PCC Biologia Molecular

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Prática como Componente Curricular 
Disciplina: Biologia Molecular 
Tema: Enzimas de restrição 
Aluna: Christiane Helena Guindo RA: 1910543 
ATIVIDADE 
a) Quantos sítios de restrição existem nessa sequência? 
R: Existe apenas um sítio de restrição. 
 
b) Faça uma pesquisa sobre os tipos de cortes das enzimas de restrição. Descreva- 
os e classifique o corte da enzima Bam HI. 
R: As enzimas de restrição podem ser de três tipos: 
Tipo I - Enzimas com capacidade de corte e metilação. Têm sequências de 
reconhecimento específicas, mas cortam de forma inespecífica dentro da sequência de 
reconhecimento (reconhecimento assimétrico) e a hidrólise é sempre em um local 
diferente havendo gasto de ATP; 
Tipo II – Apenas possuem capacidade de corte e a metilação é feita por proteínas 
diferentes. Cortam sequências específicas de forma também específica (reconhecimento 
palindrômico). A hidrólise ocorre nas extremidades da sequência reconhecida e sem 
gasto de ATP, por isso é mais utilizado em biologia molecular. Os locais de 
reconhecimento têm, quase sempre, 4 a 6 nucleotídeos. 
Tipo III – Enzimas com capacidade de corte e metilação. Cortam sequências específicas 
de forma também específica. 
Os organismos Bacillus amyloliquefaciens H possuem a endonuclease Bam HI. Uma 
enzima tipo II, que promove corte “em escada”. 
 
c) O gel abaixo apresenta, na canaleta 1, um padrão de peso molecular onde as 
bandas representam sequências com 50bp, 80bp, 200bp e 1000pb. Suponha que 
o DNA acima tenha sido clivado pela enzima PvuII e represente, na canaleta 2, 
os fragmentos resultantes do corte. 
R: O sítio de clivagem identificado por PyuII: 5’ C AGCTG 3’ 
Há apenas um sítio de restrição na sequência acima, dividindo a fita simples em duas 
partes. No fragmento menor, há cerca de 280 bases nitrogenadas, portanto 140 pb, 
ficando entre as sequências 80 e 200 pb. Já no fragmento maior, há em torno de 410 
bases, ou seja, 205 pb, ficando representado logo abaixo dos 200 pb.