Imunohematologia Veterinária

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Imunologia Veterinária – Prof. Miguel Angelo
IMUNO-HEMATOLOGIA VETERINÁRIA
Histórico
· A primeira complicação, que se tem registro, referente a transfusão ocorreu em 1492, quando o Papa Inocêncio VIII, portador de doença renal crônica, recebeu o sangue de três jovens rapazes para a cura de sua enfermidade, vindo a falecer todos os três doadores.
· No século XVII, em Paris, foram realizadas as primeiras transfusões de animais em seres humanos, aparentemente sem problemas, num total de quatro pacientes.
· Todavia ao transfundir um quinto paciente pela segunda vez, descreveu o que podemos considerar atualmente como a primeira reação hemolítica transfusional da medicina.
· Paris baniu o uso de transfusões, sendo o ato endossado pelo Parlamento Francês, pela Sociedade de Medicina da Inglaterra e pelo Papa. Dessa forma, a transfusão de sangue ficou no esquecimento até o início do século XIX, havendo alguns relatos esporádicos nesse período. 
· Em 1818 foi constado a impossibilidade de transfusões entre diferentes animais e postulou que somente o sangue de humanos poderia ser utilizado em humanos.
· A trajetória para uma técnica de transfusões de sangue eficiente e segura foi difícil, porém foram feitos muitos progressos. 
· 1900 – Grupo ABO, por Landdsteiner 
· 1902 – AB, por de Costello e Sturli 
· Devido a Segunda Guerra Mundial levou a ocorrência diária de transfusões e com isso numerosos grupos sangüíneos foram descobertos.
Conceito
· É uma disciplina complexa e está relacionada a outras ciências biológicas, como imunologia, hematologia, genética, biologia molecular e bioquímica.
Importância
Base da imuno-hematologia 
· Reação Ag X Ac 
· Aglutinação - É a maneira mais fácil de estudar a reação Ag x Ac 
· Hemólise
Aglutinação
· Etapas: 
a) Sensibilização
· O Ac se une ao Ag na membrana eritrocitária
· Fração variável (Fab) x determinante antigênico = sensibilização não visível
b) Hemaglutinação 
· Hemácias sensibilizadas + pontes entre elas = aglutinação
· Depois da sensibilização as células aglutinam
· Afetam a segunda etapa:
· Distância das células 
· Tamanho dos anticorpos
· Fatores que afetam aglutinação
· Temperatura
· IgM reage melhor em temperaturas baixas
· IgG reage melhor em temperaturas de 37º C
· OBS: em imunohematologia é importante detectar os Ac clinicamente significativo, geralmente os que reagem melhor a 37º C e AGH
· Tempo de incubação
· Período de incubação
· Reação Ag x Ac alcança equilíbrio
· Concentração Ag- Ac 
· Sensibilização ocorre quando o Ac > concentração
· Aumentando a proporção de soro em relação as hemácias
· pH
· Ainda não determinado
· Acredita-se que o pH ótimo seja próximo do pH fisiológico
· Anti-M reagem melhor em pH baixo
· Concentração do anticorpo
· Classe da imunoglobulina
· Concentração do antígeno
· Potencializadores 
· Substâcias que modificam o meio como uma maneira de promover a aglutinação das hemácias Ag-positivos por seus Ac correspondentes
· OBS: Os mais utilizados:
· Albumina bovina 22%
· Solução isotônica de baixa força iônica (LISS)
· Polietilenoglicol (Peg)
· Enzimas
· Ficina, papaina, bromelina
Conceitos Básicos
· Antígeno: substância reconhecida pelo organismo como “não-próprias” (non-self). Ex: Antígenos eritrocitários
· Imunogenicidade: capacidade de estimular a produção de anticorpos. Os antígenos que possuem essas características são denominados imonógenos
· Epítopo: é o sítio (local) de ligação do antígeno com a imunoglobulina ou receptores de linfócitos T
· Anticorpos ou imunoglobulinas: são substâncias (proteínas globulares) produzidas a partir da ativação dos glóbulos brancos do sangue (linfócitos B), que se transformam em plasmócitos e secretam anticorpos, em resposta à introdução de um dado antígeno (imunógeno). Ex: IgA, IgE, IgG, IgM e IgD
