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RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS: BIOQUIMICA HUMANA NOME: Bárbara Navarro Lacerda Lins MATRÍCULA: 01469044 CURSO: Estética e cosmética POLO: PE- uninassau (PATTEO OLINDA SHOPPIONG) RELATÓRIO: 1. Resumo sobre o tema abordado em aula. A Amilase Salivar ou ptialina é uma enzima da saliva que, em pH neutro ou ligeiramente alcalino, digere parcialmente o amido e converte- o em maltose. Para o experimento foram identificados 3 tubos (AA1, AA2 e AA3). Num Erlenmeyer foi adicionado 30 ml da solução de ami do a 1% e 3 ml de HCl 1 :2, homogeneizou-se. Em cada tubo foi adicionado 5ml de água destilada, 5 ml da solução do Erlenmeyer (amido +HCL). O tubo AA1 foi levado imediatamente à geladeira, o tubo AA2 foi deixado 10 minutos em banho de água fervente e depois levado a geladeira e o tubo AA3 foi deixado 20 minutos em banho de água fervente e após levado a geladeira. Após 2 minutos os tubos foram tirados da geladeira e quando em temperatura ambiente adicionou-se 5 gotas de lugol em cada tubo e homogeneizou-se. 2. Materiais utilizados. Amilase salivar Solução de HCL 0,1M 6 Tubos de ensaio Bacia plástica com gelo Banho maria para laboratório Proveta Pipeta Matraz Erlenmeyer Matraz aforado Pera de borracha Estante para tubo de ensaio 3. Responda as Perguntas: A) Qual a composição do amido? O amido é um carboidrato formado por dois polissacarídeos, amilose e amilopectina, que são constituídos de moléculas de glicose. B) Comente os resultados obtidos nos tubos 1, 2 e 3 no procedimento da hidrólise química do amido. O tubo 1 que ficou no banho de gelo, foram adicionadas 5 gotas da solução de lugol a 2% observou-se que não houve a hidrólise, ainda tendo presença de amido após o banho de gelo, após alguns minutos foi possível observa a solução clareando ocorrendo a degradação do amido. O tubo 2 após 10 minutos em banho maria e 1 minuto em banho de gelo, foram adicionadas 5 gotas de lugol a 2%, não conseguimos observar mudanças na solução, não havendo degradação do amido, indicando que a temperatura influencia na reação química. O tubo 3 após 20 minutos no banho maria e 1 minuto em banho de gelo, foram adicionadas 5 gotas de lugol a 2% que deixou a solução de coloração azulada indicando a presença de amido. C) Qual o objetivo do uso de HCl, aquecimento e resfriamento no procedimento da hidrólise química do amido? O uso do ácido clorídrico favorece a hidrolise do amido, ao se misturar produz glicose como produto final. Essa reação é dada por um tempo curto de aquecimento e depois resfriamento com uso de gelo. Depois de feito esse procedimento com ácido clorídrico, podemos seguir para realizar testes conforme busca descobrir. D) Descreva a sequência de transformações operadas pela amilase na molécula da amilose. a amilose quando suas partes de glicose são unidas por ligações -1,4, formando um polímero de cadeia linear a amilopectina polímera de estrutura molecular complexa onde suas unidades glicosídicas são encontradas unidas por ligações -1,4 e -1,6. O amido contém em torno de 20% de amilose e 80% de amilopectina. E) Comente os resultados obtidos nos tubos 1, 2 e 3 no procedimento da hidrólise enzimática do amido. O tubo 1 que ficou no banho de gelo, foram adicionadas 5 gotas da solução de lugol a 2% observou-se que não houve a hidrólise, ainda tendo presença de amido após o banho de gelo, após alguns minutos foi possível observa a solução clareando ocorrendo a degradação do amido. O tubo 2 após 10 minutos em banho maria e 1 minuto em banho de gelo, foram adicionadas 5 gotas de lugol a 2%, não conseguimos observar mudanças na solução, não havendo degradação do amido, indicando que a temperatura influencia na atividade enzimática. O tubo 3 após 20 minutos no banho maria e 1 minuto em banho de gelo, foram adicionadas 5 gotas de lugol a 2% que deixou a solução de coloração azulada indicando a presença de amido. F) Explique a relação entre a atividade da amilase salivar, o tempo de incubação da enzima com o amido e a variedade de cores observada no procedimento da hidrólise enzimática do amido. 