Cromatografia - Fitoquimica

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Cromatografia
Os princípios da Cromatografia buscam saber:
Quais são as substâncias presentes numa amostra?
A substância é capaz de ser medida diretamente na amostra?
Quanto há nessa mistura?
Os métodos cromatográficos são utilizados para separar, identificar e/ou quantificar uma substância.
Através da cromatografia então pode identificar o componente, quantificar um componente e separar na amostra. 
A cromatografia incialmente foi desenvolvida para separar pigmentos das plantas: como os diversos pigmentos da clorofila.
Utilizava-se um eluente como fase móvel e um carbonato de cálcio como fase estacionária e dessa forma se obtinha os pigmentos separados em diversas fases estacionárias. 
Conceito de Cromatografia
Conjunto de técnicas utilizadas para separar diferentes compostos químicos de uma mistura através de uma diferença de interação dos seus componentes entre duas fases. 
Fase estacionária: fase que se mantém fixa 
Fase móvel: Fase que transporta as amostras através da fase estacionária 
Quantificação: Pode se fazer o uso de padrões para quantificar os compostos presentes na amostra em um processo cromatográfico. 
Classificação dos métodos cromatográficos
São classificados de acordo com: Tipo de suporte, fase móvel e o objetivo da separação
Tipo de suporte: 
- Coluna: Fase estacionária em um tubo cilíndrico (CCClássica, CLAE)
- Planar: Fase estacionária depositada em superfície plana (CCD e C em papel)
Fase móvel:
- Cromatografia Gasosa 
- Cromatografia líquida 
Objetivos da separação: Analítica ou preparativa
- Analítica: informações referentes ao perfil cromatográfico da amostra 
- Preparativa: Objetiva separar os compostos (pode se utilizar HPLC ou CCD)
Mecanismos de separação
São 4: Adsorção, Partição, Troca Iônica e Exclusão por tamanho. 
Adsorção: é o mais importante e o mais utilizado, ocorre através de atrações eletrostáticas ou dipolares nas superfícies da fase estacionária sólida. É um fenômeno de superfície que vai causar uma diferençar de interação ao longo da análise cromatográfica. 
	Pode ser de Fase normal (CCD ou CCC) ou Fase reversa (HPLC)
Partição: É a diferença de solubilidade das moléculas ou seja entre os componentes da mistura e o liquido no suporte sólido. (cromatografia em papel)
Troca Iônica: O íon da amostra se liga á carga fixa (grupo funcional) da fase estacionária, e ocorre as interações que vai depender das cargas elétricas das moléculas e da fase estacionária que assim vai ocorrer a separação por troca iônica
Exclusão por tamanho: As moléculas serão separadas por tamanho molecular, moléculas que possuem tamanhos diferentes vão sair na coluna em momentos diferentes 
Princípios da Cromatografia liquida
Fase móvel: é um liquido chamado de eluente, solvente ou solvente orgânico 
Fase estacionária: é um sólido ou um liquido 
Amostra: substâncias dissolvidas no eluente que interagem com a fase estacionária. Precisam necessariamente dissolver em solventes na fase móvel para poder ocasionar a separação cromatográfica. 
Sílica de fase normal – Polar – útil para separar compostos de fase apolar 
Geralmente são mais baratas que a fase reversa 
A sílica possui grupos silanois que confere característica polar
Possui interação mais fortes com compostos polares sendo ideal para separação de compostos apolares, porque ela não interage tanto com a molécula apolar, permitindo que ela atravesse o processo cromatográfico 
 
Sílica de fase reversa – apolar
 
A maioria das colunas cromatográficas de HPLC utiliza sílica de fase reversa 
Exclusão Molecular
Sephadex: fase estacionaria 
Cromatografia Liquido Planar