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COLORAÇÃO DE GRAM Trata-se de um procedimento de extrema relevância na caracterização e classificação inicial de bactérias. Através desse método é possível que as bactérias sejam visualizadas no microscópio óptico . Definição O método de Gram possui essa denominação em homenagem ao patologista dinamarquês Hans Christian J. Gram autor desta descoberta em 1884, sendo atualmente a técnica mais utilizada em laboratórios de microbiologia e análises clínicas. Origem Príncipios da Coloração O procedimento permite que as bactérias retenham a cor baseada nas propriedades químicas e físicas da parede celular, possibilitando um aumento no contraste evidenciando a estrutura da bactéria. Etapas do procedimento Coloração com violeta de cristal (um corante em água, roxo) Descoloração (utilizando etanol/acetona) Contra-coloração (utlizando corante Safranina, vermelho) TORTORA, G.J., FUNKE, B.R., CASE, C.L. Microbiologia,10ª Ed. Porto Alegre: Artmed, 2012. 967p. BACTÉRIAS GRAM POSITIVAS E GRAM NEGATIVAS As bactérias Gram-negativas adquirem coloração vermelha quando se usa esse processo. Bactérias Gram-negativas As bactérias Gram-negativas estão envoltas por uma cápsula protetora, uma fina camada de peptídeoglicano no espaço periplasmático e uma membrana externa – bicamada lipídica que contém lipopolissacarídeos/endotoxina (LPS), lipoproteínas e porinas. Estrutura Bactérias Gram-positivas As bactérias Gram-negativas e Gram- positivas têm a coloração diferente porque suas paredes celulares são diferentes. Elas também causam tipos diferentes de infecções e tipos diferentes de antibióticos são eficazes contra elas. Diferenciação As bactérias que durante o processo químico adquirem coloração azul são chamadas bactérias Gram-positivas. Estrutura As bactérias Gram-positivas possuem uma espessa camada de peptidoglicano (polímero constituído por açúcares e aminoácidos que originam uma espécie de malha na região exterior à membrana celular das bactérias) em suas paredes celulares. Não apresentam resistência a penicilinas ou cefalosporinas (antibióticos que atuam na lise da parede celular) Essa cápsula ajuda a evitar que os glóbulos brancos do sangue (que lutam contra infecções) ingiram as bactérias. Sob a cápsula, as bactérias Gram-negativas têm uma membrana externa que as protege contra certos antibióticos, como a penicilina. As bactérias gram-positivas retém o corante púrpura e o iodo, eles penetram na parede celular (que, possui uma camada espessa de peptídeoglicano) e o álcool não consegue remover o corante da mesma. Por esse motivo, não sofrem modificação ao serem contracoradas com a fucsina ou safranina. Coloração de Gram Bactérias gram-negativas, a lavagem com o álcool consegue romper a camada externa (LPS) que esse grupo possui e com isso, remove o corante púrpura das células (a camada de peptídeoglicano das gram – é delgada, o que facilita a ação do agente descolorante). Assim, as gram-negativas se tornam incolores e depois são contracoradas com o a fucsina ou safranina, adquirindo a cor rosa. Coloração de Gram Escherichia, Helicobcater, Hemophilus, Neisseria, Klebsiella, Enterobacter, Chlamydia, Pseudomonas, Salmonella, Shigella. Exemplos: Gram- negativas Exemplos: Gram- positivas Bacillus, Nocardia, Clostridium, Propionibacterium, Actinomyces, Enterococcus, Cornyebacterium, Listria, Lactobacillus, Gardnerella, Mycoplasma, Staphylococcus, Streptomyces, Streptococcus. TORTORA, G.J., FUNKE, B.R., CASE, C.L. Microbiologia,10ª Ed. Porto Alegre: Artmed, 2012. 967p.
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