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Visão Geral Baseado na comparação das sequências nucleotídica de RNAr, os seres vivos são classificados em 3 domínios: Bacteria, Archaea e Eukarya. Vale ressaltar que os domínios Bacteria e Archaea possuem vária semelhanças, dentre elas, ambos são células procarióticas e não possuem um núcleo organizado, porém eles se diferenciam na composição química do RNAr, na composição da membrana plasmática e na resistência aos antimicrobianos. A célula procariótica Principais Características: → Tamanho diminuto (0,2 a 10 µm). Vale ressaltar que alguns procariotos, como Epulopiscium fichelsoni, são muito grandes, e apresentam células com mais de 600 mm. Além disso, o maior procarioto conhecido é o quimiolitotrófico sulfuroso Thiomargarita com cerca de 750 mm de diâmetro; → Ausência de organização nuclear (possui material genético, porém ele fica armazenado numa região do citoplasma conhecida como nucleoide) → Um único cromossoma. (possui uma única cópia da molécula de Dna que vai transferir as características no genoma) → Reprodução por fissão binária (ocorre a divisão do organismo ao meio, originando outro ser idêntico ao que foi dividido) Diferenças entre as células procarióticas e eucarióticas Estrutura de Superfície das Células Bacterianas Cápsula Polissacarídica: → Revestimento externo com finalidade de aderência, aumento da resistência microbiana, aumento da capacidade invasiva da bactéria. Flagelo → Muitos procariotos são capazes de deslocar-se por movimento natatório, devido à presença de uma estrutura denominada flagelo. O flagelo atua por rotação, empurrando ou puxando a célula por meio de um meio líquido. → Os flagelos bacterianos são apêndices longos e finos, apresentando uma extremidade livre e outra extremidade ligada à célula. → Partes: corpo basal (motor do flagelo), gancho e filamento helicoidal. Gram Positivas: um par de anéis. Gram negativas: dois pares de anéis. → Tipos: Peritríqueo - o flagelo está em toda superfície Monotríqueo e polar - há um único flagelo em um polo Lototríqueo e polar - há um tufo em uma das extremidades Anfitríqueo e polar - os flagelos estão em ambas as extremidades → O flagelo é composto por diversas proteínas e é ancorado na parede celular e na membrana citoplasmática. Em bactérias, o filamento flagelar é constituído da proteína flagelina e rotaciona com a energia fornecida pela força próton-motiva. O flagelo de arqueias e bactérias difere na estrutura e na forma como a energia é acoplada à rotação. Filamentos axiais ou Endoflagelos → Confere motilidade para as espiroquetas → As espiroquetas são feixes de fibrilas que se originam nas extremidades das células, sob uma bainha externa; Fímbrias → Mais numerosas, estão envolvidas com adesão a superfícies → Ajudam bactérias patogênicas a aderirem às células superficiais do trato respiratório, intestinal ou geniturinário, facilitando a colonização no nincho. Ex: Neisseria gonorrhoeae. Estão relacionadas também com a adesão à materiais inertes e envolvidas com a formação de biofilmes. → Bactérias que não possuem fímbrias são facilmente expelidas pelo muco no trato respiratório. E. coli é responsável por 90% dos casos de infecções urinárias, sem as fímbrias, não causa doenças. Pilus (conjugação – troca de material genético) → Responsável pela transferência de Dna de uma célula doadora para outra receptora. → São finos, visíveis na microscopia eletrônica. Morfologia das Células Procarióticas Cocos: → Arranjo/grupamento: contato físico, sem união química → Diplococos (2), Tétrade (4), Sarcinas (8), Estreptococos(fileira), Estafilococos (cachos de uva) Bacilos → Dividem-se em um plano, no menor eixo → Mais comum de forma isolada → Diplobacilos (2), Estreptobacilos (cadeias), Cocobacilo (bem pequenos, nem tão redondos, nem tão cilíndricos. Ex. E. coli) Bactérias Espiraladas → Podem formar pares ou aglomerados → Vibrião(vírgula), Espirilo, Espiroqueta (possui mais ondulações curtas) Parede Celular Principais Características: → Externa à membrana celular, semi-rígida → Mantém a forma característica da célula → Protege contra a lise osmótica e alterações adversas do ambiente → Ancoragem de apêndices bacterianos (flagelo) → Sítio de ação de lisozimas e de alguns antibióticos → As diferenças permitem agrupá-las em Gram positivas ou Gram negativas → Composição química da parede celular: peptídeoglicano ou mureína (açúcares ligados a aminoácidos) Parede Celular das Micobactérias: → Parede celular rica em lipídeos (ácido micólico), que evita a penetração de diversos corantes. → Possui alta complexidade, o que causa um lento crescimento, resistência a antibióticos, evasão do sistema imune e etc. → Etapas da coloração a quente ou coloração de Ziehl-Neelsen (aquecimento permite a penetração do corante). Assim, a parte rica em lipídeos adquire um tom avermelhado e o resto da lâmina fica em tom azulado. Bactérias Sem Parede Celular → Esteróis intercalados na membrana externa → Pleomórficas, muito pequenas (0,1-0,25µm) → Sensível à pressão osmótica → Resistente às penicilinas Formas bacterianas que perderam a parede celular ou Formas-L → Resultado da ação de: o Enzimas líticas da parede celular, ex.: lisozima o Antibióticos que agem na síntese de peptídeoglicano, ex.: penicilina → Usualmente imóveis → Esferoplastos: célula com parte da membrana externa. Efeito da lisozima em Gram negativas. → Protoplastos: célula perde a parede e permanece protegida pela membrana citoplasmática. Efeito da lisozima em Gram positivas. Estrutura