Grátis: A PCR depende da habilidade de desnaturar alternadamente moléculas de DNA de fita dupla e hibridizar fitas simples complementares de modo controlad... – Questões Respondidas

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A PCR depende da habilidade de desnaturar alternadamente moléculas de DNA de fita dupla e hibridizar fitas simples complementares de modo controlado. Para organismos nos quais todo o genoma, ou a maioria dele, tenha sido sequenciado, a amplificação por PCR, começando com DNA genômico total, tende a ser a maneira mais fácil de se obter uma região específica do DNA de interesse para clonagem. LODISH, Harvey. Biologia celular e molecular.
Considerando as informações apresentadas, avalie as asserções a seguir e a relação proposta entre elas. I. A técnica de PCR é um método para amplificação de fragmentos de DNA. PORQUE II. Para a amplificação de um RNA de fita simples, a molécula deve ser convertida em uma dupla fita de cDNA, ou DNA complementar, por meio do auxílio da transcriptase reversa. A respeito dessas asserções, assinale a opção correta:
I. A técnica de PCR é um método para amplificação de fragmentos de DNA.
II. Para a amplificação de um RNA de fita simples, a molécula deve ser convertida em uma dupla fita de cDNA, ou DNA complementar, por meio do auxílio da transcriptase reversa.
As asserções I e II são proposições verdadeiras, e a II é uma justificativa correta da I.
As asserções I e II são proposições verdadeiras, mas a II não é uma justificativa correta da I.
A asserção I é uma proposição verdadeira, e a II é uma proposição falsa.
A asserção I é uma proposição falsa, e a II é uma proposição verdadeira.
As asserções I e II são proposições falsas.

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Engenharia genetica - Atividade 2

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Vamos analisar as asserções: I. A técnica de PCR é um método para amplificação de fragmentos de DNA. Verdadeiro. A PCR (Reação em Cadeia da Polimerase) amplifica especificamente fragmentos de DNA. II. Para a amplificação de um RNA de fita simples, a molécula deve ser convertida em uma dupla fita de cDNA, ou DNA complementar, por meio do auxílio da transcriptase reversa. Verdadeiro. Para amplificar RNA, primeiro é necessário convertê-lo em cDNA usando transcriptase reversa, pois a PCR tradicional amplifica DNA. Agora, a relação entre elas: A asserção II explica um procedimento necessário para amplificar RNA, mas não justifica diretamente a asserção I, que fala da PCR como método de amplificação de DNA. Ou seja, a II é verdadeira, mas não justifica a I. Portanto, a alternativa correta é: As asserções I e II são proposições verdadeiras, mas a II não é uma justificativa correta da I.

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“As disciplinas científicas como química, ciência ambiental, análise farmacêutica, bioquímica e ciência forense basearam a maioria de seus resultados na detecção analítica. Assim, muitas aplicações, incluindo pesquisa científica, monitoramento ambiental, controle de qualidade de assistência médica e produtos farmacêuticos, dependem do processo de identificação e quantificação da presença de um analito específico (composto ou substância alvo) em uma amostra. Por esse motivo, uma grande variedade de métodos de detecção analítica foi desenvolvida desde o início do século XIX. Hoje em dia, as metodologias mais amplamente empregadas podem ser classificadas em diferentes categorias: técnicas cromatográficas e espectroscópicas, métodos de eletromigração, imunoensaios, métodos eletroquímicos e abordagens baseadas em biologia molecular. De acordo com a natureza do analito, sua faixa de concentração e a complexidade da matriz da amostra, entre outros fatores, a seleção de um método de detecção conveniente pode ser realizada. Atendendo aos métodos baseados em eletromigração, um dos mais populares é a técnica de eletroforese, que aplica um campo elétrico para separar partículas carregadas, como proteínas, ácidos nucleicos e carboidratos. Assim, vários dados podem ser obtidos a partir da eletroforese, pois ela fornece o tamanho, carga, componentes estruturais e abundância relativa de moléculas biológicas, particularmente proteínas e ácidos nucleicos”. B. SANTAMARÍA et al. Comparative analysis of Electrophoresis and Interferometric Optical Detection Method for Molecular Weight Determination of Proteins. Heliyon, v. 10, n. 16, p. e35932–e35932, 1 ago. 2024.
Com base nos conhecimentos sobre a eletroforese, avalie as afirmacoes a seguir. I. A eletroforese é uma técnica laboratorial utilizada para separar moléculas carregadas com base em suas propriedades de tamanho e carga elétrica. II. Existem diferentes tipos de eletroforese, como a eletroforese em gel, capilar e em papel, tendo como particularidades as análises de DNA, proteínas e lipídios, sendo as últimas, análises mais demoradas, respectivamente. III. O processo de eletroforese envolve a aplicação de um campo elétrico em um meio de suporte, como gel ou papel, que permite a migração das moléculas e sua separação em bandas visíveis. É correto o que se afirma em:
I. A eletroforese é uma técnica laboratorial utilizada para separar moléculas carregadas com base em suas propriedades de tamanho e carga elétrica.
II. Existem diferentes tipos de eletroforese, como a eletroforese em gel, capilar e em papel, tendo como particularidades as análises de DNA, proteínas e lipídios, sendo as últimas, análises mais demoradas, respectivamente.
III. O processo de eletroforese envolve a aplicação de um campo elétrico em um meio de suporte, como gel ou papel, que permite a migração das moléculas e sua separação em bandas visíveis.
I, apenas.
II, apenas.
I e II, apenas.
I e III, apenas.
I, II e III.

