Roteiro de aula prática - Dosagem de colesterol total e HDL (1)

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FACULDADES INTEGRADO – CAMPO MOURÃO 
BIOMEDICINA 
MICROBIOLOGIA CLÍNICA 
PROFESSORA: FRANCINE M. D. F. ROMANICHEN 
 
AULA PRÁTICA: 
DETERMINAÇÃO DE COLESTEROL TOTAL EM SORO/PLASMA 
 
INTRODUÇÃO 
O colesterol é um lipídeo caracterizado pela presença do núcleo aromático 
ciclopentanoperidrofenantreno. O colesterol apresenta importante função no organismo 
humano, pois participa diretamente da síntese de sais biliares pelo fígado, síntese de 
hormônios esteroidais (estrógeno, progesterona, testosterona, aldosterona e cortisol), 
síntese de vitamina D e síntese de membrana. Em menor importância, o colesterol pode 
ser utilizado para síntese de ATP. 
A maior parte do colesterol presente no organismo é oriundo da síntese 
predominantemente hepática onde a enzima hidroximetilglutaril-CoA redutase (HMG-CoA 
redutase) tem um papel principal e é o alvo de ação das drogas hipocolesterolemiantes do 
grupo estatina. Uma pequena parte do colesterol é proveniente da absorção intestinal por 
meio do transportador NCP1-L1. 
O colesterol presente no organismo pode estar na forma livre ou esterificada. A forma 
livre é mais solúvel em relação à esterificada. Ambas as formas são transportadas por 
lipoproteínas como VLDL, IDL, LDL e HDL. O colesterol da dieta é transportado pelos 
quilomícrons, mas sua quantidade nestas partículas é muito baixa. 
Apesar de diversas lipoproteínas poderem carregar o colesterol, a lipoproteína com 
maior quantidade e mais importante é a LDL. Esta lipoproteína está diretamente associada 
a aterogênese. A dosagem do colesterol-total inclui o colesterol presente em todas as 
lipoproteínas, mas sua finalidade principal é estimar os níveis de colesterol-LDL. 
 
PROCEDIMENTO 
MÉTODO: A determinação do colesterol-total será feita através de método enzimático-colorimétrico 
conforme metodologia descrita por Trinder (1969). 
Ésteres de colesterol colesterol esterase Colesterol + ácidos graxos 
Colesterol + O2 colesterol oxidase Colest4-enona + H2O2 
H2O2 + 4-aminoantipirina + fenol peroxidase quinoneimina + H2O 
 
 
Absorbância 505 nm 
UNIVERSIDADE CEUMA
CURSO DE BIOMEDICINA
DISCIPLINAS: BIOQUÍMICA BÁSICA
PROF. EDUARDO SOARES 
TÉCNICA: 
TUBOS BRANCO TESTE PADRÃO SORO 
CONTROLE 
Padrão - - 10 L - 
Soro controle - - - 10 L 
Amostra - 10 L - - 
Reagente de cor 1000 L 1000 L 1000 L 1000 L 
 Agitar bem e incubar os tubos durante 10 minutos à 37º C. 
 Ler em 505 nm zerando o aparelho com o branco. 
 A cor é estável por uma hora; 
 O método apresenta linearidade para valores até 1.100 mg/dL. 
 
 
VALORES DE REFERÊNCIA: 
 Desejável Aceitável Alto 
Colesterol-total 
adulto 
< 200 mg/dL 200 – 239 mg/dL ≥ 240 mg/dL 
Colesterol-total 
2-19 anos 
< 179 mg/dL 170-199 mg/dL ≥ 200 mg/dL 
 
DETERMINAÇÃO DE COLESTEROL HDL EM SORO/PLASMA 
 
A dosagem do colesterol HDL é realizada na prática para avaliação do risco para 
desenvolvimento de doenças cardiovasculares. Quanto maior a taxa plasmática de 
colesterol HDL, menores os riscos de desenvolvimento de aterosclerose. 
A metodologia de dosagem do colesterol HDL é semelhante ao colesterol total. 
Contudo, é necessária uma etapa preliminar de preparo da amostra para eliminação do 
colesterol presente nas moléculas de VLDL, IDL e, principalmente, LDL. Estas lipoproteínas 
podem ser precipitadas com o ácido fosfotungstíco e cloreto de magnésio. 
 
PROCEDIMENTO: 
 
MÉTODO: A determinação do colesterol HDL será feita através de método enzimático-
colorimétrico conforme metodologia descrita por Trinder (1969). 
Ésteres de colesterol colesterol esterase Colesterol + ácidos graxos 
Colesterol + O2 colesterol oxidase Colest4-enona + H2O2 
H2O2 + 4-aminoantipirina + fenol peroxidase quinoneimina + H2O 
 
 
 
 
TÉCNICA: 
 
Precipitação de 
VLDL e LDL 
 Pipetar 250 L da amostra e 250 L do agente 
precipitante; 
 Agitar e deixar por 10 minutos a temperatura ambiente; 
 Centrifugar a 4.000 RPM durante 10 minutos; 
 Utilizar o sobrenadante que deve estar límpido. 
TUBOS BRANCO TESTE PADRÃO SORO 
CONTROLE 
Padrão - - 100 L - 
Soro controle - - - 100 L 
Amostra - 100 L - - 
Reagente de 
cor 
1000 L 1000 L 1000 L 1000 L 
 Agitar bem e incubar os tubos durante 10 minutos à 37º C. 
 Ler em 500 nm zerando o aparelho com o branco. 
 A cor é estável por uma hora; 
 O método apresenta linearidade para valores até 150 mg/dL; 
 Padrão 52,5 mg/dL. 
 
 
VALORES DE REFERÊNCIA PARA HDL COLESTEROL (mg/dL): 
 Ótimo Aceitável 
Risco moderado 
Baixo 
Risco elevado 
Masculino > 55 35-55 < 35 
Feminino > 65 45-65 < 45 
 
 
Absorbância 505 nm