Imunologia Clínica - Juliana Gonçales - 1°Webconferência - Mód

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WEBCONFERÊNCIA 01
Profa. Dra. Juliana Prado Gonçales
Aspectos gerais dos 
imunoensaios
Imunologia Clínica - Profª. Dra. Juliana Gonçales
Conjunto de reações fracas que estabilizam a ligação 
entre moléculas de antígenos e de anticorpos:
• Pontes de hidrogênio;
• Ligações iônicas;
• Forças hidrofóbicas;
• Forças de Van der Waals.
Força de Ligação – Ag+AC
• Especificidade dos anticorpos;
• Afinidade dos Ac;
• Avidez dos Ac;
• Concentração dos Ac e antígenos;
• Classe dos anticorpos envolvidos;
• Pureza dos antígenos utilizados;
• pH do meio da reação;
• Temperatura da reação;
• Tempo da reação;
• Efeito pró-zona.
Interferentes na Ligação
Afinidade
“Força de ligação resultante do total de forças não-covalentes 
entre um único sítio de ligação do Ac e um único epítopo do 
antígeno. Depende do grau de complementariedade entre as 
duas moléculas’’
✓ Alta afinidade – ligações mais fortes e duradouras;
✓ Baixa afinidade – ligam-se fracamente tendendo a se 
dissociar com facilidade;
Afinidade
Avidez
“Força resultante de interações múltiplas entre uma molécula 
de anticorpo e os epítopos de um antígeno complexo”
✓ Quanto maior a avidez, melhor o efeito biológico;
✓ Baixa afinidade pode ser compensada por uma alta avidez.
Quanto mais sítio de ligação, maior será a avidez – Fração FAB<IgG
monomérica<dímero<pentâmero
• Título;
• Teste de referência;
• Sensibilidade ;
• Especificidade;
• Falso-positivo/falso-negativo; 
• Valores preditivos;
• Reação cruzada;
• Precisão;
• Acurácia ou exatidão;
• Reprodutibilidade;
• Limiar de reatividade (cut off);
• Efeito pró-zona.
Conceitos Básicos dos Testes Sorológicos
Título
• Máxima diluição na qual um teste continua dando reação 
positiva;
• Quando dizemos que um soro deu um titulo de 1:20 em 
um teste de VDRL para sífilis, isso significa que mesmo 
diluindo 20 vezes o teste ainda continua positivo;
• Uma reação para o mesmo antígeno em teste diferentes 
irão resultar em títulos diferentes, uma vez que depende 
do limiar de detecção de cada teste. 
Teste de Referência
“Teste conhecido e já realizado, a qual qualquer nova
metodologia deve ser comparada durante sua padronização
– Conhecido como Teste Padrão-Ouro”
Sensibilidade (S= a/a+c)
• Porcentagem de resultados positivos na população
sabidamente doente, isto é, a proporção de resultados
positivos verdadeiros;
• Falso Positivo – são reações positivas em indivíduos
sabidamente sadios;
• Sensibilidade de um teste sorológico – é o limiar de
detecção ou seja a quantidade mínima de Ac detectável.
✓ Teste com alta sensibilidade tem maior quantidade de Falsos-Positivos – teste para triagem.
Especificidade (E= d/b+d)
• Porcentagem de resultados negativos em pacientes
sabidamente sadios, isto é, à proporção de resultados
verdadeiramente negativos;
• Falso Negativo – são reações negativos em indivíduos
sabidamente doentes;
✓ Teste com alta especificidade tem pouca quantidade de Falsos-Positivos – teste 
para diagnóstico
Valor preditivo positivo 
(VPP= a/a+b)
• Porcentagem de verdadeiro positivos entre todos os
indivíduos com teste reagente (positivo);
• Probabilidade de um paciente com teste reagente de ter a
doença
Valor preditivo negativo 
(VPN= d/c+d)
• Porcentagem de verdadeiro negativos entre todos os
indivíduos com teste não reagente (negativo);
• Probabilidade de um paciente com teste não reagente de
não ter a doença
verdadeiro
positivo
falso 
positivo
falso 
negativo
verdadeiro
negativo
DOENÇA
T
E
S
T
E
S= a/a+c
E= d/b+d
a b
c d
VPP= a/a+b
VPN= d/c+d
Reação Cruzada
• É o resultado da similaridade tridimensional entre
duas moléculas de antígenos diferentes;
• Sendo assim, um Ac de um determinado Ag
pode reagir com outra, mesmo sendo uma
ligação de baixa afinidade;
Precisão
• Concordância dos resultados obtidos após várias
repetições e traduz a possibilidade de erro
acidental do método;
• Quanto maior a precisão de um determinado teste,
menor será a influência que ele sofre das condições
durante a execução – pH, tempo, manuseio...
Acurácia
• Capacidade do teste fornecer resultados muito
próximos do valor verdadeiro do que esta sendo
medido – detecta a tendência de desvio.
Reprodutibilidade
• Obtenção de resultados iguais no mesmo teste e
com a mesma amostra, porém, por pessoas e
locais diferentes.
Limiar de Reatividade ou 
“Cut-off”
• É o ponto de corte de um determinado teste, ou
seja, valor acima do qual se deverá considerar
positivo;
• Apesar do cut-off, sempre vão existir amostras em
zona duvidosa.
Efeito pró-zona
• Quantidade exacerbada de anticorpos na amostra
teste (pura), sendo desproporcional em relação ao
antígeno teste.
• Formação de pequenos imunocomplexos
Efeito pró-zona
Hibridoma
OBRIGADA
“Primeira lei do estudante: Todo indivíduo em repouso tende a
permanecer em repouso a não ser que uma força chamada “dia de prova”
atue sobre o mesmo”