Os fragmentos de DNA podem ser inseridos em vetores de clonagem, pequenos fragmentos de DNA que replicam dentro de uma célula. Um vetor de clonagem deve ter uma origem de replicação, um ou mais sítios de restrição únicos e marcadores selecionáveis.
As etapas abaixo estão relacionadas com a clonagem de um gene de interesse. Analise e ordene cada uma das etapas de acordo com a sequência para a obtenção de um vetor de clonagem
1 - Tratamento de cDNA e do plasmídeo com a mesma enzima de restrição
2 - Isolar o mRNA de determinada célula de interesse
3 - Inserção do plasmídeo na bactéria.
4 - Com a ajuda da DNA ligase, inserir o fragmento de DNA no vetor de clonagem.
5 - Usar a enzima transcriptase reversa para fazer um cDNA que seja complementar ao mRNA.
A ordem correta das etapas é:
A. 3 - 4 - 1 - 2 - 5
B. 2 - 5 - 1 - 4 - 3
C. 1 -2 - 5 - 3 - 4
D. 2 - 5 - 3 - 4 - 1
E. 5 - 2 - 1 - 4 - 3
Ed
há 3 semanas
Vamos analisar as etapas para a obtenção de um vetor de clonagem: 1. Isolar o mRNA de determinada célula de interesse: Esta é a primeira etapa, pois precisamos do mRNA para criar o cDNA. 2. Usar a enzima transcriptase reversa para fazer um cDNA que seja complementar ao mRNA: Após isolar o mRNA, usamos a transcriptase reversa para sintetizar o cDNA. 3. Tratamento de cDNA e do plasmídeo com a mesma enzima de restrição: Agora, tanto o cDNA quanto o plasmídeo precisam ser tratados com a mesma enzima de restrição para que possam ser ligados. 4. Com a ajuda da DNA ligase, inserir o fragmento de DNA no vetor de clonagem: Após o tratamento, ligamos o cDNA ao vetor de clonagem usando a DNA ligase. 5. Inserção do plasmídeo na bactéria: Por fim, o plasmídeo que contém o cDNA é inserido na bactéria. Analisando a sequência correta, temos: 2 - 5 - 1 - 4 - 3. Portanto, a alternativa correta é: B. 2 - 5 - 1 - 4 - 3.