[Laboratório Virtual - Extração e Purificação de DNA e RNA] As amostras contendo o DNA ou RNA purificados devem ser: 1) ressuspensas em um tampão e armazenadas em tubos, ambos “livres” de enzimas que possam degradá-las (como DNAse ou RNAse – nucleases); e 2) mantidas em baixas temperaturas (-20 ºC ou -80 ºC). Todos os procedimentos devem ser realizados com luvas para evitar a degradação das amostras, devido à presença de nucleases nos fluidos corporais das mãos.
De acordo com o processo de extração de DNA e RNA, associe os itens, utilizando o código a seguir:
I- Pipete 25 µl da Proteinase K no tubo Eppendorf. Em seguida, pipete 200 µl da amostra de sangue no mesmo tubo, e por último pipete 200 µl do tampão lise S no tubo. Tampe o Eppendorf e homogeneíze no Vórtex por 20 segundos. Após esse tempo, incube o Eppendorf por 15 min.
II- Pipete 210 µl de álcool 96% no Eppendorf e homogeneíze de novo no Vórtex. Em seguida, pipete 640 µl do Eppendorf para o tubo spin e centrifugue a 11.000 rpm por 1 minuto.
III- Retire o Eppendorf da centrífuga, descarte o tubo de coleta e coloque o tubo spin em um novo tubo de coleta. Em seguida, pipete 500 µl do tampão de lavagem SI no tubo spin e centrifugue novamente. Repita o mesmo processo de troca de tubo de coleta, porém a lavagem irá utilizar 600 µl no tampão de lavagem SII, e centrifugue novamente. Por fim, repita o mesmo processo da troca do tubo de coleta e centrifugue novamente.
IV- Retire o Eppendorf da centrífuga, descarte o tubo de coleta e coloque o tubo spin em um novo tubo de coleta. Em seguida, pipete 200 µl do tampão de eluição S no tubo spin, espere 1 minuto e centrifugue a amostra.
( ) Etapa de Lise.
( ) Etapa de Ligação.
( ) Etapa de Eluição.
( ) Etapa de Lavagem.
Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
I- Pipete 25 µl da Proteinase K no tubo Eppendorf. Em seguida, pipete 200 µl da amostra de sangue no mesmo tubo, e por último pipete 200 µl do tampão lise S no tubo. Tampe o Eppendorf e homogeneíze no Vórtex por 20 segundos. Após esse tempo, incube o Eppendorf por 15 min.
II- Pipete 210 µl de álcool 96% no Eppendorf e homogeneíze de novo no Vórtex. Em seguida, pipete 640 µl do Eppendorf para o tubo spin e centrifugue a 11.000 rpm por 1 minuto.
III- Retire o Eppendorf da centrífuga, descarte o tubo de coleta e coloque o tubo spin em um novo tubo de coleta. Em seguida, pipete 500 µl do tampão de lavagem SI no tubo spin e centrifugue novamente. Repita o mesmo processo de troca de tubo de coleta, porém a lavagem irá utilizar 600 µl no tampão de lavagem SII, e centrifugue novamente. Por fim, repita o mesmo processo da troca do tubo de coleta e centrifugue novamente.
IV- Retire o Eppendorf da centrífuga, descarte o tubo de coleta e coloque o tubo spin em um novo tubo de coleta. Em seguida, pipete 200 µl do tampão de eluição S no tubo spin, espere 1 minuto e centrifugue a amostra.
A II - III - IV - I.
B IV - III - II - I.
C I - II - III - IV.
D III - IV - II - I.
E I - II - IV - III.
De acordo com o processo de extração de DNA e RNA, associe os itens, utilizando o código a seguir:
I- Pipete 25 µl da Proteinase K no tubo Eppendorf. Em seguida, pipete 200 µl da amostra de sangue no mesmo tubo, e por último pipete 200 µl do tampão lise S no tubo. Tampe o Eppendorf e homogeneíze no Vórtex por 20 segundos. Após esse tempo, incube o Eppendorf por 15 min.
II- Pipete 210 µl de álcool 96% no Eppendorf e homogeneíze de novo no Vórtex. Em seguida, pipete 640 µl do Eppendorf para o tubo spin e centrifugue a 11.000 rpm por 1 minuto.
