MICROSCOPIA

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MICROSCOPIA
As Células
O estudo das células (citologia) só foi possível com o surgimento 
da: 
• Microscopia: é a ciência que estuda os 
métodos e as técnicas para observação de 
objetos com dimensões muito reduzidas.
• Microscópio: é um instrumento com 
capacidade de ampliar imagens de objetos 
muito pequenos graças ao seu poder de 
resolução
Os primeiros microscópios e início da observação de células
Robert Hooke – 1963
Observação de fatias de cortiça 
Anton van Leeuwenhoek – 1673
Observação das células sanguíneas e bactérias
MICROSCOPIA ATUAL
TIPOS DE MICROSCÓPIO
1. MICROSCÓPIO ÓPTICO
Utiliza uma feixe de luz e lentes ópticas de cristal para produzir a imagem
2. MICROSCÓPIO ELETRÔNICO
Utiliza uma feixe de elétrons e lentes eletromagnéticas produzir a 
imagem
1. Microscópio óptico composto
Um microscópio óptico composto (MO) moderno possui uma série de lentes e utiliza a 
luz visível como fonte de iluminação. Com um microscópio óptico composto, podemos 
examinar amostras muito pequenas, bem como parte de seus detalhes. 
A ampliação é obtida quando os raios de 
luz de um iluminador, a fonte de luz, 
passam através de um condensador, que 
possui lentes que direcionam os raios de 
luz através da amostra. A seguir, os raios 
de luz passam para as lentes objetivas, 
as lentes mais próximas da amostra. A 
imagem da amostra é novamente 
ampliada pela lente ocular.
Lentes objetivas
Ampliação
Podemos calcular a ampliação total de uma amostra multiplicando a 
ampliação (alcance) da lente objetiva pela ampliação (alcance) da lente ocular. 
A maior parte dos microscópios utilizados em microbiologia possui várias 
lentes objetivas
Resolução
A resolução (também chamada de potência de resolução) é a capacidade das lentes de 
diferenciar detalhes e estruturas. Especificamente, refere-se à capacidade das lentes 
de diferenciar entre dois pontos separados a uma determinada distância. 
Por exemplo, se um microscópio possui uma potência de resolução de 0,4 nm, pode 
distinguir entre dois pontos se eles estiverem separados por uma distância de pelo 
menos 0,4 nm.
Microscopia de campo escuro
Um microscópio de campo escuro é utilizado 
para examinar micro- organismos vivos que 
são invisíveis ao microscópio óptico comum, 
que não podem ser corados por métodos-
padrão ou que são tão distorcidos pela 
coloração que suas características não 
podem ser identificadas. 
Em vez do condensador normal, um 
microscópio de campo escuro utiliza um 
condensador de campo escuro, que contém 
um disco opaco.
Microscopia de contraste de fase
Outro modo de se observar micro-organismos é com 
um microscópio de contraste de fase. A microscopia de 
contraste de fase é especialmente útil, pois permite 
um exame detalhado das estruturas internas de micro-
organismos vivos. 
Além disso, não é necessária a fixação (fixar os 
micróbios à lâmina do microscópio) ou a coloração da 
amostra – procedimentos que poderiam distorcer ou 
matar os micro-organismos.
Microscopia de fluorescência
A microscopia de fluorescência vale-se da 
fluorescência, a capacidade das substâncias de 
absorver curtos comprimentos de ondas de luz 
(ultravioleta) e produzir luz em um 
comprimento de onda maior (visível). Alguns 
organismos fluorescem naturalmente sob 
iluminação ultravioleta; se a amostra que será 
visualizada não fluorescer naturalmente, ela 
pode ser corada com um grupo de corantes 
fluorescentes denominados fluorocromos.
Microscopia confocal
Microscopia confocal é uma técnica na microscopia óptica utilizada para reconstruir 
imagens tridimensionais. Assim como na microscopia de fluorescência, as amostras 
são coradas com fluorocromos para que emitam, ou devolvam, a luz. 
