Aula 04 coloração de GRAM

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Microbiologia e Imunologia ARA0023
Aula 5 Técnica da coloração de GRAM.
Prof.Dr. Orlando P. Neto
Microbiologia e Imunologia
Coloração de Gram – O que é bactéria Gram-positiva e Gram-negativa?
A coloração de Gram é um passo muito importante na caracterização e classificação inicial das bactérias.
Afinal, esse método de coloração permite que as bactérias sejam visualizadas no microscópio óptico, uma vez
que sem a coloração é impossível observá-las ou identificar sua estrutura.
O método de coloração de Gram recebeu esse nome em homenagem ao patologista dinamarquês Hans
Christian Joachim Gram que realizou a descoberta em 1884 e, aliás, até hoje continua sendo a mais utilizada
nos laboratórios de análises clínicas e microbiologia. Através da coloração é possível identificar e diferenciar os
dois principais grupos de bactérias, sejam Gram-positivas ou Gram-negativas.
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Microbiologia e Imunologia
Coloração de Gram – O que é bactéria Gram-positiva e Gram-negativa?
PRINCÍPIO DA COLORAÇÃO DE GRAM
Em suma, o procedimento de coloração de Gram permite que as bactérias retenham a cor com
base nas diferenças nas propriedades químicas e físicas da parede celular.
De fato, o uso dos corantes permite aumentar o contraste e evidenciar a estrutura bacteriana.
A coloração envolve 3 etapas principais:
•Coloração com violeta de cristal (um corante solúvel em água, roxo);
•A descoloração (utilizando etanol / acetona);
•A contra-coloração (utilizando corante Safranina, vermelho).
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Coloração de Gram – O que é bactéria Gram-positiva e Gram-negativa?
DIFERENÇA ENTRE BACTÉRIA GRAM-POSITIVA E GRAM-NEGATIVA
A princípio, há diferentes graus de permeabilidade na parede dos microrganismos Gram-positivos e Gram-
negativos.
As bactérias Gram-positivas retém o cristal violeta devido à presença de uma espessa camada de
peptidoglicano (polímero constituído por açúcares e aminoácidos que originam uma espécie de malha na
região exterior à membrana celular das bactérias) em suas paredes celulares, apresentando-se na cor roxa.
Já as bactérias Gram-negativas possuem uma parede de peptidoglicano mais fina que não retém o cristal
violeta durante o processo de descoloração e recebem a cor vermelha no processo de coloração final.
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Coloração de Gram – O que é bactéria Gram-positiva e Gram-negativa?
Exemplos de bactérias Gram-positivas
Bacillus, Nocardia, Clostridium, Propionibacterium, Actinomyces, Enterococcus, Cornyebacterium, Listria,
Lactobacillus, Gardnerella, Mycoplasma, Staphylococcus, Streptomyces, Streptococcus.
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Coloração de Gram – O que é bactéria Gram-positiva e Gram-negativa?
Exemplos de bactérias Gram-negativas
Escherichia, Helicobcater, Hemophilus, Neisseria, Klebsiella, Enterobacter, Chlamydia, Pseudomonas, Salmonella,
Shigella.
PASSO A PASSO DA METODOLOGIA DE GRAM
1. Cubra o esfregaço com violeta-de-metila e deixe por aproximadamente 15 segundos;
1. Adicione igual quantidade de água sobre a lâmina coberta com violeta-de-metila deixe agir por mais 45”
2. Escorra o corante e lave em um filete de água corrente; Cubra a lâmina com lugol diluído (1/20) por 1 min.
3. Escorra o lugol e lave em um filete de água corrente;
4. Adicione álcool etílico (99,5º GL) sobre a lâmina; descorando-a, até que não desprenda mais corante;
5. Lave em um filete de água corrente;
6. Cubra a lâmina com safranina e deixe agir por aproximadamente 30 segundos;
7. Lave em um filete de água corrente;
8. Deixe secar ao ar livre, ou seque suavemente com o auxílio de um papel de filtro limpo;
9. Visualize no microscópio. Logo após leia em objetiva de imersão (100 X).
APLICAÇÃO E BENEFÍCIOS DA COLORAÇÃO DE GRAM
A diferenciação das bactérias Gram-negativas e Gram-positivas permite ao profissional da área da 
saúde determinar um tratamento eficaz ao paciente, dessa forma aplicando a terapia adequada em 
cada caso como por exemplo a utilização de antibióticos específicos para cada um dos dois grupos de 
bactérias.