Classificação dos anticorpos
· De acordo com a origem:
· Heteroanticorpo - anticorpos produzidos contra antígenos advindos de indivíduos de espécies diferentes. Ex.:produção de antiglobulina humana (Coomb’s) por imunização de coelho.
· Aloanticorpos - produzidos contra antígenos reconhecidos como “não-próprios” a um indivíduo, mas proveniente de indivíduo da mesma espécie. Ex.: Imunização por transfusão sangüínea
· Auto-anticorpos - produzidos contra antígenos do próprio indivíduo. Ex.: Doenças auto-imunes, como anemia hemolítica autoimune (AHAI)
· De acordo com o estímulo:
· Imunes: formam-se após ativação do sistema imune
· Naturais: formam-se contra antígenos não presentes no animal, sem necessidade de contato prévio com o antígeno
· De acordo com o comportamento:
· Completos: promovem a aglutinação das hemácias em meio salina. Ex.: IgM 
· Incompletos: reagem com o antígeno, porém não produzem a aglutinação das hemácias. Precisam de auxílio para que ocorra a visualização da aglutinação. Ex.: IgG 
· Classe de anticorpos importantes em imuno-hematologia 
· IgM:
· Molécula pentamérica 
· Molécula grande (1000 A)
· Alto peso molecular (900.000 Da)
· Não atravessa a barreira placentária
· São geralmente frios
· IgG:
· Molécula monomérica
· Principal: 75% do total de Ig 
· Pequeno tamanho (125 a 250 A)
· Baixo peso molecular (160.000 Da)
· Atravessa a barreira placentária
· São geralmente quentes
Sistema de Grupos Sanguíneos
Biossíntese dos antígenos ABO
Fenótipo ABO
Classificação dos Grupos Sangüíneos
Sistema de Grupo Sangüíneo Felino
· A - Ácido N-Glicolilneuramínico 
 Ácido N-Acetilneuramínico 
· B - Ácido N-Acetilneuramínico 
 AB – combinação dos anteriores
Características do sistema de grupos AB em gato
Sistema de Grupo Sangüíneo Canino
· DEA 1: 1.1
 1.2
 1.3 
· DEA 4:
· DEA 5
· DEA 6
· DEA 7
· DEA 8
Tipagem Sangüínea
· Determina a presença de antígenos na superfície das hemácias
Prova de compatibilidade
· Detecta anticorpos no soro do receptor ou do doador contra as hemácias
· Ajuda a diminuir o risco de reações transfusionais, principalmente onde não é feita a tipificação sangüínea
· Obrigatoriamente realizada em pacientes a partir da 2ª transfusão
· Existe dois tipos de reação cruzada:
· Maior (mais importante)
· Menor
· Teste da antiglobulina humana (Prova de Coomb’s)
· Prova direta de Coomb’s 
· Pesquisa a presença de hemácias sensibilizadas por anticorpos e / ou frações de complemento. Ex: estudo de doença hemolítica do recém nato; anemia hemolítica auto-imune; na hemólise induzida por drogas; reações hemolíticas pós-transfusionais.
· Prova indireta de Coomb’s 
· Pesquisa a presença de anticorpos no soro / plasma. Ex: pesquisa e identificação de anticorpos irregulares; testes de compatibilidade pré-transfusionais.
Patologias importantes em imuno-hematologia 
· Doença hemolítica do recém-nascido
· Isoeritrólise neonatal felina
· Anemia hemolítica auto-imune (AHAI)
Doença Hemolítica do Recém-nato
· É uma condição clínica onde a sobrevida das hemácias do feto ou do recém-nascido está reduzida por ação de anticorpos específicos originados da mãe através da transferência placentária.
· ↑ destruição de hemácias do feto ou do recém nascido leva ↑ eritropoiese → presença células nucleadas na circulação (eritroblastos).
· O antígeno eritrocitário mais comumente
· Tipos:
· DHRN por anti-D materno
· DHRN por incompatibilidade materno-fetal ABO
· Patogênese da DHRN
· Aloimunização materna
· Passagem transplacentária da imunoglobulina IgG para o feto
· Destruição das hemácias fetais
· Ponto de vista clínico 
· Anemia
· Presença de icterícia nas primeiras 24 hs após o parto
· Hepatomegalia e esplenomegalia 
· Casos graves →insuficiência cardíaca 
· Morte intra-uterina
