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Curso: Enfermagem 1º e 2º semestre (Noite) Disciplina: Bioquímica Básica Prof (a): Dra. Jakelyne Marques RELATÓRIO DA 2ª AULA PRÁTICA REALIZADA EM 21 DE MAIO DE 2018. Fortaleza- Ce, 04 de junho de 2018 Nomes: Anna Karolynne Moura Freire, Aline Alves de Oliveira, Carlos Eduardo de Aguiar Oliveira, Fernanda Carla Barbosa da Silva, Ianca Honorato de Lima, Joás Cefas da Silva Rodrigues, Layrla Carolina Nascimento Rodrigues, Maria Gleciele Andrade Lima, Patrick Melo Alves, Sabrina Ferreira Gonçalves, Sara Elisangela da Silva Batista, Vitoria Maria Ferreira Silva. INTRODUÇÃO Enzimas são moléculas orgânicas de origem protéica, com atividade intra ou extracelular e atuam nas reações químicas celulares como catalisadores, acelerando a velocidade sem modificá-las. A atividade enzimática é influenciada preferencialmente pela temperatura, ph e tempo (como vimos nos experimentos da aula prática). Vejamos cada um separadamente: Temperatura: De acordo com a ação das reações químicas, quanto maior a temperatura maior a atividade enzimática. Porém, se a temperatura chegar ao valor máximo, ela reduz rapidamente, mesmo com esse aumento. Isso acontece por causa da estrutura tridimensional das enzimas que se desfaz, e impede a formação do complexo enzima- substrato. Ph: Cada reação tem um pH ótimo, que para maioria das enzimas se situa entre 4,5 e 8,0 no qual a enzima apresenta sua atividade máxima. Tempo: Quanto mais tempo a enzima estiver em contato com o substrato, mais produtos serão produzidos enquanto houver substratos. A importância das proteínas está relacionada com as suas funções no organismo, e não com a sua quantidade, inclusive, todas as enzimas conhecidas são proteínas. As proteínas possuem estruturas primárias, secundárias, terciárias e quaternárias que se relacionam com suas funções. Quando suas configurações são modificadas ou desfeitas, acontece a desnaturação protéica através de vários agentes desnaturantes como calor, ácidos, solventes orgânicos, soluções concentradas de uréia e guanidina, detergentes e sais de metais pesados, restando apenas a estrutura primária formada pela cadeia de aminoácidos na molécula protéica. OBJETIVOS Analisar o comportamento da atividade enzimática sob o efeito de fatores como, temperatura e substâncias químicas; Compreender a dissolução das proteínas e agentes desnaturantes, principalmente temperatura e pH, através da descrição detalhada dos experimentos realizados em laboratório. Desenvolvimento Relatório Pós- laboratório 1- Ação de ativadores e inibidores da atividade enzimática As frutas e hortaliças que consumimos passam por algum processo até chegar a nossa mesa. Como lavagem, seleção e embalagem, a fim de proporcionar ao consumidor qualidade nutritiva. E para exemplificar as ações dos ativadores e inibidores das atividades enzimáticas, segue as conclusões das experiências químicas laboratoriais. Foi enumerado 4 tubos de ensaios inicialmente. Nos tubos 1, 2, 3, 4 foi colocado um pequeno pedaço de banana. Em seguida, foi adicionado água destilada no tubo 1. Nos tubos 2, 3 e 4 foi adicionado 2 ml da substância catecol. Somente no tubo 3 foi também adicionado ácido ascórbico. E somente no tubo 4 foi colocado solução de sulfato de cobre. Tal elemento passa por alterações nas organelas e membranas celulares, e que altera as características físicas. Conclusão - No tubo 1: Pôde ser observado que a banana soltou uma penugem, no aspecto de estar se desmanchando e o líquido continuou incolor. Foi observado, que água agiu como inibidor de enzimas. Devido a presença do grupo hidrofílico presente na enzima, diminuindo o processo de enzima substrato. - No tubo 2: A banana sofreu uma mudança física, adquiriu um aspecto de inchaço e tonalidade escura, na qual ocupou toda a circunferência do tubo. E o líquido, de incolor adquiriu uma tonalidade marrom.O catecol é um substrato fenólico que possui monofenóis. São oxidado, surgindo as melanoidinas responsável pela pigmentação. - No tubo 3: A banana não sofreu modificação, e o líquido apresentou um tom alaranjado. Na qual podemos concluir que o ácido ascórbico impediu que o catecol amadurecesse a banana. - No tubo 4: A banana adquiriu listras vermelhas, e o líquido ficou esverdeado. Com a presença de sulfato de cobre que atua acelerando a intensidade da troca de elétrons. A banana possui uma elevação de atividade enzimática após seu descascamento e corte. E com exemplo de ação ativadora das atividades enzimáticas descrita anteriormente, podemos concluir que o ácido ascórbico, são tratamentos químicos alternativo para prevenção do escurecimento. O ácido ascórbico é reconhecido por sua ação redutora e contribuição nutricional (vitamina C). O ácido ascórbico e seus vários sais neutros são os principais antioxidantes para o uso em frutas e hortaliças e seus sucos, visando prevenir escurecimento e outras reações oxidativas. 