Uma vez que um fragmento de DNA específico tenha sido isolado, é geralmente caracterizado pela determinação da sequência exata de nucleotídeos da molécula. A investigação é finalizada com uma técnica de reação em cadeia da polimerase (polymerase chain reaction, PCR). LODISH, Harvey. Biologia celular e molecular.
Em relação à técnica de PCR, assinale a opção correta:
A PCR simula a amplificação de um RNA.
A PCR precisa de grandes quantidades de material genético para ser eficiente.
A técnica de PCR me mostra os fragmentos de DNA com seus tamanhos em pares de bases.
A técnica de PCR é conhecida por gerar várias cópias do material genético, porém, tem a desvantagem de ser demorada e necessitar de vários ciclos.
O DNA para a PCR pode ser extraído de organismos vivos, em decomposição, ou vestigiais encontrados em ossadas e fósseis, desde que esteja íntegro.

Na produção da vacina Qdenga, a diretora médica da Takeda explica: “Os cientistas desenvolvedores utilizaram o ‘esqueleto’ do sorotipo 2 como um arcabouço genético, ou seja, incluíram proteínas estruturais dos demais sorotipos no corpo do vírus tipo 2 atenuado para que a vacina seja eficaz contra todos eles”, explica Lee. O nome da tecnologia é DNA recombinante, em que genes dos sorotipos 1, 3 e 4 são usados para modificar o tipo 2 geneticamente. Dessa forma, o imunizante estimula o sistema imune humano a produzir anticorpos específicos para cada um dos tipos de vírus da dengue. Como funciona a Qdenga, vacina contra a dengue aprovada no Brasil? Disponível em: . Acesso em: 10 abril de 2024.
Com base no texto apresentado sobre a tecnologia DNA recombinante, avalie as asserções a seguir e a relação proposta entre elas. I. DNA recombinante é o nome dado para a tecnologia aplicada na manipulação de sequências de DNA que permitem a modificação de genes de interesse, para formar novas sequências de DNA combinadas e de fontes diversas. PORQUE II. Todos os organismos vivos compartilham a mesma sequência de informações genéticas. A respeito dessas asserções, assinale a opção correta:
I. DNA recombinante é o nome dado para a tecnologia aplicada na manipulação de sequências de DNA que permitem a modificação de genes de interesse, para formar novas sequências de DNA combinadas e de fontes diversas.
II. Todos os organismos vivos compartilham a mesma sequência de informações genéticas.
As asserções I e II são proposições verdadeiras, e a II é uma justificativa correta da I.
As asserções I e II são proposições verdadeiras, mas a II não é uma justificativa correta da I.
A asserção I é uma proposição verdadeira, e a II é uma proposição falsa.
A asserção I é uma proposição falsa, e a II é uma proposição verdadeira.
As asserções I e II são proposições falsas.

"Entretanto, uma separação bem-sucedida de proteínas e ácidos nucleicos pode ser obtida se a eletroforese, em vez de ser feita em solução líquida, for realizada em géis variados (suspensões semissólidas em água semelhantes à gelatina encontrada em sobremesas). A separação eletroforética de proteínas é mais comumente realizada em géis de poliacrilamida“. LODISH, Harvey. Biologia celular e molecular.
Considerando a técnica de eletroforese de proteínas, assinale a opção correta:
A visualização das proteínas separadas pode ser feita por sondas.
A eletroforese em gel de agarose é ideal para técnicas de alta resolução e alto peso molecular.
A eletroforese de proteínas separa e analisa proteínas com base no tamanho da molécula apenas.
SDS-PAGE é um gel de poliacrilamida desnaturante e separa proteínas por carga elétrica, pois utiliza um detergente catiônico que confere uma carga positiva às moléculas.
SDS-PAGE é um gel de poliacrilamida desnaturante e separa proteínas por peso molecular, pois utiliza um detergente aniônico que confere uma carga negativa às moléculas.