· Com ou sem hidropisia fetal (edema generalizado, petéquias, ascite e hepatomegalia e esplenomegalia acentuadas). 
· Profilaxia 
· Prevenção DHRN por imunoglobulina anti-D (Rh0Gan)
· Proteção 98% a 99%
· Administração até 72 horas após o parto
· Dose 300μg de anti-Rh (D) 
Isoeritrólise Neonatal Felina
Anemia hemolítica auto-imune (AHAI)
· Sobrevida eritrocitária encurtada devido a presença de auto-anticorpos.· Destruição acelerada das hemácias causada pela aderência de Acs à superfície que ativam respostas fagocíticas ou lise pelo sistema complemento.
· AHAI caracteriza-se por reações de hipersensibilidade do tipo II 
Como os Acs aderidos desencadeiam a destruição das hemácias? 
· Mecanismos de destruição dos Glóbulos vermelhos
· Aloanticorpos 
· Autoanticorpos 
· Intravascular:
· Ag x Ac + Complemento (C1aC9): hemoglobina livre
· Extravascular:
· Fagócitos SMF (baço e fígado): hiperbilirrubinemia 
· Classificação:
· AHI Primária (idiopatia)
· AHI Secundária 
· Imunoglobulinas mais freqüentes
· IgG ++++
· IgM +
· Gatos IgM +++
· Combinação: IgG, IgM e Complemento 
Anemia Hemolítica Imunomediada em cães
· Incidência 3 ou 4x maior em fêmeas
· Forma mais comum nos EUA – AHI Primária 40 a 75% dos casos
· Forma mais comum no Brasil – Não há pesquisas (porém acredita-se que a AHI secundária pode ter maior frequência em áreas endêmicas de doenças infecciosas associadas) 
· Raças: Collie, Poodle, Old English Sheepdogs, Setters e Cocker Spaniel possuem predisposição
· Idade média: entre 2 e 8 anos (porem relatos de 1 aos 13 anos).
Anemia Hemolítica Imunomediada em Gatos
· Sem predileção de sexo e raça
· Forma mais comum nos EUA – AHI Primária 40 a 75% dos casos
· Forma mais comum – AHI secundária 
· Forma primária considerada extremamente rasra 
· Em gatos ½ a ¾ dos casos é secundário a FeLV 
· Outras doenças relacionadas: hemobartonelose e linfoma
· Como se apresentam os pacientes com AHAI:
· Mucosas pálidas
· Taquicardia
· Taquipinéia 
· Coloração da urina alterada
· Hepatoesplenomegalia 
· Linfoadenopatia 
· Vômito e diarréia
· Febre
· Petéquias,equimoses, epistaxe (Síndrome de Evans)
· Dor articular (Lupus eritematoso)
· Lesões nas extramidades de membros, orelhas e cauda (AHI criopática)
· Poliúria e polidipsia (complicação renal)
· Hemograma
· Anemia moderada grave
· Macrocitose, Policromasia, anisocitose, reticulocitose 
· Esferocitose 
· Leucocitose
· Trombocitopenia (40 a 70% dos casos- Síndrome de Evans).
· AHI
· Resposta medular regenerativa intensa (30 a 60% dos casos)
· Moderada (25% dos casos)
· Inicialmente anemia não-regenerativa (15 a 35%) 
· Forma verdadeiramente não regenerativa
· Achado transitório intervalo de tempo entre a crise hemolítica e resposta medular (4 a 7 dias). 
· Forma verdadeiramente arregenerativa da AHI destruição imunomediada dos precursores eritróides na medula.
· Bioquímica
· Hiperbilirrubinemia (hemólise intensa)
· Hemoglobinemia (intravascular)
· Diminuição da haptoglobina (intravascular)
· Urinálise 
· Bilirrubinúria 
· Hemoglobinúria (intravascular)
· Plano Diagnóstico
· Nenhum teste isolado é definitivo
· Presença de esferócitos (60 a 87%)
· Autoaglutinação 
· Coomb’s positivo
· Teste de fragilidade eritrocitária
· Descartar:
· Hematozoários 
· Hemoparasitos 
· Lupus 
Teste de aglutinação direta (aglutinação imunomediada)
· Positiva em 50 a 65% dos casos
· Em um tubo de coleta (EDTA ou sem anticoagulante) coloque partes iguais de sangue (EDTA) e soro fisiológico – ambos à temperatura ambiente
· Homogenize e coloque uma gota desta solução entre lâmina e lamínula.
· Observe em microscópio com aumento de 10x a formação ou não de cachos de uva (=aglutinação)
· Se houver aglutinação, faça uma lavagem das hemácias (3x- dilui em salina, centrifuga, retira o sobrenadante) e repete o procedimento para confirmar a aglutinação