III- Retire o Eppendorf da centrífuga, descarte o tubo de coleta e coloque o tubo spin em um novo tubo de coleta. Em seguida, pipete 500 µl do tampão de lavagem SI no tubo spin e centrifugue novamente. Repita o mesmo processo de troca de tubo de coleta, porém a lavagem irá utilizar 600 µl no tampão de lavagem SII, e centrifugue novamente. Por fim, repita o mesmo processo da troca do tubo de coleta e centrifugue novamente.
IV- Retire o Eppendorf da centrífuga, descarte o tubo de coleta e coloque o tubo spin em um novo tubo de coleta. Em seguida, pipete 200 µl do tampão de eluição S no tubo spin, espere 1 minuto e centrifugue a amostra.
( ) Etapa de Lise.
( ) Etapa de Ligação.
( ) Etapa de Eluição.
( ) Etapa de Lavagem.
Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
I- Pipete 25 µl da Proteinase K no tubo Eppendorf. Em seguida, pipete 200 µl da amostra de sangue no mesmo tubo, e por último pipete 200 µl do tampão lise S no tubo. Tampe o Eppendorf e homogeneíze no Vórtex por 20 segundos. Após esse tempo, incube o Eppendorf por 15 min.
II- Pipete 210 µl de álcool 96% no Eppendorf e homogeneíze de novo no Vórtex. Em seguida, pipete 640 µl do Eppendorf para o tubo spin e centrifugue a 11.000 rpm por 1 minuto.
III- Retire o Eppendorf da centrífuga, descarte o tubo de coleta e coloque o tubo spin em um novo tubo de coleta. Em seguida, pipete 500 µl do tampão de lavagem SI no tubo spin e centrifugue novamente. Repita o mesmo processo de troca de tubo de coleta, porém a lavagem irá utilizar 600 µl no tampão de lavagem SII, e centrifugue novamente. Por fim, repita o mesmo processo da troca do tubo de coleta e centrifugue novamente.
IV- Retire o Eppendorf da centrífuga, descarte o tubo de coleta e coloque o tubo spin em um novo tubo de coleta. Em seguida, pipete 200 µl do tampão de eluição S no tubo spin, espere 1 minuto e centrifugue a amostra.
A II - III - IV - I.
B IV - III - II - I.
C I - II - III - IV.
D III - IV - II - I.
E I - II - IV - III.
Respostas
Ed 
há 4 meses
Vamos analisar cada etapa e associar corretamente: I - Pipetar Proteinase K, amostra e tampão lise, homogeneizar e incubar: corresponde à Etapa de Lise (quebra das células para liberar DNA/RNA). II - Adicionar álcool, homogeneizar, transferir para tubo spin e centrifugar: corresponde à Etapa de Ligação (DNA/RNA se liga à membrana do tubo spin). III - Lavagem com tampões SI e SII, centrifugação e troca de tubos: corresponde à Etapa de Lavagem (remoção de impurezas). IV - Adicionar tampão de eluição, esperar e centrifugar para coletar DNA/RNA purificado: corresponde à Etapa de Eluição. Portanto, a sequência correta é: I - Lise II - Ligação III - Lavagem IV - Eluição Alternativa correta: C) I - II - III - IV.
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[Laboratório Virtual - Extração e Purificação de DNA e RNA] Os ácidos nucleicos apresentam características estruturais específicas que permitem que sejam isolados e manipulados para diversos tipos de aplicações. A técnica de hibridização in situ, por exemplo, baseia-se na complementaridade das fitas de DNA ou RNA, utilizando sondas fluorescentes para a detecção da fita complementar em uma determinada amostra. Essa técnica permite o estudo da expressão gênica. Outra técnica, que também tem o mesmo princípio e finalidade, é a reação em cadeia da polimerase transcriptase reversa (RT-PCR), muito utilizada no diagnóstico de algumas infecções e doenças. Nesse sentido, o primeiro passo para a maioria das técnicas citadas é o isolamento e purificação das moléculas de DNA e RNA. O processo de extração do DNA pode ser dividido em etapas.
Com relação às etapas visualizadas na aula prática, assinale a alternativa CORRETA:
A Na etapa de lavagem, são adicionados 210 µl de álcool 96%.
B A primeira etapa é denominada como Etapa de Ligação, em que é adicionado o SI no tubo spin e é centrifugado novamente.
C A primeira etapa é a etapa de lise, em que adicionamos 25 µl de Proteinase K, 200 µl da amostra e 200 µl do tampão de lise S.
D O principal composto adicionado na etapa de ligação é a Proteinase K.
E A etapa de lavagem ocorre quando o eppendorf é retirado da centrifuga e o tampão de eluição S é adicionado ao tubo spin.
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