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ROTEIRO DE AULA PRÁTICA: AULA 1
Data: 19/08/2021
	Unidade de Ensino: UNIASSELVI
	Assunto:AULA PRÁTICA DE COLORAÇÃO DE GRAM
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Carga Horária da Prática: 2 dias
	Objetivos: Ver na prática o processo de preparo de lâminas, coloração de Gram., a sua relação com a constituição química da parede celular e como se distinguir micro-organismos gram-positivo de gram- negativo estafilo de estrepto e coco de basilo.
A Acadêmico: NILDA MAURINA PATRICIO
MATRÍCULA: 2567920 
PROFESSORA: ANGELA TOMAZI 
	Metodologia (p. ex. análise macro e microscópica do sistema digestório; Extração do DNA do morango; etc.): COLORAÇÃO DE GRAM.
	Materiais Utilizados:
 
No laboratório virtual de microbiologia realizamos os procedimentos de 
Preparação de lâminas com microorganismos para fazer a coloração de gram:
• Microscópio;
 • Lâminas; 
• Acendedor; 
• Espátula; 
• Bico de Bunsen; 
• Pinça metálica; 
• Pissetas; 
• Soro fisiológico;
 • Óleo de imersão; 
• Lugol; 
• Violeta de genciana;
• Álcool etílico; 
• Fucsina.
	Procedimento realizado: 
 Inicialmente, goteje o soro fisiológico na lâmina. Feito isso, utilizando a alça inoculadora retire uma pequena porção da amostra biológica que será examinada. Abra a válvula do bico de Bunsen e ajuste a chama azul. Passe a lâmina sob a chama para ficar o material.
1. Em uma lâmina, contendo esfregaço seco, cubra-o pingando gotas de violeta-de-metila e deixe agir por 1 minuto;
2. Adicione água ao esfregaço, em cima do violeta-de-metila, cobrindo toda a lâmina. Deixe agir por mais 45 segundos;
3. Após o tempo corrido, escorra o corante e lave o esfregaço em um filete de água corrente. Cubra a lâmina com lugol e deixe por 1 minuto;
4. Escorra todo o lugol e lave em um filete de água corrente;
5. Aplique álcool etílico/acetona, para descorar a lâmina por 10 a 20 segundos;
6. Lave em um filete de água corrente;
7. Cubra toda a lâmina com Fucsina e deixe corar por aproximadamente 30 segundos;
8. Lave a lâmina em um filete de água;
9. Deixe a lâmina secar ao ar livre;
10. Observe a lâmina no microscópio com objetiva de imersão de (40x)
11. Aplique uma gota de óleo de imersão sobre o esfregaço e observe no microscópio com objetiva de imersão (100 X)
· 
 
 A técnica d e Gram. ou coloração de Gram. é uma técnica de coloração de preparações histológicas para observação ao microscópio óptico (Pelczar Jr, 1996) descoberta em 1884, quando Hans Cristian Joaquim Gram observou que as bactérias, depois de serem coradas com um conjunto de corantes adquiriam coloração diferente, então ele denominou as coradas na cor roxa de gram. - positiva e as coradas na cor rosa ou vermelho de gram.- negativa (Soares1993). Este fato ocorre devido à presença em grande quantidade do proteoglicano na parede celular das bactérias gram positivas que se ligam ao corante primário que é cristal de violeta: cora o citoplasma de púrpura, independentemente do tipo de célula em seguida aplica a solução de iodo que aumenta a afinidade entre o violeta de cristal e a célula e forma com o corante um complexo insolúvel dentro da célula depois vem um agente descolorante que são o álcool, acetona ou ambos que são solventes lipídico. Desta forma, o complexo cristal violeta -iodo (C V I) pode ser retirado e as bactérias Gram- negativas são descorada se a parede celular das bactérias gram-positivas, em virtude de sua composição diferente, torna-se desidratada durante o tratamento com álcool-acetona, a porosidade diminui, a permeabilidade é reduzida e o complexo CVI não pode ser extraído então por último o contrastante – fucsina básica: cora o citoplasma de vermelho das células descoradas (gram-negativas). Ribeiro 1993.
 
	EPI (Equipamento de Proteção Individual):Selecione os EPIs necessários para a realização do ensaio. Nesse experimento, é obrigatório o uso de jaleco, luvas, óculos de proteção e máscara 
 RESULTADO:
1. Analisando a coloração obtida na primeira lâmina, é possível determinar se o resultado é Gram positivo ou negativo? Caso seja possível, classifique justificando a resposta:
2. Qual objetivo de realizar o experimento em 3 lâminas? O que se espera observar?
Nas observações das lâminas pudemos ver diferentes organizações das 
bactérias, tanto quanto a forma como quanto ao arranjo. 
Na lâmina das bactérias cultivas na placa de petri no meio seletivo se 
pode perceber que as mesmas eram Gram –positivas pois apresentavam coloração 
roxa característica justificada devido ao corante cristal de violeta impregnado na 
parede celular com organização quanto ao arranjo eram estafilos (formato de cachos de uva) e formato celular coco (esférica ), portanto eram do tipo Estafilococos. 
Na lâmina preparada a partir da cultura na placa de petri no meio sólido 
diferencial se obteve o resultado de bactérias quanto ao arranjo estrepto 
(segmentado) e quanto ao formato celular de bacilos (alongado ), portanto 
encontrado as bactérias estreptobacilos e com coloração rosa caracterizando -as 
como Gram -negativas.	
	
CONCLUSÃO: 
Com isto conseguimos o preparo , fixação e coloração dos esfregaços 
como também ver as bactérias tanto Gram- positivo e Gram- negativo como também 
diferentes arranjos das bactérias que foram estrepto e estafilo e a forma das células 
bactérias cocos e bacilos, juntando estas classificações distinguimos as bactérias 
estafilococos e estreptobacilos e não obtivemos sucesso em um preparo com meio 
de cultura de enriquecimento em tubo de ensaio. 
 
Assinatura do acadêmico
Assinatura do tutor
 NILDA MAURINA PATRICIO