Vamos analisar as alternativas sobre o mecanismo clássico do CRISPR-Cas9 em edição gênica: a) Introduz quebras simples (nick) sem necessidade de sequência PAM. - Incorreto, pois o CRISPR-Cas9 induz quebras duplas e depende de uma sequência PAM. b) Substitui diretamente uma base por outra sem cortes no DNA. - Incorreto, pois o CRISPR-Cas9 não faz substituições diretas sem cortes. c) Atua apenas em RNA mensageiro e não em DNA. - Incorreto, pois o CRISPR-Cas9 atua diretamente no DNA. d) Induz uma quebra dupla no DNA guiada por um RNA e depende de uma sequência PAM próxima ao alvo. - Correto, pois essa é a descrição precisa do funcionamento do CRISPR-Cas9. Portanto, a alternativa correta é: d) Induz uma quebra dupla no DNA guiada por um RNA e depende de uma sequência PAM próxima ao alvo.