O mecanismo de ação do Flumazenil é o de antagonizar os receptores de benzodiazepínicos no sistema nervoso central, revertendo os efeitos sedativos e ansiolíticos desses medicamentos. Ele se liga aos receptores de benzodiazepínicos sem ativar a ação do receptor, impedindo que os benzodiazepínicos se liguem e ativem o receptor. Isso resulta em uma diminuição dos efeitos sedativos e ansiolíticos dos benzodiazepínicos.
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