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[Laboratório Virtual - Hibridização] Segundo o sumário da aula prática, a hibridização é uma técnica que tem o princípio da complementariedade das bases nitrogenadas dos ácidos nucleicos como base (adenina com timina e citosina com guanina). Essa técnica consiste, de forma básica, em localizar sequências de interesse no genoma de quaisquer organismos, hibridizando-as ao próprio DNA da espécie.
Considerando a aula prática de hibridização, assinale a alternativa CORRETA:
A A técnica de CGH array é avaliada diretamente no microscópio, sem o uso de scanner.
B Ao final da reação é possível visualizar as células marcadas com pontos verdes e vermelho.
C O reagente DAPI é adicionado logo no início da reação, junto à sonda na técnica de FISH, sem necessidade de incubação.
D A técnica de FISH utiliza a marcação de vários genes.
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Exercícios Para o Aprendizado

há 10 meses

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Técnicas de Clonagem e Hibridização
5 pág.

Técnicas de Clonagem e Hibridização

Uniasselvi

Respostas

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há 10 meses

Vamos analisar cada uma das alternativas para identificar a correta: A) A técnica de CGH array é avaliada diretamente no microscópio, sem o uso de scanner. - Esta afirmação está incorreta, pois a técnica de CGH array geralmente utiliza um scanner para detectar a fluorescência. B) Ao final da reação é possível visualizar as células marcadas com pontos verdes e vermelho. - Esta afirmação é verdadeira, pois na hibridização, especialmente em técnicas como FISH, é comum usar sondas marcadas com diferentes fluorocromos que podem resultar em pontos de diferentes cores. C) O reagente DAPI é adicionado logo no início da reação, junto à sonda na técnica de FISH, sem necessidade de incubação. - Esta afirmação está incorreta, pois o DAPI é geralmente adicionado após a hibridização para marcar o DNA. D) A técnica de FISH utiliza a marcação de vários genes. - Esta afirmação é um pouco enganosa, pois a técnica de FISH normalmente é usada para marcar sequências específicas de DNA, não necessariamente vários genes ao mesmo tempo. Com base na análise, a alternativa correta é: B) Ao final da reação é possível visualizar as células marcadas com pontos verdes e vermelho.

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Com o desenvolvimento das técnicas de clonagem de DNA, tornou-se possível a construção de bibliotecas de DNA e cDNA. Sobre as bibliotecas, assinale a alternativa CORRETA:
A As bibliotecas de mRNA são originadas a partir da fragmentação do DNA com enzimas de restrição e, posteriormente, da clonagem do DNA.

O uso de bibliotecas de DNA ou cDNA permitem a manutenção e replicação do material genético em grandes coleções mantidas em colônias de bactérias, nas quais um fragmento específico de DNA ou um gene podem ser procurados. Sobre as bibliotecas de DNA e cDNA, avalie as asserções a seguir e a relação proposta entre elas:
Assinale a alternativa CORRETA:
I- A bactéria E. coli é a principal célula hospedeira utilizada no processo de clonagem em vetores, inclusive na construção de bibliotecas de DNA e cDNA, em que cada bactéria irá internalizar apenas um vetor.
II- Assim que o vetor é inserido, em condições adequadas de diluição e meio de cultivo, em poucas horas corre a formação de diversos clones dos fragmentos inseridos, sendo cada um encontrado em uma colônia diferente de crescimento bacteriano.
A A asserção I é uma proposição falsa, e a II é uma proposição verdadeira.
B As asserções I e II são proposições verdadeiras, e a II é uma justificativa da I.
C As asserções I e II são proposições verdadeiras, mas a II não é uma justificativa da I.
D As asserções I e II são proposições falsas.

[Laboratório Virtual - Hibridização] Segundo o roteiro de hibridização, o sucesso dessa prática depende da capacidade do DNA de se anelar às sequências complementares após a desnaturação (período em que a fita de DNA é simples). Dessa forma, o ponto de fusão do DNA, ou seja, o momento em que ocorre a ruptura das pontes de hidrogênio e a abertura da dupla fita de DNA, varia de um organismo para outro. O ponto de fusão do DNA também depende da quantidade de pares de base G-C e A-T, sendo que, quanto mais pares G-C, maior o ponto de fusão do genoma. Isso ocorre porque o par G-C é mais estável, apresentando três pontes de hidrogênio, enquanto o par A-T conta apenas com duas. Após o anelamento da sonda com sua sequência-alvo complementar, o padrão de hibridização é visto em microscópio de fluorescência. Além do ponto de fusão, outros fatores podem interferir na hibridização da sonda de DNA. Sobre esses fatores, analise as opções a seguir:
Assinale a alternativa CORRETA:
I- Temperatura de fusão.
II- pH alto para produzir condições de hibridização.
III- Concentração de cátions monovalentes.
IV- Presença de solventes orgânicos.
A Somente a opção II está correta.
B Somente a opção I está correta.
C As opções I, II, III e IV estão corretas.
D Somente a opção III está correta.

