Uma biblioteca de cDNA não apresenta íntrons porque o cDNA é sintetizado a partir do RNA mensageiro (mRNA) por meio da ação da enzima transcriptase reversa. Durante esse processo, apenas as regiões codificadoras (exons) do gene são copiadas, enquanto os íntrons, que são as sequências não codificadoras, são removidos durante a maturação do mRNA. Portanto, o cDNA é uma representação das sequências que realmente são traduzidas em proteínas, sem a presença dos íntrons.