da Parede Celular Composição: rede macromolecular de peptidoglicano (PG), mureína ou mucopetídeo: → Dissacarídeo repetitivo unido por polipeptídeos, formando rede que circunda a célula → Formado por dois açúcares (N-acetil glucosamina - NAGe N-acetil murâmico- NAM) e aminoácidos (alanina, glutamina, lisina, ácido diaminipimélico-DAP) → Apresenta pontes interpeptídeas (pentaglicina) que conectam as cadeias laterais de aminoácidos. → A parede celular das bactérias gram positivas são alvos da ação de antibióticos Classificação das bactérias pelo método de Gram Gram Positivas → Camada de peptídeoglicano grossa e ácidos teicoicos → Ácidos teicoicos e lipoteicoico presentes: o Polímeros aniônicos de carboidratos, 60% da massa da parede celular o Carga negativa contínua à parede e regulam a entrada de cátions na célula o Importantes antígenos o Sítio receptor de bacteriófagos o Sítio de ligação com epitélio do hospedeiro Gram Negativas → Camada de peptídeoglicano fina → Periplasma: gel que contém camada de PG fina → Membrana externa: bicamada lipídica que contém lipopolissacarídeo (LPS) ou endotoxina, lipoproteínas e porinas Coloração pelo Método de Gram É utilizado um corante (cristal violeta) para fazer a diferenciação das bactérias. No método, é de suma importância o uso do álcool diferenciador que descora as bactérias gram negativas, pois o álcool permeabiliza a membrana lipídica, então dissolve e retira o corante da parede das bactérias (parede fina, não consegue reter a coloração). Sendo assim, as Gram positivas mantêm a coloração ficando em um tom de violeta e as Gram negativas perdem a cor e adquirem a coloração do contracorante (rosa). Estrutura Internas a Parede Celular Membrana Citoplasmática → Usualmente envolvida pela parede celular e às vezes por uma camada externa adicional → Estrutura delgada que envolve o citoplasma da célula. → Seu citoplasma possui ribossomos, DNA, grânulos e vesículas → Funções: o Barreira altamente seletiva para entrada e saída de substâncias o Produção de energia: bombeamento de prótons e síntese de ATP o Biossíntese de precursores de parede celular: lipídeos, peptídeoglicano, lipopolissacarídeos,polissacarídeos o Duplicação de DNA: enzimas localizadas na membrana o Secreção: de enzimas, toxinas → Composição química: o Bicamada fosfolipídica (porções hidrofóbicas – ácidos graxos; porções hidrofílicas – glicerol) o Proteínas - Sem esteróis (exceto bactérias metanotróficas – utilizam metano e micoplasmas). As periféricas estão associadas a um dos lados da membrana e tem função estrutural e enzimática, já as integrais ou transmembranares possuem atuam como poros, transporte e como estrutura. o OBS: Membrana de Archaea: monocamada lipídica, mais rígida (resistente a rupturas). → Transporte Passivo: Substâncias atravessam a membrana a favor do gradiente de concentração (sem gasto de ATP) o Difusão simples: moléculas pequenas buscando o equilíbrio. Ex: O2 e CO2 o Difusão facilitada: ajuda de proteínas de área de alta concentração para de baixa concentração (transportador específico ou não); o Osmose: movimento de moléculas de solvente. Ex: H20 o Pressão Osmótica: pressão necessária para interromper o fluxo de água através da membrana (manter o equilíbrio). → Transporte Ativo: Substâncias atravessam a membrana contra o gradiente de concentração (uso de energia) o Transporte ativo simples: a célula utiliza energia na forma de força próton motiva, de ATP, ou outro composto de alta energia, para mover substâncias através da membrana. o Translocação de grupo (fosforilação): modificação química da substância transportada, promovida pelo fosfoenolpiruvato (PEP) – fosfato de alta energia. Exclusiva de procariotos. Ex: transporte de glicose, manose e frutose. Citoplasma → Contem cerca de 80% de água, além do ácido nucléico, proteínas, carboidratos, lipídios, íons inorgânicos. Ribossomos → Partículas densas, dispersas no citoplasma que servem como locais de síntese proteica → São compostos por duas subunidades, cada uma consistindo de proteína e de r-RNA - 70S (30S + 50S) → Alvo para antibimicrobianos que atuam inibindo a síntese proteica; Inclusões → Depósitos de reserva acumulados no citoplasma da célula o Grânulos metacromáticos: constituídos de polifosfato – reserva de fosfato inorgânico que pode ser usado na síntese de ATP; o Grânulos polissacarídicos: compostos de glicogênio e amido; o Grânulos de enxofre: reserva de energia para bactérias que obtêm energia oxidando enxofre e compostos contendo enxofre; o Vacúolos de gás: cavidades ocas encontradas em muitos procariotos aquáticos, incluindo cianobactérias; o Magnetossomos: inclusões de óxido de ferro, que atuam como ímãs Esporos → Células metabolicamente inativas (não está captando nutrientes e não está reproduzindo), que podem sobreviver a temperaturas extremas, falta de água, exposição a substâncias químicas tóxicas e radiação; → Endósporos – esporos que se formam dentro das células; o Possuem parede celular espessa e são altamente refrateis (não conseguem ser coradas facilmente) o São facilmente dispersos pela ação do vento, da água ou por meio do trato gastrintestinal de animais; o Encontradas no solo – Bacillus spp., Clostridium spp. o Induz o ácido dipicolínico (cerne) formar o dipicolinato de cálcio para proporcionar a redução da disponibilidade de água no interior do endósporo, auxiliando a desidratação e além disso, inserção entre as bases de DNA, estabilizando contra a desnaturação térmica
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