Na Coreia do Sul, pela primeira vez, dois cães da raça beagle nasceram a partir de células de pele clonadas e alteradas por edição genética (CRISPR). A esperança dos cientistas envolvidos no trabalho é de que sua técnica possa ser usada para eliminar mutações causadoras de doenças em animais com pedigree. Apesar de cachorros já terem nascido anteriormente editando a genética de ovos fertilizados, esta é a primeira vez que se usa a técnica em células clonadas. A novidade é benéfica porque significa que as mutações podem ser removidas sem afetar outras características, como acontece na edição de genes de óvulos. Beagles são clonados em técnica inédita para tentar driblar doenças. Disponível em: . Acesso em: 11 abr. 2024.
Considerando o texto apresentado e com os conhecimentos sobre a Clonagem Gênica, avalie as afirmações a seguir. I. A escolha do vetor de clonagem é de suma importância, pois o DNA inserido precisará ser multiplicado com facilidade. II. Para o isolamento do genoma de interesse, é utilizado a enzima ligase para selecionar apenas os fragmentos contendo a informação da expressão que será introduzida no vetor. III. A enzima de restrição atuará apenas no vetor, cortando o local onde o gene será inserido. IV. Para o sucesso da clonagem gênica, é de suma importância conter um vetor de clonagem, o gene de interesse e as enzimas ligase e de restrição. É correto o que se afirma em:
I. A escolha do vetor de clonagem é de suma importância, pois o DNA inserido precisará ser multiplicado com facilidade.
II. Para o isolamento do genoma de interesse, é utilizado a enzima ligase para selecionar apenas os fragmentos contendo a informação da expressão que será introduzida no vetor.
III. A enzima de restrição atuará apenas no vetor, cortando o local onde o gene será inserido.
IV. Para o sucesso da clonagem gênica, é de suma importância conter um vetor de clonagem, o gene de interesse e as enzimas ligase e de restrição.
I, apenas.
II, apenas.
I e IV, apenas.
II e III, apenas.
I, II e III.

A separação eletroforética de proteínas é mais comumente realizada em géis de poliacrilamida. Quando uma mistura de proteínas é colocada em gel e uma corrente elétrica é aplicada, proteínas migram pelo gel. LODISH, Harvey. Biologia celular e molecular.
Considerando a técnica de eletroforese de proteínas, assinale a opção correta:
Podem ser analisadas diretamente, independente de suas cargas.
Pode ser utilizada para analisar a carga de uma molécula proteica.
Os géis de análise podem ser de agarose e poliacrilamida desnaturante.
A eletroforese não é capaz de separar misturas complexas de proteínas.
As proteínas maiores migram primeiro, devido à maior atração ao polo eletroforético.

"A Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) surgiu como uma técnica inovadora no campo da Biologia Molecular. Antes de seu advento, os testes sorológicos eram empregados principalmente para detecção de doenças. No entanto, esses testes não tinham a precisão e a conveniência da detecção de doenças em estágio inicial, uma lacuna que a PCR preencheu efetivamente com a identificação de biomarcadores. A PCR envolve uma série de ciclos repetitivos em temperaturas variadas, resultando na produção de milhões de cópias de uma molécula de DNA, conhecida como molde. Essa técnica provou ser fundamental na detecção de doenças como infecções do trato respiratório causadas por bactérias ou vírus”. SÁNCHEZ-FLORES, Jesús Enrique et al. An affordable and simple method for DNA extraction from agarose suitable for downstream applications. Scientific Reports, v. 15, n. 1, 26 mar. 2025.
Em relação aos métodos de biologia molecular para análise genômica, assinale a alternativa correta:
Para que o isolamento e replicação do material genético ocorra na técnica de PCR, é necessário grandes quantidades material.
O isolamento do material genético não precisa apresentar DNA íntegro, extraível de diversas fontes, podendo ser vivos, decompostos ou fósseis, amplificando, assim, as sequências de DNA por ciclos térmicos, facilitando análises moleculares.
O sequenciamento por nanoporos é considerado uma tecnologia de segunda geração no NGS, propicia a leitura de longas sequências de DNA em tempo real com dispositivos portáteis, detectando variações na corrente iônica à medida que o DNA atravessa nanoporos.
O Sequenciamento de Nova Geração (NGS) oferece um processamento rápido e em larga escala, sendo necessário, posteriormente, uma biblioteca de DNA para comparação das sequências amplificadas, cuja sequência é identificada pelas cores dos dNTPs que foram adicionados a cada sequência.
O sequenciamento de Sanger é considerado o "padrão ouro" para determinação de sequências de DNA devido à sua alta precisão. Em pontos específicos do DNA, nucleotídeos modificados se anelam, interrompendo a síntese da cadeia complementar e gerando fragmentos de diferentes tamanhos, separados por eletroforese, revelando a sequência nucleotídica.