4. Conclusão sobre a atividade catalítica da amilase salivar. A ação da enzima amilase depende de um PH ótimo, aproximado de 7,0 e a temperatura ideal para a ação dessa enzima está entre 35 e 40 graus. Acima de 40 graus a enzima sofre desnaturação ficando inativa e o tempo mínimo de contato com o amido deve ser de 1 0 minutos para que a enzima inicie a degradação. Quanto maior a degradação menor é a coloração azul. 0004 - Atividade catalítica da amilase salivar (liquidplatform.com) Microsoft Word - Identificação da ação català tica da enzima amilase salivar em solução de amido (researchgate.net) TEMA DE AULA: REAÇÃO DE SELIWANOFF (REAÇÃO PARA DISTINÇÃO ENTRE ALDOSES E CETOSES) RELATÓRIO: 1. Resumo sobre o tema abordado em aula. Os carboidratos aldoses e cetonas são monossacarídeos que possuem em sua estrutura pelo menos dois grupos hidróxi, sendo que os açúcares que possuem carbonila de aldeído são as aldoses e o que tem função cetona (grupamento carbonila no meio da cadeia, ou seja, num carbono secundário) são chamados de cetoses. 2. Materiais utilizados. Solução de selivanoff reativo Solução de HCL 0,1M Glicose 1% Frutose 1% 3 tubos ensaio Pera de borracha Pipeta Copo de Becker Matraz 3. Responda as Perguntas: A) Explique o princípio bioquímico do teste de Seliwanoff. O teste de seliwanoff é um teste que permite identificar aldoses de cetoses, esse teste é baseado no princípio de que, quando aquecidas, as cetoses sofrem desidratação mais rapidamente que as aldoses. B) Comente os resultados obtidos nos 3 tubos utilizados no procedimento, correlacionando com a presença ou não de aldoses e cetoses. https://fast.player.liquidplatform.com/pApiv2/embed/746b3e163a5a5f89a10a96408c5d22c2/b3f0b2d5e3c56cccfa06cd8dca47f126 https://www.researchgate.net/profile/Pedro-Veoso-2/publication/352724209_Identificacao_da_acao_catalitica_da_enzima_-amilase_salivar_em_solucao_de_amido/links/60d54343458515d6fbd6bec0/Identificacao-da-acao-catalitica-da-enzima-amilase-salivar-em-solucao-de-amido.pdf https://www.researchgate.net/profile/Pedro-Veoso-2/publication/352724209_Identificacao_da_acao_catalitica_da_enzima_-amilase_salivar_em_solucao_de_amido/links/60d54343458515d6fbd6bec0/Identificacao-da-acao-catalitica-da-enzima-amilase-salivar-em-solucao-de-amido.pdf Apenas o tubo contendo frutose ficou com a cor vermelha cereja com provando a existência de cetose. C) Explique qual o objetivo de utilizar um tubo apenas com água destilada. O tubo com água destilada serve para controle evidenciando que não houve contaminação cruzada originando um resultado falso positivo. Se o controle permanece inalterado significa que é possível confiar no resultado obtido com o experimento. O tubo com água serve como controle negativo D) Qual a função do ácido clorídrico (HCl) e da fervura aplicados no teste de Seliwanoff? O HCL provoca a desidratação do carboidrato para dar compostos furfurais que depois são condensados com resorcinol para formar um complexo vermelho e para que esse processo ocorra é preciso que haja energia no meio e essa energia vem da fervura. A função do HCL no teste de seliwanoff é de desidratar os carboidratos, para que isso aconteça é necessário que tenha energia e entre essa energia vem à fervura 4. Conclusão sobre a identificação de aldoses e cetoses utilizando o teste de Seliwanoff. O experimento de Seliwanoff é extremamente simples, prático e rápido para identificação da presença de cetoses em carboidratos. 0003 - Reação de Seliwanoff (para distinção entre aldoses e cetoses) (liquidplatform.com) https://www.fciencias.com/2016/10/20/teste-seliwanoff-laboratorio-online/TEMA DE AULA: PRECIPITAÇÃO POR ÁCIDOS FORTES E METAIS PESADOS RELATÓRIO: 1. Resumo sobre o tema abordado em aula. Uma proteína pode ser desnaturada por ação de alguns fatores externos, como, por exemplo, o calor, um meio altamente ácido ou a influência de um metal pesado. Foram utilizados 2 tubos de vidro identificados como: tubo 1 ácido forte e tubo 2 metal pesado. No tubo 1 foi adicionado 2ml de ovoabulmina e 1ml do ácido tricloroacético e observou-se a precipitação que o corre de imediato. No tubo 2 foi adicionado 2ml de ovoabulmina e 5 gotas do metal pesado acetato de chumbo 10% e observou-se a precipitação. 