Contudo, em vez da iluminação do 
campo todo, na microscopia confocal um 
plano de uma pequena região da 
amostra é iluminado com uma luz de 
pequeno comprimento de onda (azul), 
que passa a luz devolvida através de uma 
abertura alinhada com a região 
iluminada. Cada plano corresponde a 
uma imagem de um corte fino que foi 
fisicamente seccionado a partir de uma 
amostra.
Microscopia eletrônica
Objetos menores que 0,2 μm, como vírus ou estruturas internas das células, devem ser 
examinados com um microscópio eletrônico. Na microscopia eletrônica, um feixe de 
elétrons é usado ao invés da luz. Como a luz, os elétrons livres se deslocam em ondas.
A potência de resolução do microscópio eletrônico é muito maior que a dos outros 
microscópios descritos até agora.
Ao invés de usar lentes de vidro, um microscópio eletrônico utiliza lentes 
eletromagnéticas para focalizar um feixe de elétrons na amostra. Existem dois tipos de 
microscópios eletrônicos: 
• Microscópio eletrônico de transmissão (MET)
• Microscópio eletrônico de varredura (MEV)
Microscópio eletrônico de transmissão (MET)
Microscopia eletrônica de transmissão
No microscópio eletrônico de transmissão (MET), um feixe de elétrons finamente 
focalizado de um canhão de elétrons passa através de um corte ultrafino da amostra, 
especialmente preparado. 
O feixe é focalizado em uma pequena área 
da amostra por uma lente de condensador 
eletromagnética, que realiza uma função 
aproximadamente igual à do condensador 
de um microscópio óptico – direcionar o 
feixe de elétrons em uma linha reta para 
iluminar a amostra.
Microscópio eletrônico de varredura (MEV)
Partes de um microscópio óptico composto
COMPOSIÇÃO ÓPTICA E 
MECÂNICA DE UM MICROSCÓPIO 
ÓPTICO COMPOSTO COMUM 
Partes mecânicas:
Base ou pé: é o suporte do microscópio, peça que sustenta todas as outras partes do 
aparelho.
Braço ou coluna: peça que liga o pé à parte superior do microscópio.
Mesa ou platina: peça de apoio da lâmina contendo o material para estudo, no centro da 
mesa existe um orifício para a passagem da luz.
Charriot: peça ligada à platina que permite movimentar a lâmina no plano horizontal da 
esquerda para a direita e vice-versa, e de trás para frente e vice-versa.
Parafuso macrométrico: localiza-se em ambos os lados do braço, serve para ajustar o foco 
grosseiramente através de avanço ou recuo da mesa em relação à objetiva.
Parafuso micrométrico: ajusta o foco finamente através de pequenos avanços ou recuos da 
mesa.
Canhão: parte superior do microscópio constituída por um tubo contendo um prisma. 
Sustenta lentes objetivas e oculares, e serve para focalização do material.
Revolver: peça onde se encaixam as lentes objetivas. É composto por um disco de 
ranhuras que permite a mudança das objetivas.
Partes ópticas:
Condensador: conjunto de lentes situado abaixo da platina que concentra a luz e fornece 
iluminação uniforme à preparação biológica.
Botão do condensador: permite a movimentação do condensador.
Diafragma: regula a intensidade de luz que atinge a preparação através de uma alavanca 
para sua abertura ou fechamento.
Objetivas: conjunto de 4 ou mais lentes superpostas que proporcionam aumentos 
diferentes para observação do material. O valor do aumento está gravado na objetiva.
Oculares: possui 2 lentes convergentes que ampliam e corrigem os defeitos da imagem. O 
valor do aumento proporcionado está gravado na ocular.
PREPARAÇÕES 
CITOLÓGICAS
Todavia, para se observar células ao microscópio óptico é 
necessário o procedimento de coleta e preparação da amostra.
Coleta do material 
Existem diversas fontes de células e cada fonte requer um cuidado na hora da coleta.
Tecidos vegetais e animais: corte histológico com micrótomo
A origem das amostras dos preparados histológicos animais vem de fragmentos
de tecidos oriundos de necropsias e biópsias.
Líquidos e líquidos corpóreos:
COLORAÇÕES CITOLÓGICAS