridização, seria necessária a realização de Western Blot.
Aula 06
1 - PC-PI (2012) - A informação genética presente no DNA está armazenada na forma de um código decifrado durante a tradução de proteínas. A esse respeito, é correto afirmar que:
a) Códons formados por diferentes nucleotídeos podem codificar um mesmo aminoácido.
b) Códons formados por uma dada trinca de nucleotídeos especificam diferentes tipos de aminoácidos.
c) Códons que não especificam nenhum aminoácido induzem a síntese de proteínas sem função.
d) O códon AUG especifica o aminoácido fenilalanina, que dá início à cadeia proteica.
e) A terminação da síntese proteica depende da adição de metionina à cadeia proteica.
2 - FIOCRUZ (2010) – Na análise proteômica empregando eletroforese bidimensional, a focalização isoelétrica é realizada para:
a) Separar as proteínas pelo peso molecular.
b) Agrupar as proteínas pela quantidade total de cargas positivas.
c) Separar as proteínas pela quantidade total de cargas negativas.
d) Separar as proteínas de acordo com o ph onde a carga total de uma determinada proteína é nula.
e) Agrupar as proteínas de pi diferentes.
3 - FIOCRUZ (2010) – Com relação às limitações da técnica de eletroforese bidimensional, assinale a alternativa incorreta:
a) É impossível analisar todas as proteínas de uma amostra biológica em um único gel, devido à tremenda variação em abundância das proteínas.
b) Caso seja aumentada a quantidade proteínas visando a detecção de proteínas menos abundantes, o gel é sobrecarregado pelas proteínas de maior abundância e a resolução é perdida.
c) É necessário encontrar uma estratégia de solubilização e separação que atenda a todas as proteínas de uma amostra.
d) Proteínas de alto peso molecular (maiores que 200kDa) podem não migrar eficientemente no gel.
e) Proteínas muito pequenas (menores que 10kDa) se sobrepõem, devido à alta mobilidade no gel da primeira dimensão, o que resulta em perda de resolução.
4 - FIOCRUZ (2010) – Com relação à espectrometria de massa, assinale a alternativa incorreta:
a) A fragmentação dos peptídeos na célula de colisão ocorre de maneira imprevisível e aleatória, causando, em geral, fragmentos de aminoácidos que não são utilizados para a identificação das proteínas.
b) No analisador, os peptídeos são separados em função da razão massa/carga (m/z).
c) Diferentes componentes do espectrômetro são mantidos a vácuo para evitar o movimento indesejado de íons.
d) Um espectrômetro de massa contém três unidades básicas, uma fonte de ionização, um analisador e um detector.
e) Na célula de colisão, os íons colidem com um gás (em geral He, Ar ou Ne), resultando na fragmentação do íon.
5 - Analise as afirmativas e marque verdadeiro (V) ou falso (F):
a) A eletroforese em gel é uma técnica de separação de moléculas que envolve a migração de partículas em um determinado gel durante a aplicação de uma diferença de potencial.
Verdadeiro / Falso
b) A eletroforese em gel é utilizada para separar proteínas e moléculas de DNA e RNA.
Verdadeiro / Falso
c) Existem vários tipos de eletroforese em gel para analisar proteínas durante o processo de purificação. Entre elas, estão a eletroforese em gel de poliacrilamida contendo dodecil de sódio sulfatado (SDS-PAGE), a eletroforeseem gel de poliacrilamida não desnaturante (Native PAGE) e o gel em duas dimensões.
Verdadeiro / Falso
		1
        Questão
	
	
	(Unesp, 2012): A eletroforese em gel de poliacrilamida desnaturante (contendo Dodecil Sulfato de Sódio ou SDS) é uma técnica bastante utilizada em laboratório de biologia molecular para separação de proteínas. Assim, é correto afirmar que, na eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) para separação de proteínas: 
		
	 
	as proteínas sempre migrarão para o polo positivo quando realizada a pH 8,6;
	
	as proteínas sempre migrarão para o polo negativo quando realizada a pH 8,6;
	
	as proteínas maiores migrarão mais rápido que as proteínas menores.
	
	a velocidade da migração dessa proteína no gel não sofre ação da concentração do gel de poliacrilamida;
	
	quanto maior a carga negativa da proteína mais rápido ocorrerá a migração no gel;
	
Explicação: O SDS é um detergente aniônico que irá conferir carga elétrica negativa às proteínas. Dessa forma, durante a eletroforese, as proteínas migrarão em direção ao polo positivo de acordo com seus respectivos pesos moleculares.
	
	
	 
		2
        Questão
	
	
	Uma técnica de grande utilidade e resolução utilizada em laboratórios de bioquímica e biologia molecular é a eletroforese bidimensional. Sobre essa técnica, assinale V para verdadeiro e F para falso nas afirmativas a seguir:
( ) Em uma das dimensões da eletroforese bidimensional, as moléculas são separadas em função de seus pontos isoelétricos.
( ) Em uma das dimensões da eletroforese bidimensional, as moléculas são separadas de acordo com sua massa molecular.
( ) Proteínas isoladas por essa técnica podem ser, a seguir, analisadas por espectrofotometria de massas, permitindo que sejam calculadas as massas moleculares de peptídeos derivados.                                                                                                                                    ( ) Não é possível realizar western blotting a partir de um gel bidimensional.
Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA de V e F de cima para baixo:
		
	
	F-V-F-V
	 
	​​​​​V-V-V-F
	
	V-V-F-V
	
	F-V-V-F
	
	 V-V-V-V
	
Explicação: A eletroforese 2D também pode ser utilizada para separação de proteinas que precede o Western Blot 
	
	
	 
		3
        Questão
	
	
	(Adaptada de UERJ, 2015): A eletroforese foi realizada pela primeira vez em 1937, por Arne Tiselius, trabalho que lhe rendeu um prêmio Nobel. Desde então, variações dessa técnica têm sido usadas na prática analítica. A técnica que separa proteínas de acordo com seus pontos isoelétricos e suas massas moleculares é conhecida como:
		
	
	Nenhuma das alternativas acima.
	
	cromatografia líquida;
	
	eletroforese capilar;
	 
	eletroforese bidimensional;
	
	zimografia;
	
Explicação: A corrida eletroforética tem duas dimensões, por isso, é chamada bidimensional. Na primeira dimensão, as proteínas são separadas de acordo com seus pontos isoelétricos. Na segunda dimensão, as mesmas são separadas de acordo com as suas massas moleculares.
	