2- Solubilidade de proteínas e desnaturação Em béquer, foi colocar uma clara de ovo; adicionar aproximadamente 200 ml de água destilada. Em seguida foi agitada com bastão. Em seguida deixamos em repouso por alguns minutos. Logo após foi transferido com uma pipeta 2 ml da solução de caseína (leite) para o tubo de ensaio 5; e também Transferido com uma pipeta 2 ml da solução de albumina (clara de ovo) no tubo 6. Logo após foi aquecido os tubos 5 e 6 em banho maria. Logo após foi adicionado álcool etílico a cada tubo. No béquer da clara de ovo foi adicionado a solução de cloreto de sódio gota a gota; pipetar do béquer 2 ml da solução de clara de ovo diluída em um tubo de ensaio; Depois adicionado 2 ml da solução saturada de sulfato de amônia; adicionado de água destilada. Conclusão Pode-se observar que a clara do ovo fica branca como se tivesse sido fritada. Isso acontece porque o álcool atua na desnaturação proteica da albumina A estabilidade do leite durante o tratamento térmico ou no teste do álcool é regulada pelas micelas de caseína (proteínas lácteas), devido à desnaturação das proteínas. Essas micelas são compostas por subunidades proteicas (α, β, e ?-caseína) ligada a íons como o fosfato de cálcio. 3- Albumina e caseína O recipiente 1, utilizamos um béquer, colocamos clara de ovo que contém a proteína albumina e adicionamos 30 gotas de ácido acético. O ácido acético é um ácido fraco, como é fraco ele não desnatura a proteína. Esperamos por 10 minutos e não ocorreu nenhuma mudança na solução de clara de ovo, ou seja, ele não modificou a proteína albumina. Já no recipiente 2, utilizamos um béquer novamente, colocamos leite até a primeira marca como orientado pela orientadora e aplicamos 30 gotas de ácido acético, aguardamos 10 minutos, para ver se modifica a proteína do leite a caseína.Entretanto, a solução não modificou. Portanto, não desnaturam as proteínas nas duas reações. 5- Efeito da temperatura na atividade enzimática Utilizamos batata inglesalavamos, descascamos e cortamos em cubos médios, dividimos em 06 cubos e perfuramos no meio dos cubos, formando um forame no centro. Após, dividimos cada um em ordem numérica e colocamos em recipientes numerados e aplicamos em todos os cubos 0,1 ml de solução de catecol que é um composto orgânico representado pela fórmula química C 6 H 6 O 2 . O recipiente 1, o cubo é mantido à temperatura ambiente, o recipiente 2, o cubo é fervido por um minuto; o recipiente 3, o cubo é fervido por dois minuto; o recipiente 4, o cubo é fervido por três minutos; o recipiente 5, o cubo é fervido por quatro minutos e o recipiente 6, o cubo é fervido por cinco minutos. E em todos os recipiente. Após observamos, que o recipiente 1, foi aplicado somente catecol a batata ficou vermelha com aparência de estragada os outros recipientes que foram para o fogo com banho maria e aplicado catecol ficaram mais escuros e maior quantidade de líquido, de acordo com a maior quantidade de tempo respectivamente. Questões 2. Explique como se pode precipitar as proteínas. Resposta: A precipitação das proteínas é uma técnica para concentrar ou separar proteínas de uma solução, por exemplo, pela adição de reagentes que alterem a sua solubilidade. Em sua conformação “natural” os pontos hidrofílicos da proteína ficam expostos e permitem a sua solvatação em água. Qualquer agente físico ou químico que altere sua desnaturação pode expor porções hidrofóbicas da molécula e resultar em formação de agregados que se precipitam. 3. Cite três agentes desnaturantes. Resposta: Existem vários agentes desnaturantes das proteínas, como o calor, ácidos e solventes orgânicos. 4. Dê um exemplo de processo de desnaturação que ocorre no nosso dia a dia. Resposta: Um exemplo cotidiano é o que ocorre com o ovo quando ele é frito ou cozido. Na sua elevação de temperatura ocorre a aglutinação e a precipitação da albumina, que é a proteína da clara do ovo, e é por isso que ela se torna branca. Referências http://www.scielo.br/pdf/cta/v26n1/28858.pdf http://www.fcfar.unesp.br/alimentos/bioquimica/praticas_proteinas/atividade_enzimat ica.htm FOGAçA, Jennifer Rocha Vargas. "Desnaturação das proteínas";Brasil Escola. Disponível em <https://brasilescola.uol.com.br/quimica/desnaturacao-das- proteinas.htm>. Acesso em 02 de junho de 2018. http://www.scielo.br/pdf/cta/v26n1/28858.pdf http://www.fcfar.unesp.br/alimentos/bioquimica/praticas_proteinas/atividade_enzimatica.htm http://www.fcfar.unesp.br/alimentos/bioquimica/praticas_proteinas/atividade_enzimatica.htm
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