1) No final da década de 70, o bioquímico inglês Frederick Sanger desenvolveu a técnica de sequenciamento de DNA que, batizada com o seu nome, tem sido amplamente utili zada desde então. Sobre o princípio do método de sequenciamento de Sanger, assinale a afirmativa correta: A) O método se baseia na clivagem do DNA-alvo em nucleotídeos específicos. B) O método se baseia no bloqueio da síntese da fita complementar ao DNA-alvo em função da presença de fluoróforos ligados aos desoxirribonucleosídeos trifosfato. C) O método se baseia na terminação da síntese da fita complementar ao DNA-alvo em funçã o da presença de didesoxirribunucleosídeos trifosfato específicos. D) O método se baseia na detecção do pirofosfato liberado na incorporação de um desoxirribo nucleosídeos trifosfato específico à fita complementar ao DNA-alvo. E) O método se baseia na detecção da variação do pH ocasionada pela incorporação de um de soxirribonucleosídeos trifosfato específico à fita complementar ao DNA-alvo.

2) A automatização da detecção de sequências obtidas pelo método de sequenciamento d e Sanger representou um grande avanço na capacidade da técnica em processar uma sequências de bases no DNA. Os sequenciadores automáticos do método de Sanger di spensaram: A) O uso de oligonucleotídeos iniciadores. B) O uso de DNA polimerase. C) O uso de didesoxirribunucleosídeos trifosfato. D) A realização de uma reação de sequenciamento com cada um dos didesoxirribunucleosíde os trifosfato. E) A realização de eletroforese para separação dos fragmentos.

3) Nas últimas décadas, o desenvolvimento de técnicas automatizadadas com princípios distintos do sequenciamento de Sanger têm revolucionado a área de estudo de genes e genomas. Sobre os métodos de sequenciamento de nova geração, leia atentamente as afirmações abaixo: I. Baseiam-se todos na detecção de componentes liberados durante a degradação do DNA-molde. II. Costumam empregar uma etapa prévia de amplificação do DNA-molde por PCR e m emulsão ou PCR em fase sólida. III. São capazes de sequenciar, em uma só reação, moléculas com a extensão de um cr omossomo humano. Assinale a alternativa que indica as afirmações corretas. A) Apenas I B) Apenas II C) Apenas III D) II e III E) I, II e III.

4) As bibliotecas de DNA são utilizadas como uma estratégia para o sequenciamento de genomas completos e consistem no conjunto de moléculas recombinantes contendo fr agmentos de um DNA de interesse, fusionados a vetores. Sobre as bibliotecas de DNA e a sua utilização como etapa de preparação de amostras para o sequenciamento de g enomas, assinale a alternativa correta: A) Uma biblioteca de DNA contém cópias idênticas de um vetor de clonagem contendo um m esmo fragmento inserido. B) É possível isolar e sequenciar fragmentos específicos presentes em uma biblioteca de DNA por meio da identificação das colônias transformadas que contenham o vetor recombinant e em questão. C) O uso de bibliotecas de DNA é uma alternativa ao emprego da estratégia de sequenciament o de genomas denominada como sequenciamento shotgun. D) A amplificação dos vetores recombinantes para a geração de bibliotecas de DNA independ e de organismos vivos, e ocorre inteiramente in vitro. E) As bibliotecas de DNA são uma etapa necessária a todas as estratégias de sequenciamento de genomas, independentemente do método de sequenciamento empregado.

5) O sequenciamento shotgun de genomas envolve a fragmentação do DNA genômico, o sequenciamento desses fragmentos e a posterior análise das sequências obtidas por fe rramentas de bioinformática. Associe corretamente as etapas de montagem (M) e de anotação (A) de genomas aos itens abaixo: ( ) Sequências repetitivas representam um desafio a essa etapa de análise. ( ) A ausência dessa etapa de análise permite que a sequência de DNA seja conhecida, mas impede que sejam compreendidos aspectos funcionais das sequências em questã o. ( ) Identifica as sequências genômicas com determinados padrões ou características es pecíficas. ( ) Sobrepõe as leituras dos fragmentos obtidos pelo sequenciamento, formando sequê ncias contíguas. A união das sequências contíguas fornece blocos maiores de sequênci as genômicas. A) M – M – A – A B) M – A – M – A C) A – M – M – A D) A – M – A – M E) M – A – A – M