	
	 
		4
        Questão
	
	
	(Policia Cientifica, PR, 2017): A espectrometria de massa é uma técnica utilizada para o estudo de massas de átomos, moléculas ou fragmentos de moléculas, desde que estes estejam eletricamente carregados. A respeito desse assunto, julgue as afirmações.
 
I. Um espectrômetro de massas determina a massa de uma molécula ou átomo medindo a razão massa/carga dos íons gerados;
II. Os íons são gerados pela indução, perda ou ganho de carga por uma espécie eletricamente neutra;
III. Uma vez formados, os íons são direcionados, por forças eletrostáticas, para dentro do analisador de massas, separados de acordo com suas razões massa/carga e finalmente detectados.
 
Assinale a alternativa correta:
		
	
	Estão corretas apenas as afirmativas I e II;
	
	Está correta apenas a afirmativa I.
	
	Estão corretas apenas as afirmativas II e III;
	 
	Estão corretas todas as afirmativas;
	
	Estão corretas apenas as afirmativas I e III;
	
Explicação: Todas as alternativas estão corretas.
	
	
	 
		5
        Questão
	
	
	(Fiocruz, 2010): Nas análises rotineiras de eletroforese bidimensional, após a ruptura dos tecidos e/ou das células, as proteínas são solubilizadas e desnaturadas em soluções contendo detergentes não iônicos ou zwiteriônicos, agentes caotrópicos e pequenas quantidades de agentes redutores, para posterior análise em gel. Assinale abaixo a única alternativa que não descreve exemplos, respectivamente, destas três classes de substâncias:
		
	
	Triton-X100, tiouréia e β-mercaptoetanol;
	
	sulfobetaínas, tiouréia e β-mercaptoetanol.
	 
	Duodecil sulfato de sódio, uréia e Ditiotreitol;
	
	CHAPS (3-[(3-Cloroamidopropil)dimetilamônio]-1 propanosulfonato), uréia e iodoacetamida;
	
	Triton X-100, hidrocloreto de guanidina e Ditiotreitol;
	
Explicação: O duodecil sulfato de sódio (SDS) é um agente caotrópico.
	
	
	 
		6
        Questão
	
	
	(UnB, Cespe): Em um experimento de proteômica, ao se analisar géis de eletroforese bidimensional provenientes de amostras de eritrócitos humanos, comparando-se duas situações diferentes (exposto versus não exposto a um medicamento), foram analisadas amostras de 3 indivíduos em cada condição, sendo cada amostra analisada em triplicata, em um total de 18 géis. Para que seja possível determinar quais proteínas devem ser identificadas como presentes em quantidades distintas nas duas condições, é necessário realizar determinadas etapas. Assinale opção que apresenta a ordem correta de realização dessas etapas:
		
	
	pareamento dos spots entre todos os grupos; análise estatística comparando as coordenadas cartesianas dos spots; detecção, para delimitação das áreas dos spots;
	 
	pareamento, para delimitação das coordenadas e da intensidade de cada spot; detecção, para a comparação entre os grupos; análise estatística para validação dos dados de detecção;
	
	detecção, para delimitação das áreas dos spots; pareamento dos spots em cada grupo e, a seguir, entre os grupos; análise estatística comparando as intensidades dos spots;
	
	análise estatística comparando massa molecular e pI dos spots; detecção, para delimitação das coordenadas cartesianas de cada spot; pareamento entre os spots de cada grupo;
	
	detecção, para determinação das coordenadas cartesianas dos spots; análise estatística da variação de massa molecular de cada spot; pareamento com base nas intensidades de cada spot.
	
Explicação: Existem softwares que comparam os géis bidimensionais permitindo a contagem do número de spots, a caracterização automática dos valores de pI e massa molecular, análise de níveis de expressão e etc, validando os dados estatisticamente ao final.
	
	
		7
        Questão
	
	
	(Adaptada de UFTM, 2016): A eletroforese é uma técnica muito utilizada nos laboratórios de bioquímica, com a finalidade de acompanhar a purificação, a expressão e isolamento de proteínas para análise por espectrometria de massa ou determinar a massa molecular (Mr) da proteína. Analise as afirmações abaixo e escolha a alternativa correta:
		
	
	A eletroforese desnaturante separa as proteínas com relação à sua carga e forma.
	
	Em um gel SDS-PAGE as proteínas com maior massa molecular (Mr) são encontradas na parte inferior do gel.
	 
	Eletroforese descreve a migração de uma partícula carregada sob influência de um campo elétrico.
	
	Nenhuma das alternativas acima.
	
	A separação eletroforética de proteínas é comumente realizada empregando-se géis de agarose, os quais possuem alta capacidade de resolução.
	
Explicação: Os géis de agarose são preferencialmente utilizados para análises de ácidos nucleicos. A eletroforese desnaturante confere às proteínas carga negativa, fazendo com que a separação ocorra apenas pela diferença de peso molecular. As proteínas de maior peso molecular ficam atrasadas na trama do gel, ocupando posições superiores.
Aula 07
1. PC-RJ (2013)