O PCR produz uma série de cópias de um determinado fragmento de DNA ou cDNA de uma maneira bastante rápida e eficiente. No entanto, de acordo com o seu objetivo de pesquisa, a PCR qualitativa ou quantitativa se torna mais eficaz para fornecer os resultados esperados. De acordo com essas duas técnicas, classifique V para as sentenças verdadeiras e F para as falsas:
Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
( ) A PCR qualitativa indica a presença de um fragmento específico de DNA ou cDNA em uma amostra, mas não indica quanto do gene está expresso na amostra.
( ) A qPCR é conhecida como PCR em tempo real (quantitativa) e fornece informações precisas relativas à quantidade de expressão de um gene.
( ) A PCR qualitativa necessita de um termociclador específico capaz de quantificar a amplificação dos fragmentos de DNA ao final de cada ciclo em tempo real.
A F - F - V.
B V - V - F.
C F - V - F.
D V - F - F.

"A clonagem de genes possui variadas aplicações na área de pesquisa, por meio do conhecimento da organização de genomas, da sequência de genes e suas proteínas codificadas, da criação de bibliotecas de DNA e cDNA, além de produtos que beneficiam a sociedade, como a produção de enzimas industriais, produção de insulina humana, vacinas, hormônios de crescimento e melhoramento genético". Sobre as principais diferenças entre essas técnicas, destacando os objetivos de cada uma delas, analise as sentenças a seguir:
Assinale a alternativa CORRETA:
I- As Bibliotecas de DNA ou cDNA são grandes coleções de material genético mantidas em colônias de bactérias, nas quais um fragmento específico de DNA ou um gene podem ser procurados.
II- Uma biblioteca de DNA é formada por fragmentos originados a partir de um DNA genômico. Já uma biblioteca de cDNA é formada por sequências codificantes dos genes que estavam expressos na forma de mRNA em uma determinada amostra.
III- A formação das bibliotecas de DNA e cDNA permite que fragmentos clonados sejam mantidos e replicados por tempo indeterminado.
A Somente a sentença II está correta.
B As sentenças I, II e III estão corretas.
C Somente a sentença III está correta.
D Somente a sentença I está correta.

A terceira geração de métodos de sequenciamento de DNA, possibilitaram analisar as sequências de nucleotídeos de uma única molécula de DNA, sem a necessidade de amplificar a molécula.
Sobre esses métodos, assinale a alternativa CORRETA:
A Para os métodos de terceira geração, são utilizadas plataformas 454, que são esferas sólidas, nas quais são ligadas as sequências adaptadoras, com o DNA a ser sequenciado, formando uma biblioteca de DNA.
B É o mais recente avanço em biologia molecular, que permite o sequenciamento de DNA de forma portátil, capaz de sequenciar grandes moléculas de DNA em pequenos equipamentos, semelhantes a pen drives. A plataforma MinION é a mais utilizada.
C É um método totalmente automatizado, também conhecido como Illumina, em que o DNA a ser sequenciado é fragmentado por nebulização e os fragmentos são acoplados a uma placa de vidro por meio de primers adaptadores, formando uma biblioteca de DNA, que será submetida ao PCR.
D A terceira geração de sequenciamento utiliza DNA fragmento que é transformado em fragmentos de DNA circular, os quais são replicados em chips com nano-poços. A cada novo nucleotídeo adicionado à nova fita, ocorre a emissão de fluorescência e a detecção ocorre em tempo real.

O gráfico a seguir ilustra uma curva de amplificação da PCR em tempo real. De acordo com a interpretação do gráfico, classifique V para as sentenças verdadeiras e F para as falsas:
Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
( ) A amostra A possui maior quantidade do gene avaliado, uma vez que possui menor Ct.
( ) A amostra C possui maior quantidade de amostra, pois quanto maior o Ct, maior a quantidade de material disponível para iniciar a amplificação do gene de interesse.
( ) A amostra B ultrapassou o Threshold após o ciclo 20, apresentando uma quantidade intermediária de amostra, quando comparadas às amostras A e C.
A V - F - F.
B V - V - F.
C F - F - V.
D V - F - V.

A técnica de eletroforese consiste na separação de moléculas de DNA, RNA ou proteínas em gel de agarose ou poliacrilamida. Essa separação se dá de acordo com o tamanho da molécula. Com base no processo de eletroforese em gel, analise as sentenças a seguir:
Assinale a alternativa CORRETA:
I- Uma corrente elétrica é transmitida através do gel do polo negativo ao polo positivo.
II- As moléculas de DNA são carregadas negativamente e são carregas por afinidade para o polo positivo.
III- Moléculas menores tendem a migrar com maior dificuldade no gel. Já as moléculas maiores, tendem a migrar mais facilmente.
A As sentenças I e II estão corretas.
B Somente a sentença II está correta.
C Somente a sentença III está correta.
D As sentenças I e III estão corretas.

O processo de transcrição reversa, é uma das técnicas mais utilizadas na área de pesquisa de expressão gênica. Essa técnica é conhecida como RT-PCR, ou transcrição reversa, seguida por PCR. Com base no RT-PCR, analise as sentenças a seguir:
Assinale a alternativa CORRETA:
I- O RT-PCR avalia a expressão diferencial do mRNA, o qual será convertido em DNA complementar (cDNA).
II- A enzima transcriptase reversa (RT) é responsável pela síntese de uma fita de DNA, utilizando como molde uma fita simples de RNA.
III- A técnica de RT-PCR é realizada em 40 ciclos, para formação de uma quantidade adequada de cDNA.
A Somente a sentença III está correta.
B Somente a sentença II está correta.
C As sentenças I e III estão corretas.
D As sentenças I e II estão corretas.

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