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Microscopia de contraste • Espécies biológicos não corados, são geralmente transparentes e difíceis de serem observados • Outra metodologia é a microscopia de contraste diferencial que produz uma imagem aparentemente tridimensional • Em contrapartida, o microscópio de contraste de fase usa um sistema de lentes que produz imagens visíveis de objetos quase transparentes A- células da crista neural em microscopia de luz convencional (junqueira e carneiro) B- células da crista neural em microscopia de contraste de fase (junqueira e carneiro) • Essas imagens são sempre vistas em preto, branco e tons de cinza. C- células da crista neural em microscopia de diferença interferencial de contraste (junqueira e carneiro) TIPOS DE MICROSCOPIA A- células da crista neural em microscopia de luz convencional (junqueira e carneiro) Microscopia de fluorescência • algumas substâncias são irradiadas por luz de um determinado comprimento de onda: esse fenômeno é chamado fluorescência • exemplo: alaranjado de acridina - algumas moléculas conseguem absorver luz (energia) quando ela tem uma cor específica (comprimento de onda específico) - depois que absorve ela devolve parte dessa energia como luz → isso é fluorescência Resumindo: Absorve luz → emite outra luz • desta maneira, as substâncias fluorescentes são observadas como objetos brilhantes e coloridos - aqui estamos falando do que vemos no microscópio - como funciona: ilumina com uma luz específica (ex: azul ou UV), substância absorve essa luz e emite outra luz (geralmente verde, vermelho etc.) - resultado: ela aparece brilhando, colorida e destacada do fundo escuro • substâncias fluorescentes que tenham afinidade por moléculas das células ou na matriz extracelular podem ser usadas como corantes fluorescentes - afinidade = capacidade de grudar em algo - se a substância é fluorescente então: se liga ao DNA, ou a proteínas ou a colágeno da matriz extracelular - então ela pode funcionar como corante, mas diferente da hematoxilina/eosina ela não só “cora”: brilha no microscópio Junqueira e Carneiro CULTURA DE CÉLULAS E TECIDOS Células podem ser mantidas vivas e estudadas fora do corpo possibilita análise direta do comportamento de células vivas por meio de um microscópio útil para pesquisar efeito isolado de moléculas naturais ou fármacos sobre um tipo de célula ou tecido experiências que não podem ser realizadas em um animal vivo podem ser feitas in vitro HISTOQUÍMICA E CITOQUIMICA Os termos histo e citoquímica são usados para indicar métodos que identificam e localizam substâncias em células em matriz extracelular, seja em cortes histológicos ou em células cultivadas Histoquímica e citoquímica são técnicas que usam reações químicas para revelar e mostrar no microscópio onde certas substâncias estão nos tecidos ou nas células Coram: lipídios, ácidos nucleicos, RNA, polissacarídeos, enzimas...  Íons Vários íons como cálcio, ferro, fosfato... podem ser localizados em tecidos usando reações químicas que produzem produtos insolúveis escuros ou coloridos. Ácidos nucleicos O DNA pode ser identificado e qualificado nos núcleos das células por meio da reação de Feulgen que produz cor vermelha. O DNA e o RNA também podem ser evidenciados pela coloração de células ou cortes de tecidos com corantes básicos  Proteínas • Existem métodos para detectar proteínas em células e cortes de tecidos • normalmente tecnicas histoquimicas não possibilitam localização de proteínas específicas (o que pode ser feito pela imunocitoquímica) • Existem métodos histoquimicos que revelam com maior ou menor especificidade um grupo grande de proteínas: as enzimas Ex.: - fosfatase (amplamente encontrada no organismo, frequentemente se usa para demonstrar por microscopia de luz ou eletrônica lisossomos: organelas citoplasmaticas que contém grande quantidade dessa enzima) - desidrogenase (remove hidrogênio de um substrato e transfere para outro, na demonstração histoquímica de desidrogenase, ao receber hidrogênio, precipita é uma substância colorida. Por esse método podemos localizar por exemplo enzimas no ciclo de Krebs localizada nas mitocôndrias como a  succinodesidrogenase) - peroxidase (Sua aplicação prática é ser usada para marcar outras moléculas)
