Diferenciam-se das cefalosporinas de primeira geração pelo espectro mais amplo contra bactérias gram-negativas, pois são resistentes à hidrólise enzimática pelas cefalosporinases produzidas por estas bactérias.
As cefalosporinas de primeira geração atuam preferentemente em cocos gram-positivos e apresentam pouca atividade frente aos gram-negativos. Os representantes da segunda geração apresentam atividade em bacilos gram-negativos ainda mantendo alguma atividade diante de cocos gram-positivos
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