2. Materiais utilizados. https://fast.player.liquidplatform.com/pApiv2/embed/746b3e163a5a5f89a10a96408c5d22c2/54be7a11f91b26d71baa8586251d3bc5 https://fast.player.liquidplatform.com/pApiv2/embed/746b3e163a5a5f89a10a96408c5d22c2/54be7a11f91b26d71baa8586251d3bc5 https://www.fciencias.com/2016/10/20/teste-seliwanoff-laboratorio-online/ Ácido tricloroacético 20% Acetato de chumbo a 10% Ovo albumina 10% 2 tubos de ensaio Matraz aforado Pera de borracha Pipeta Estante para tubos 3. Responda as Perguntas: A) Comente os resultados obtidos no procedimento da precipitação do ovo albumina com ácido forte e metal pesado. Observou-se que a precipitação com ácidos é bem melhor do que com o metal pesado devido a capacidade de quebrar as ligações peptídicas melhor do que os metais pesados. Nos tubos se forma um líquido leitoso branco indicando a precipitação sendo que o líquido é mais leitoso com o ácido do que com o chumbo e no tubo com 2 formaram-se grumos. B) Qual a fundamentação teórica que explica o processo de precipitação das proteínas com ácidos fortes e metais pesados? Os ácidos fortes e os metais pesados alteram o PH da solução e fazem com que ocorram mudanças físico-químicas nas proteínas. Os cátions dos metais pesados (Pb, Hg, Ag, Cu), dentre outros, formam precipitados insolúveis de proteínas. Essa precipitação é mais intensa quando o pH está acima do ponto isoelétrico (pl). Isso porque, acima do pl, a carga líquida da proteína é negativa, favorecendo a interação com os cátions provenientes do sal. C) O que ocorreu com a ovo albumina para que ela formasse um precipitado insolúvel neste experimento? As moléculas proteicas desnaturadas precipitam porque o chumbo é in solúvel em água, os cátions do chumbo formam precipitados insolúveis de proteína. 4. Conclusão sobre a precipitação de proteínas por ácidos fortes e metais pesados. Com essa prática foi possível perceber que a precipitação de proteínas é muito mais eficaz com ácidos fortes uma vez que os cátions de metais pesados, no caso do Pb (chumbo), formaram precipitados insolúveis de proteínas (A solução contendo chumbo ficou com grumos e menos leitosa). 0007 - Participação por ácidos fortes e metais pesados (liquidplatform.com) Precipitação por sais de metais pesados e por ácidos fortes — UNIVERSIDADE FEDERAL DA PARAÍBA - UFPB LABORATÓRIO DIDÁTICO DE BIOQUÍMICA https://fast.player.liquidplatform.com/pApiv2/embed/746b3e163a5a5f89a10a96408c5d22c2/77fb5f773fe2757c76c5e6ba06b537ee http://plone.ufpb.br/ldb/contents/paginas/precipitacao-por-sais-de-metais-pesados-e-por-acidos-fortes http://plone.ufpb.br/ldb/contents/paginas/precipitacao-por-sais-de-metais-pesados-e-por-acidos-fortes TEMA DE AULA: PRECIPITAÇÃO FRACIONADA POR SOLUÇÕES SALINAS CONCENTRADAS RELATÓRIO: 1. Resumo sobre o tema abordado em aula. A Amilase Salivar ou ptialina é uma enzima da saliva que, em pH neutro ou ligeiramente alcalino, digere parcialmente o amido e converte- o em maltose. 2. Materiais utilizados. Ovo albumina 10% Sulfato de amônio concentrada Água 2 tubos de ensaio Pera de borracha Pipeta Matraz Copo de Becker 3. Responda as Perguntas: A) O que é “Salting out”, “Salting in” e camada de solvatação? quando adicionamos pequenas quantidades de sal a uma solução contendo proteínas, as cargas provenientes da dissociação do sal passam a interagir com as moléculas proteicas, diminuindo a interação entre elas. Consequentemente, temos um aumento da solubilidade da proteína no meio aquoso. A esse fenômeno dá-se o nome de "salting-in". já "salting-out"as moléculas de água, ocupadas em sua interação com os íons, deixam a estrutura proteica. Como consequência, temos maior interação proteína-proteína, diminuição da solubilidade em meio aquoso e, consequentemente, precipitação da proteína. . A água, que apresenta um grande poder de solvatação, passa a interagir com as duas espécies: as proteínas e os íons provenientes da dissociação do sal. Porém, a água apresenta maior tendência de solvatação de partículas menores. As moléculas de água, ocupadas em sua interação com os íons, deixam a estrutura proteica. B) Explique o princípio Bioquímico da precipitação de proteínas por adição de soluções salinas. Etapa inicial quando partimos de lisados celulares porque pode concentrar a proteína de interesses, embora tenha pouca especificidade, método utilizado para separar proteínas, este é um processo importante para separação de proteínas uma vez que a concentração de sal necessária para precipitação é diferente para cada proteína. C) Comente os resultados observados da precipitação da proteína por sulfato de amônio na presença e ausência da água, correlacionando com a solubilidade da proteína. O tubo B com água apresentou o resultado não se conseguiu perceber a formação desse precipitado. No tubo A com sulfato de amônio apresentou o