Desde o seu início, a reação em cadeia da polimerase (PCR) se tornou uma das ferramentas mais indispensáveis na biologia molecular para clonar pequenos fragmentos de DNA. No entanto, tradicionalmente as reações de PCR eram limitadas pelo tamanho máximo dos fragmentos amplificados. A PCR de longo alcance aumentou o tamanho dos amplicons de 3–5 kb para mais de 30 kb, modificando as polimerases. Esses avanços técnicos trouxeram a velocidade e a simplicidade da PCR para o mapeamento e sequenciamento genômico e facilitaram os estudos em genética molecular. Quando combinada com o sequenciamento, a PCR de longo alcance pode atingir maior sensibilidade e fornecer uma ferramenta mais rápida e econômica para detectar variações genéticas. Jia, H., Guo, Y., Zhao, W. et al. Long-range PCR in next-generation sequencing: comparison of six enzymes and evaluation on the MiSeq sequencer. Sci Rep 4, 5737 (2014).
Considerando as informações apresentadas e os conhecimentos adquiridos em aula e no livro didático, sobre PCR, avalie as asserções a seguir e a relação proposta entre elas. I. A reação de PCR dispensa o uso de uma enzima termoestável como a Taq polimerase, visto que as variações de temperatura do termociclador não afetam a estabilidade das fitas de DNA durante os ciclos de amplificação. PORQUE II. A Taq polimerase, derivada de bactérias termofílicas, é essencial para a PCR porque mantém sua atividade e integridade estrutural nas altas temperaturas da etapa de desnaturação, permitindo a síntese eficiente de novas fitas de DNA. A respeito dessas asserções, assinale a opção correta:
I. A reação de PCR dispensa o uso de uma enzima termoestável como a Taq polimerase, visto que as variações de temperatura do termociclador não afetam a estabilidade das fitas de DNA durante os ciclos de amplificação.
II. A Taq polimerase, derivada de bactérias termofílicas, é essencial para a PCR porque mantém sua atividade e integridade estrutural nas altas temperaturas da etapa de desnaturação, permitindo a síntese eficiente de novas fitas de DNA.
As asserções I e II são proposições verdadeiras, e a II é uma justificativa correta da I.
As asserções I e II são proposições verdadeiras, mas a II não é uma justificativa correta da I.
A asserção I é uma proposição verdadeira, e a II é uma proposição falsa.
A asserção I é uma proposição falsa, e a II é uma proposição verdadeira.
As asserções I e II são proposições falsas.

A terapia gênica é uma abordagem genética promissora que teve como objetivo inicial tratar doenças herdadas ou adquiridas com auxílio da substituição, ou modificação de genes alterados, ou ausentes, e pode ser definida como uma técnica para introduzir material genético para obter uma resposta terapêutica.

DOLINSKY, L. C. de. Engenharia Genética. Florianópolis–SC: Arqué, 2023.
Com relação às técnicas de terapia gênica, assinale a opção correta:
Na terapia gênica, o gene mutado é alvo de replicação.
A terapia pode ser aplicada em qualquer célula do corpo, pois o vetor irá diferenciar a célula após a infecção.
Podem ser utilizados vetores virais ou não virais, como partículas sintetizadas para carrear e transferir a informação de interesse.
A terapia gênica é uma técnica utilizada há décadas, especialmente empregada no cruzamento de animais para a seleção de características de interesse.
Para o sucesso da expressão do gene editado, o gene receptor precisa passar por fase de desnaturação, para abertura da dupla fita de DNA, seguida por anelamento e extensão.