· Se não há aglutinação ou o resultado do teste é obscuro. O passo seguinte é realizar o teste de Coomb’s.
Teste da fragilidade eritrocitária
· 85% dos cães terão o teste positivo
· Cães:
· Coloca-se 5 gotas de sangue (250l) em um tubo de centrifugação com 3ml de salina a 0,9% e 2ml de água destilada
· Em outro tubo (controle) coloca-se 5 gotas de sangue e 5 ml de salina a 0,9%
· Incuba ambos por 5min à T.A e centrifuga-se
· O tubo controle não pode ter hemólise, enquanto o tudo teste será positivo se for visualizada hemólise no sobrenadante 
· Gatos:
· Para gatos a fragilidade das hemácias é menor, portanto, o teste deve ser modificado.
· Use 5 gotas de sangue em 5ml de salina a 0,9% e 2ml de água destilada
· No controle use 5 gotas de sangue e 7ml de salina a 0,9%
· O restante do procedimento é igual ao descrito para cães.
· Tratamento
· Animal internado até melhora da crise hemolítica aguda
· Animais crônicos com hemólise extravascular podem ser tratados em casa
· Repouso absoluto
· Esplenectomia em último caso
· Medicações
· Tratar a causa primária quando houver
· Fluidoterapia 
· Transfusões
· Corticosteróide: prednisona 2 a 1 mg/Kg/BID por 2 a 4 semanas melhora diminuir para 1 mg/Kg/SID 2 a 4 semanas estabilizando 1 mg/Kg/48 h por 2 a 4 semanas
· Drogas citotóxicas se a auto-aglutinação ou pobre respostaa corticoterapia 
· Azatioprina (Imura) 2mg/Kg/24 h 
· Ciclofosfamida 50 mg/m2 
· Clorambubucil 2 mg a cada 3 dias (gatos) 
· Precauções
· Monitorização 
· Prognóstico
· Doença hiperaguda – acima de 80% de mortalidade
· Autoaglutinação – acima de 50% de mortalidade
· OBS.:
· Estudos relataram a incidência de AHI combinada com TI em 20% dos casos e Lupus em 17% dos casos, sugerindo que se deve buscar o diagnóstico dessas duas outras doenças quando deparando-se com suspeita de anemia hemolítica
· Em alguns casos de AHAI, a esplenectomia é indicada para a diminuição do seqüestro de células opsonizadas e a corticoterapia, para a diminuição de auto-anticorpos.
· O baço representa um sítio de eritropoiese extramedular, e a esplenomegalia pode estar relacionada a isto. Recomenda-se fazer um exame de citologia aspirativa do órgão para verificar se há eritrofagocitose excessiva e só então prosseguir com a operação que visa diminuir a hemocaterese e a produção de Acs. Considere este procedimento em animais refratários ao tratamento.
Caso clínico
· Resenha: cão, macho, 3 anos, SRD
· Histórico: colúria, prostração, febre há 3 dias,
· Havia recebido transfusão de sangue e aplicação de dipropionato de imidocarb 
· Exame físico: prostração, mucosas perláceas e ictéricas, hepato e esplenomegalia acentuadas, hipertemia (39,70C)
· Exames solicitados: hemograma, contagem de plaquetas, urinálise, função renal e hepática (valores normais), ultrassonografia abdominal 
· Diagnóstico: anemia arregenerativa com presença de esferócitos 
· Tratamento: prednisona (2mg/Kg cada 12 h) 
· Acompanhamento: reticulositose insuficiente p/ recuperação dos valores eritróides, hemácias normocíticas normocromicas, diminuição progressiva do hematócrito, manutenção da trombocitopenia 
· No 100 dia realizou-se mielograma, que revelou hipoplasia celular discreta (hipoplasia eritróide).
· Teste direto de coomb’s negativo
· Após estes resultados adicionou-se ao tratamento: azatioprina 2mg/Kg a cada 24 h e ciclofosfamida (50mg/m2 a cada 48 h)
· Exames seguintes: resposta medular c/ reticulositose e eritrorregeneração, com gradativa correção dos valores eritóides e número de plaquetas circulantes.
· A partir do 500 dia iniciou-se redução gradativa da terapia imunossupressora ( 10 suspensão da ciclofosfamida e gradualmente da predinisona e azatioprina).
· No 750 alta 
Transfusão Sanguínea - Indicações
Imunologia Veterinária 
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HEMATOLOGIA VETERINÁRIA
 
