Vamos analisar cada uma das alternativas sobre a coloração de Gram: A) Dentre os materiais utilizados na metodologia da coloração de Gram, a solução de cristal violeta é a primeira a ser empregada no procedimento. Correta. A coloração de Gram começa com a aplicação do cristal violeta, que é o primeiro corante utilizado. B) O objetivo principal do emprego da coloração de Gram é classificar as bactérias analisadas em patogênicas ou probióticas. Incorreta. O objetivo da coloração de Gram é classificar as bactérias em Gram-positivas e Gram-negativas, não em patogênicas ou probióticas. C) A solução alcoólica utilizada na coloração de Gram deve permanecer em contato com a lâmina o mesmo tempo que a solução de Lugol. Incorreta. A solução alcoólica (descolorante) deve ser aplicada por um tempo diferente e geralmente é mais breve do que a solução de Lugol. D) Por se tratarem de estruturas de tamanho relativamente grande, a objetiva correta no microscópio para análise das bactérias após a coloração de Gram é a de 4x. Incorreta. Para observar bactérias após a coloração de Gram, geralmente se utiliza uma objetiva de maior aumento, como 100x (com imersão em óleo). Portanto, a alternativa correta é: A.