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CINÉTICA DO CRESCIMENTO MICROBIANO Prof. João Batista de Almeida e Silva Escola de Engenharia de Lorena-USP Hidrólise Glicose Piruvato 8 ATP Ciclo de Krebs 30 ATP CO2 O2 Produtos de Fermentação ( lactato, álcoois, ácidos, etc.) 6 ATP Respiração Aeróbia Respiração Anaeróbia (CO2, SO42-, NO3-) Figura 1: Esquema simplificado de processos aeróbios e anaeróbios • Processos aeróbios: oxigênio como aceptor final de elétrons; • Processos anaeróbios: • Fermentativos: Utilizam produtos da degradação do substrato. • Anóxicos: Utilizam compostos inorgânicos. Rendimento Energético Processos aeróbios > Processos anaeróbios Estudo Cinético Processo obedece ao princípio de conservação da matéria OGHFCONOHECOHDNHBOOHAC cba 2242 ++→++ δγβα Substrato Síntese Manutenção Fonte de Nitrogênio Elementos minerais: Fósforo, enxofre, cobre, cácio, etc. Métodos para avaliação de crescimento de microrganismos Fisiologia do microrganismo! Métodos Diretos • Determinação da concentração celular • Contagem no microscópio; • Contagens com cultura; • Contagem eletrônica. Não se aplicam a m.o. filamentosos Figura 2: Contagem em Câmara de Neubauer Figura 3: Contagem de Células Viáveis em placas • Determinação da biomassa microbiana • Matéria seca; • Medidas óticas. Figura 4: Separação de células por filtração Métodos Indiretos • Constituintes celulares (ATP, DNA, NADH); • Dosagem de elementos do meio de cultura (substrato, consumo de O2, propriedades reológicas do meio de cultura, entre outros. Processo Fermentativo Fermentador Microrganismo Preparo do inóculo Nutrientes Preparo do meio Esterilização do meio Controles Esterilização do ar Recuperação do produtoAr Tratamento de efluente Produto Resíduo Figura 5: Etapas de um processo fermentativo Obtenção de uma curva de crescimento para um M.O. Figura 6: Processo para obtenção de uma curva de crescimento C on ce nt ra çã o (g /L ) Tempo de Cultivo (h) Biomassa Produto Substrato Figura 7 : Curvas de crescimento de biomassa, consumo de substrato e formação produto Curva de crescimento Condições favoráveis ao microrganismo Figura 8: Curva típica de crescimento bacteriano • Fase lag • Rearranjo do sistema enzimático (síntese de enzimas); • Traumas físicos (choque térmico, radiação, entre outros); • Traumas químicos (produtos tóxicos, meio de cultura). Não há variação da concentração de biomassa no tempo, portanto: XocteX == Xo = concentração celular no tempo t =0 • Fase log ou exponencial • Células plenamente adaptadas; • Velocidades de crescimento elevadas; • Consumo de substrato; • Interesse prático. • • Fase de redução de velocidade • Diminuição da concentração de substrato limitante; • Acúmulo de produto(s) no meio • Fase estacionária • Término do substrato limitante; • Acúmulo de produtos tóxicos; • Concentração celular constante em seu valor máximo. • Fase de declínio • Redução do crescimento celular; • Consumo de material intracelular (lise). Dispondo de um conjunto de dados experimentais de X, S e P em função do tempo tem-se: dt dp dt ds dt dx psx =−== μμμ ;; Crescimento Consumo Formação Não são os melhores parâmetros para se avaliar o estado em que se encontram o sistema. Velocidades específicas: • Crescimento: dt dX X 1 =μ • Consumo de substrato: dt dS Xs 1 −=μ • Formação de produto: dt dP Xp 1 =μ Distribuindo os dados da fase exponencial em coordenadas semilogarítmicas, tem-se: μ== dt dX Xdt Xd 1)ln( Como essa fase tem a distribuição de uma reta a velocidade específica de crescimento é constante e máxima. )(loglog 0 imi ttXX −=− μ X0i= Concentração celular no instante de início da fase exponencial Rearranjando a equação anterior: )( 0 tit i meXX −= μ Ou, re-escrevendo de outra forma, tem-se: tXX mi μ+= 0lnln Assim, pode-se obter o tempo de duplicação da biomassa, onde X=2X0i: m Tdup μ = 2ln Fator de conversão de substrato a células SS XX Y SX − − = 0 0 / X0= Concentração celular inicial X= Concentração celular no instante t S0= Concentração inicial do substrato S= Concentração residual do substrato no instante t. Este parâmetro é importante para a determinação de X em cultivo de fungos filamentosos e em processos de tratamento de efluentes. O fator de conversão pode ser obtido também através de: S SXY μ μ =/ Coeficiente de Manutenção SX SS Y m /' μμ += Velocidade específica de consumo de substrato para manutenção da viabilidade celular Produtividade F F T XX P 0 − = X0= Biomassa inicial; XF= Biomassa final; TF= Tempo total de cultivo.
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