Histórico
 
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A primeira complicação, que se tem registro, referente a transfusão ocorreu em 1492, quando o Papa 
Inocêncio VIII, portador de doença renal crônica, recebeu o sangue de 
três jovens rapazes para a cura de sua 
enfermidade, vindo a falecer todos os três doadores.
 
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No século XVII, em Paris, foram realizadas as primeiras transfusões de animais em seres humanos, 
aparentemente sem problemas, num total de quatro pacientes.
 
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Todavia
 
ao transfundir um quinto paciente pela segunda vez, descreveu o que podemos considerar atualmente 
como a primeira reação hemolítica transfusional da medicina.
 
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Paris baniu o uso de transfusões, sendo o ato endossado pelo Parlamento Francês, pela Sociedade 
de Medicina 
da Inglaterra e pelo Papa. Dessa forma, a transfusão de sangue ficou noesquecimento até o início do século 
XIX, havendo alguns relatos esporádicos nesse período. 
 
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Em 1818 foi constado a impossibilidade de transfusões entre diferentes animais 
e postulou que somente o 
sangue de humanos poderia ser utilizado em humanos.
 
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A trajetória para uma técnica de transfusões de sangue eficiente e segura foi difícil, porém foram feitos muitos 
progressos. 
 
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1900 
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Grupo ABO, por Landdsteiner 
 
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1902 
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Costello e Sturli 
 
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Devido a Segunda Guerra Mundial levou a ocorrência diária de transfusões e com isso numerosos grupos 
sangüíneos foram descobertos.
 
 
Conceito
 
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É uma disciplina complexa e está relacionada a outras ciências biológicas, como imunologia, hem
atologia, 
genética, biologia molecular e bioquímica.
 
 
Importância
 
 
 
 
 
 
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