resultado de precipitado esbranquiçado que demonstra a precipitação da proteína 4. Conclusão sobre a precipitação das proteínas por adição de sais neutros (soluções salinas concentradas) A ação da enzima amilase depende de um PH ótimo, aproximado de 7,0 e a temperatura ideal para a ação dessa enzima está entre 35 e 40 graus. Acima de 40 graus a enzima sofre desnaturação ficando inativa e o tempo mínimo de contato com o amido deve ser de 1 0 minutos para que a enzima inicie a degradação. Quanto maior a degradação menor é a coloração azul. 0006 - Precipitação fracionada por soluções salinas concentradas (liquidplatform.com) e-Aulas da USP :: Precipitação de proteínas pela adição de sal TEMA DE AULA: REAÇÃO DE BENEDICT (IDENTIFICAÇÃO DE AÇÚCARES REDUTORES) RELATÓRIO: 1. Resumo sobre o tema abordado em aula. O tema da aula aborda, nos levam a compreender como age o reagente de Benedict nos açucares redutores possuem grupos aldeídos ou cetonas livres ou potencialmente livres, sofrendo oxidação em solução alcalina de íons metálicos como o cobre. O teste de Benedict é geralmente usado para detectar a presença de açucares e açucares https://fast.player.liquidplatform.com/pApiv2/embed/746b3e163a5a5f89a10a96408c5d22c2/8fb443ea3c2fed45ac13ba599791c421 https://fast.player.liquidplatform.com/pApiv2/embed/746b3e163a5a5f89a10a96408c5d22c2/8fb443ea3c2fed45ac13ba599791c421 https://eaulas.usp.br/portal/video.action?idItem=15901 redutores, é usado na prática clínica para detectar a substância redutora presente na urina. 2. Materiais utilizados. Reativo de Benedict Glicose Sacarose Água 3 tubos de ensaio Pera de borracha Pipetas graduadas Banho maria Matraz Copo de Becker 3. Responda as Perguntas: A. Qual a composição do Reativo de Benedict? O Reativo de Benedict é uma solução de sulfato cúprico em meio alcalino com muitos íons OH, e pode ser preparado através do carbonato de sódio, citrato de sódio e sulfato cúprico. B. O que são açúcares redutores? são alguns carboidratos que apresentam uma estrutura que é uma hidroxila OH, e um dos carbonos que o C1 essa hidroxila consegue reagir com diversos íons principalmente metálicos C. Explique a fundamentação teórica do Teste de identificação de açúcares redutores com o Reativode Benedict. Teste de Benedict, é um reagente químico de cor azulada, desenvolvido para identificar a presenças de açucares e açucares redutores, incluindo glicose, galactose, lactose, maltose e manose. D. Comente os resultados observados no experimento relacionando com a identificação de açúcares redutores. após 5 minutos em banho maria com temperatura de 70° os tubos foram analisados, a água que foi o controle negativo, não teve nenhuma reação, sem mudança de cor. Na sacarose não ouve redução nem reação entre os íons, indicando que a sacarose não é um carboidrato redutor, ele não tem a hidroxila. Na glicose foi possível perceber uma modificação de cor esverdeada indicando redução dos íons, havendo reação do cobre, não havendo formação do oxido cuproso. E. Exemplifique algumas aplicações deste teste na área clínica. É um teste qualitativo ou quantitativo? Este teste é usado na prática clínica para detectar a substância redutora presente na urina O Teste de Benedict é um teste semiquantitativo. Quando o açúcar está presente em diferentes concentrações, diferentes cores são desenvolvidas, um tom azul quando negativo, verde quando a concentração é de 0,5% de glicose, amarelo quando a concentração é de 1,0 % de glicose, laranja quando a concentração é de 1,5 % de glicose e vermelho quando a concentração é igual ou superior a 2,0 % de glicose. 4. Conclusão sobre a identificação de açúcares redutores utilizando o Teste de Benedict. Os resultados do teste mostraram que os tubos com água e sacarose não houve reação, nem mudanças de cor, não tendo hidroxila na sacarose, já no tubo com glicose, foi observada a mudança de cor, levando a um resultado positivo para carboidratos redutores. 0002 - Reação Benedict (identificação de açúcares redutores) (liquidplatform.com) MODELO PARA ELABORAÇÃO E FORMATAÇÃO DE ARTIGOS CIENTÍFICOS (ufmt.br) https://fast.player.liquidplatform.com/pApiv2/embed/746b3e163a5a5f89a10a96408c5d22c2/4cfbf80843d1bdbb3b09f95899675f0e https://if.ufmt.br/eenci/artigos/Artigo_ID191/v7_n3_a2012.pdf https://if.ufmt.br/eenci/artigos/Artigo_ID191/v7_n3_a2012.pdf
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